总糖含量的测定.doc

实验二 总糖含量的测定一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 g/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 g左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 g/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。当日配制使用。3.材料：淀粉四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号1234567葡萄糖标准液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（g）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（g）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml3.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（g）。五、结果处理 C V总 D样品含糖量（%）= 100 W V测 106其中：C在标准曲线上查出的糖含量（g），V总提取液总体积（ml），V测测定时取用体积（ml），D稀释倍数，W样品重量（g），106样品重量单位由g换算成g的倍数六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则