实验九、小麦萌发前后淀粉酶活力的比较.doc

实验九、小麦萌发前后淀粉酶活力的比较一、目 的 1学习分光光度计的原理和使用方法。 2学习测定淀粉酶活力的方法。 3了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。二、原 理 种子中贮藏的碳水化合物主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2（C6H10O5）nH2O-nC12H22O11 麦芽糖有还原性，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计法测定。 休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。 本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。三、器 材 125毫升刻度试管。 2吸管。 3乳体。 4离心机和离心管。 5分光光度计。 6恒温水浴。 7、容量瓶50ml8、电磁炉四、试 剂 1. 0.1标准麦芽糖溶液 20毫升：精确称量100毫克麦芽糖，用少量水溶解后，移入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。 2pH 6.9，0.02摩尔L磷酸缓冲液 100毫升 3l淀粉溶液 100毫升：1克可溶性淀粉溶于100毫升 0.02摩尔L磷酸缓冲液，其中含有 0.006摩尔L氯化钠。 4l3,5-二硝基水杨酸试剂: 1g 3,5-二硝基水杨酸溶于20毫升2摩尔L的氢氧化钠溶液和50毫升水中；再加人30克酒石酸钾钠，定客至100毫升。若溶液混浊，可过滤。 5l氯化钠溶液 300毫升 6海砂 5克五、操作步骤 1种子发芽：（如果是绿豆芽，则只需要24就可以） 小麦种子浸泡2.5小时后，放人25恒温箱内或在室温下发芽。 2酶液提取： 取发芽第三天或第四天的幼苗（芽长约1cm）15株，放人乳钵内，加海砂 200毫克，加 1氯化钠溶液10毫升，用力磨碎。将匀浆倒入离心管中，用5mL1%氯化钠溶液分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取1520min，每隔数分钟搅1次，使其充分提取。然后在3500-4000r/min转速下离心7-10min，将上清液倒入量筒中并记录上清液的体积。进行酶活力测定时，将酶提取液稀释10倍（是否可取5ml50ml稀释？）。 取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤同上）。 3酶活力测定： （1）取25毫升刻度试管4支。编号。按下表要求加人各试剂（各试剂须25预热10分钟）。 将各管混匀，放在25，水浴中保温3分钟后，立即向各管中加人13,5-二硝基水杨酸溶液2毫升。（2）取出各试管，放人沸水浴中加热5分钟。冷至室温，加水稀释至25毫升。将各管充分混匀。 （3）用空白管作对照；在500毫微米处测定各管的光吸收值，将读数填人上表。 4计算根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：A标准A未知C标准C未知：则C（酶液管浓度）A酶C标准A标准 式中C代表浓度；A为光吸收值。 六、讨论 大凡禾谷类植物都含有淀粉，有淀粉存在就应该有淀粉酶，只是含酶的多少而已，而淀粉酶活力的大小与萌发前后、时间的长短都有关系。在取样上尽量让反应的时间缩短，以减少酶的损失。七、小结通过对以上谷物发芽前后酶活力的测定和计算,可以看出谷物均含有酶都能将淀粉水解成单糖，发芽后的谷物酶活力明显比未发芽的高。（尤以小麦发芽后的活力最强，说明在啤酒生产中应该要用发芽的麦芽为主要原料；而其它的物质如谷子、玉米等应为辅料。绿豆淀粉酶含量太低且成本太高，不宜作为生产啤酒的原料。）琼州学院实验项目卡生命科学 系 生化 实验室 开设日期_年_月_日实验项目小麦萌发前后淀粉酶活力的比较面向专业课程性质1、必修2、选修实验类型1、还未开设的新实验2、手段更新的实验3、已开设过的实验本实验学时数4实验分组概况所用主要仪器名 称型号规格数量名 称型号规格数量有刻度的试管25ml24试管及试管架若干乳钵6容量瓶各规格分光光度计6电磁炉1恒温水浴箱1量筒10ml6离心机2滴管若干所用主要药品名 称纯度级别数量名 称纯度级别数量麦芽糖0.1%10ml*N淀粉1%10ml*N0.02mol/L磷酸缓冲液 PH6.90.2N磷酸二氢钾10ml*N氯化钠1%20ml*N0.2N磷酸氢二钾10ml*N海砂5g*