09科技前沿讲座(三聚氰胺话题).ppt

三聚氰胺的用途 合成工艺及其分析检验方法简介 关于石家庄三鹿奶粉事件引发的话题 湘潭大学化工学院段正康2009 9 28 三鹿问题奶粉系列刑事案件审判决结果一览 田文华 原三鹿集团董事长 生产 销售伪劣产品罪 无期徒刑并处罚金2468 7411万元 张玉军 奶贩 以危险方法危害公共安全罪 死刑 张彦章 奶贩 以危险方法危害公共安全罪无期徒刑 高俊杰 劣质奶生产者 以危险方法危害公共安全罪 死刑缓期两年 薛建忠 行唐县化工试剂店店主 以危险方法危害公共安全罪 无期徒刑耿金平 正定金河奶源基地负责人 生产 销售有毒食品罪 死刑 并处没收个人全部财产 石家庄三鹿集团生产 销售伪劣产品罪罚金4937 4822万元 讲座提纲 一 概述 三聚氰胺的性质与用途三聚氰胺事件的起因二 三聚氰胺的合成工艺三 三聚氰胺假蛋白原理四 三聚氰胺奶粉事件五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 七 食品中三聚氰胺含量新开发的分析方法八 三聚氰胺含量主要分析检测方法 原理 过程与分析条件1 液相色谱及其离子对色谱分析原理2 高效液相色谱分析法 LC UV 二极管阵列检测器 DAD 3 高效液相色谱 质谱法 LC MS 一 概述 三聚氰胺的性质与用途 1 三聚氰胺 melamine 简称三胺 结构式 学名三氨三嗪 别名蜜胺 氰尿酰胺 三聚酰胺 分子式 C3N6H6 C3N3 NH2 3 分子量 126 12 是一种重要的氮杂环有机化工原料 三聚氰胺显弱碱性 能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐 一 概述 三聚氰胺的性质与用途 2 在强酸或强碱液中 三聚氰胺发生水解 胺基逐步被羟基取代 生成三聚氰酸二酰胺 三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸 三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物 三聚氰胺与醛反应制成树脂 三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料 防火耐热且有很高的稳定性 用于生产塑料 厨房用具 防火纤维 商业滤膜 胶水和阻燃剂 部分亚洲国家 也被用来制造化肥 一 概述 三聚氰胺事件的起因 1 三聚氰胺是一种重要的化工材料 主要用于制造三聚氰胺树脂 是建筑业中常用的防火材料 本来与食品 饲料行业毫不相干 但是发生在美国的数起饲料致死宠物的事件使两者联系在一起 经过调查 发现这些进口饲料中含有一定浓度的三聚氰胺 对此 美国食品药品监督管理局 FDA 要求饲料厂商提供三聚氰胺的检测报告 因此 三聚氰胺事件也使得分析领域掀起了检测方法的开发热潮 艾杰尔科技有限公司具有较高的敏感度 迅速开发了优越的检测方法 一 概述 三聚氰胺事件的起因 2 三聚氰胺事件变成社会热点话题是在07年3月份 美国大量召回被三聚氰胺污染的宠物饲料 起因于宠物饲料致死猫狗的事件 据不完全统计 北美地区仅美国因食用有毒饲料而死亡的宠物就有上万只 相关投诉不计其数 美国食品药品管理局调查显示 在回收的宠物食品 死亡动物的尿液结晶和肾脏细胞中都发现有三聚氰胺 研究人员还发现 回收宠物食品所用的小麦谷蛋白添加物中有较高浓度的三聚氰胺存在 一 概述 三聚氰胺事件的起因 3 尽管国内尚无动物中毒死亡或产生不良反应的报道 对于三聚氰胺的毒性也有些争议 但三聚氰胺不是饲料原料 也不是国家允许使用的饲料添加物 某些不法厂商添加三聚氰胺主要是为了增加产品的表观蛋白质含量 三聚氰胺被广泛的添加到淀粉 谷朊粉 蛋白粉中 致使不仅是饲料生产商 其它的食品工厂也需要三聚氰胺的检测以保证他们产品的安全 二 三聚氰胺的合成工艺 1 三聚氰胺最早被德国科学家李比希于1834年合成 早期合成使用双氰胺法 由电石 CaC2 制备氰胺化钙 CaCN2 氰胺化钙水解后二聚生成双氰胺 dicyandiamide 再加热分解制备三聚氰胺 CaC2 N2 CaCN2CaCN2 H2O C2H4N4 Ca OH 2C2H4N4 C3H6N6 三 三聚氰胺的合成工艺 2 目前因为电石的高成本 双氰胺法已被淘汰 与该法相比 尿素法成本低 目前较多采用 尿素以氨气为载体 硅胶为催化剂 在380 400 温度下沸腾反应 先分解生成氰酸 并进一步缩合生成三聚氰胺 6 NH2 2CO C3H6N6 6NH3 3CO2生成的三聚氰胺气体经冷却捕集后得粗品 然后经溶解 除去杂质 重结晶得成品 尿素法生产三聚氰胺每吨产品消耗尿素约3800kg 液氨500kg 三 三聚氰胺的合成工艺 3 按照反应条件不同 三聚氰胺合成工艺又可分为高压法 7 10MPa 370 450 液相 低压法 0 5 1MPa 380 440 液相 和常压法 0 3MPa 390 气相 三类 国外三聚氰胺生产工艺大多以技术开发公司命名 如德国巴斯夫 BASFProcess 奥地利林茨化学法 ChemicalLinzProcess 鲁奇法 LurgiProcess 美国联合信号化学公司化学法 AlliedSignalChemical 日本新日产法 NissanProcess 荷兰斯塔米卡邦法 既DSM法 等 这些生产工艺按合成压力不同 可基本划分为高压法 