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文档简介
唾液淀粉酶活力的测定一、实验目的了解并掌握唾液淀粉酶活力的测定方法二、实验原理唾液淀粉酶能催化水解淀粉,生成分子较小的糊精和麦芽糖。本实验利用碘的呈色反应来测定唾液淀粉酶水解淀粉作用的速度,从而测定唾液淀粉酶活力的大小。三、实验仪器和试剂1. 仪器(1)多孔白瓷板 (2)50mL三角瓶 (3)恒温水浴锅(4)烧杯 (5)500mL容量瓶 (6)100mL容量瓶(7)漏斗 (8)吸管2. 试剂(1)原碘液:称取碘11g、碘化钾22g,加少量蒸馏水完全溶解后,定容至500mL,于棕色瓶中保存。(2)稀碘液:吸取原碘液2mL,加碘化钾20g,用蒸馏水溶解,定容至500mL,于棕色瓶保存。(3)标准“终点色”溶液准确称取氯化钴40.2439g、重铬酸钾0.4878g,加蒸馏水溶解并定容至500mL。准确称取铬黑T 40mg,加蒸馏水溶解并定容至100mL。取液80mL与液10mL混合,即为终点色。冰箱保存。(4)2可溶性淀粉溶液:称取烘干可溶性淀粉2.00g,先以少许蒸馏水混匀,倾入80mL沸水中,继续煮沸至透明,冷却后用蒸馏水定容至100mL。(需新鲜配制)(5)稀释100倍的唾液用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,然后让唾液流入量筒并稀释100倍,混合备用。(6)0.02mol/L、pH6.8磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液:称取磷酸氢二钠45.23g和柠檬酸8.07g,用蒸馏水溶解后定容至1000mL,配好后用酸度计或精密试纸校正pH。四、操作步骤(1)将“标准色”溶液滴于白瓷板的左上角空穴内,作为比较终点色的标准。(2)在50mL的三角瓶中,加入2可溶性淀粉溶液20mL,加缓冲液5mL在37水浴中平衡约10min,加入0.5mL稀释唾液,立即记录时间,充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.25mL,滴于预先充满此稀碘液(约0.75mL)的调色板空穴内,当空穴颜色由紫色变为棕红色,与标准色相同时,即为反应终点,记录时间T(min)。五、计算1mL唾液淀粉酶于37、pH 6.8的条件下,1h液化可溶性淀粉的克数,称为唾液淀粉酶的活力单位。酶活力单位=(60/T202n)/0.5n 唾液淀粉酶稀释倍数60 1h(60min)0.5 吸取待测唾液淀粉酶的量(mL)2淀粉浓度20 2可溶性淀粉溶液的量(mL)T 反应时间(min)六、注意事项1. 全部时间应该控制在22.5min,否则应改变稀释倍数,重
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