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保健食品中免疫球蛋白IgG的测定Determination of immunoglobulin content in health food1 适用范围本方法规定了初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。本方法适用于初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。本方法最小检出量：2.0g。本方法最小检出浓度：当取样量0.1g，稀释至25mL，进样量20L时，最小检出浓度为0.5mg/mL。本方法最佳线性范围：0.21.0mg/mL。2 方法原理根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。3 试剂3.1 pH6.5 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液 A液3.2 pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液B液3.3 IgG标准贮备液：称取IgG标准品（Sigma化学公司）0.0100g,用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解并定容至10.0mL,摇匀，浓度为1.0mg/mL。3.4 IgG标准系列溶液：以IgG标准贮备液，用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液稀释成含IgG 0.2mg/mL, 0.4mg/mL, 0.6mg/mL, 0.8mg/mL, 1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。4 仪器和设备HPLC仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。5 分析步骤5.1 试样处理：称取0.1g（精确至0.001g）试样，用A液稀释至25.0mL,摇匀，通过0.45m微孔滤膜后进样。5.2.1 先用5倍柱体积的重蒸水洗柱，再用10倍柱体积的A液平衡柱，进样，按洗脱程序进行洗脱。5.2.2 HPLC参考条件 色谱柱：Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。 波长：280nm 移动相： A液B液 进行梯度洗脱，见下表。梯度洗脱表：TimeFlow mL/minA%B%Gradient00.410004.50.4100065.50.40100615.00.40100615.50.41000622.00.4100066 分析结果表示6.1 计算 式中 x：试样中IgG的含量，g/100g； m：试样的质量，g； C：被测液中IgG的含量，mg/mL；V：试样定容的体积，mL。6.2 结果表示：计算结
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