低压法和常压法三种工艺 目前世界上技术先进 竞争力较强的主要有日本新日产Nissan法和意大利Allied Eurotechnica的高压法 荷兰DSM低压法和德国BASF的常压法 三 三聚氰胺的合成工艺 4 我国三聚氰胺生产企业多采用半干式常压法工艺 该方法是以尿素为原料0 1MPa以下 390 左右时 以硅胶做催化剂合成三聚氰胺 并使三聚氰胺在凝华器中结晶 粗品经溶解 过滤 结晶后制成成品 三 三聚氰胺假蛋白 原理 1 蛋白质主要是氨基酸 由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷 三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加剂 以提升食品检测中的蛋白质含量指标 因此三聚氰胺也被人称为 蛋白精 三 三聚氰胺假蛋白 原理 2 蛋白质主要由氨基酸组成 其含氮量一般不超过30 而三聚氰胺的分子式含氮量为66 左右 通用的蛋白质测试方法 凯氏定氮法 是通过测出含氮量来估算蛋白质含量 因此 添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高 从而使劣质食品通过食品检验机构的测试 有人估算在植物蛋白粉和饲料中使测试蛋白质含量增加一个百分点 用三聚氰胺的花费只有真实蛋白原料的1 5 三聚氰胺作为一种白色结晶粉末 没有什么气味和味道 掺杂后不易被发现 四 三聚氰胺奶粉事件 1 许多人喝牛奶是为了补钙 不过如果留心一下国内鲜牛奶包装上的标注 一般没有列出钙的含量 标明的营养成分含量只有两种 脂肪和蛋白质 鲜牛奶有全脂 低脂 脱脂之分 其脂肪含量各不相同 而且在脂肪被视为健康杀手的今天 一般人不会在乎脂肪含量是否达标 蛋白质才是牛奶中的主要营养成分 鲜牛奶包装上都会注着蛋白质 氨基酸 含量为100毫升 2 95克 以表明符合鲜牛奶的国家标准 100毫升 2 95克 四 三聚氰胺奶粉事件 2 各个品牌奶粉中蛋白质含量为15 20 在超市包装上还有标示为10 20 的 蛋白质中含氮量平均为16 以某合格牛奶蛋白质含量为2 8 计算 含氮量为0 44 某合格奶粉蛋白质含量为18 计算 含氮量为2 88 而三聚氰胺含氮量为66 6 是牛奶的151倍 是奶粉的23倍 每100g牛奶中添加0 1克三聚氰胺 就能提高0 4 蛋白质 四 三聚氰胺奶粉事件 3 生鲜真牛奶的蛋白质含量一般在3 以上 所以一般都能达到国家标准 除非往原奶中兑水 要提防有人拿水卖出奶的价钱 就有必要在收购生鲜牛奶时检测蛋白质的含量 根据蛋白质的化学性质 有几种检测方法 各有优缺点 四 三聚氰胺奶粉事件 4 食品工业上普遍采用的 被定为国家标准的是凯氏定氮法 这是19世纪后期丹麦人约翰凯达尔发明的方法 原理很简单 蛋白质含有氮元素 用强酸处理样品 让蛋白质中的氮元素释放出来 测定氮的含量 就可以算出蛋白质的含量 牛奶蛋白质的含氮率约16 根据国家标准 把测出的氮含量乘以6 38 就是蛋白质含量 四 三聚氰胺奶粉事件 5 凯氏定氮法实际上测的不是蛋白质含量 而是通过测氮含量来推算蛋白质含量 显然 如果样品中还有其他化合物含有氮 这个方法就不准确了 在通常情况下 这不是个问题 因为食物中的主要成分只有蛋白质含有氮 其他主要成分 碳水化合物 脂肪 都不含氮 因此凯氏定氮法是一种很准确的测定蛋白质含量的方法 但是如果有人往样品中偷加含氮的其他物质 就可以骗过凯氏定氮法获得虚假的蛋白质高含量 用兑水牛奶冒充原奶 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 1 蛋白质是含氮的有机化合物 食品与硫酸和催化剂一同加热消化 使蛋白质分解 分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵 然后碱化蒸馏使氨游离 用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定 根据酸的消耗量乘以换算系数 即为蛋白质含量 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 2 1 有机物中的胺根在强热和CuSO4 浓H2SO4作用下 硝化生成 NH4 2SO4反应式为 CuSO4 2NH2 H2S04 2H NH4 2S042 在凯氏定氮器中与碱作用 通过蒸馏释放出NH3 收集于H3BO3溶液中反应式为 NH4 2SO4 2NaOH 2NH3 2H2O Na2SO42NH3 4H3BO3 NH4 2B4O7 5H2O 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 3 3 用已知浓度的H2SO4 或HCI 标准溶液滴定 根据HCI消耗的量计算出氮的含量 然后乘以相应的换算因子 既得蛋白质的含量反应式为 NH4 2B4O7 H2SO4 5H2O NH4 2SO4 4H3BO3 NH4 2B4O7 2HCl 5H2O 2NH4Cl 4H3BO3 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 4 试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制 硫酸铜 硫酸钾 硫酸 2 硼酸溶液 混合指示液 1份0 1 甲基红乙醇溶液与5份0 1 溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合 也可用2份0 1 甲基红乙醇溶液与1份0 1 次甲基蓝乙醇溶液临用时混合 40 氢氧化钠溶液 0 025mol L硫酸标准溶液或0 05mol L盐酸标准溶液 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 5 样品处理 精密称取0 2 2 0g固体样品或2 5g半固体样品或吸取10 20ml液体样品 约相当氮30 40mg 移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中 加入0 2g硫酸铜 3g硫酸钾及20毫升硫酸 稍摇匀后于瓶口放一小漏斗 将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上 小火加热 待内容物全部炭化 泡沫完全停止后 加强火力 并保持瓶内液体微沸 至液体呈蓝绿色澄清透明后 再继续加热0 5小时 取下放冷 小心加20ml水 放冷后 移入100ml容量瓶中 并用少量水洗定氮瓶 洗液并入容量瓶中 再加水至刻度 混匀备用 取与处理样品相同量的硫酸铜 硫酸钾 硫酸铵同一方法做试剂空白试验 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 6 按图装好定氮装置 于水蒸气发生器内装水约2 3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸 以保持水呈酸性 加入数粒玻璃珠以防暴沸 用调压器控制 加热煮沸水蒸气发生瓶内的水 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 7 在接收瓶内加入10ml2 硼酸溶液及混合指示剂1滴 并使冷凝管的下端插入液面下 吸取10 0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室 并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内 塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞 将10ml40 氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯 提起玻璃塞使其缓慢流入反应室 立即将玻璃盖塞紧 并加水于小玻璃杯以防漏气 夹紧螺旋夹 开始蒸馏 蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内 蒸馏5min 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 8 移动接收瓶 使冷凝管下端离开液皿 再蒸馏1min 然后用少量水冲洗冷凝管下端外部 取下接收瓶 以0 01N硫酸或0 01N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点 同时吸取10 0ml试剂空白消化液按上述相同方法操作 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 9 计算 X V1 V2 N 0 014 m 10 100 F 100X 样品中蛋白质的含量 g V1 样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积 ml V2 试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积 ml N 硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度 0 014 1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数 m 样品的质量 体积 g ml F 氮换算为蛋白质的系数 蛋白质中的氮含量一般为15 17 6 按16 计算乘以6 25即为蛋白质 乳制品为6 38 面粉为5 70 玉米 高粱为6 24 花生为5 46 米为5 95 大豆及其制品为5 71 肉与肉制品为6 25 大麦 小米 燕麦 裸麦为5 83 芝麻 向日葵为5 30 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 10 凯氏定氮法分析注意事项 1 样品应是均匀的 固体样品应预先研细混匀 液体样品应振摇或搅拌均匀 2 样品放入定氮瓶内时 不要沾附颈上 万一沾附可用少量水冲下 以免被检样消化不完全 结果偏低 3 消化时如不容易呈透明溶液 可将定氮瓶放冷后 慢慢加入30 过氧化氢 H2O2 2 3ml 促使氧化 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 11 注意事项 4 在整个消化过程中 不要用强火 保持和缓的沸腾 使火力集中在凯氏瓶底部 以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下 使氮有损失 5 如硫酸缺少 过多的硫酸钾会引起氨的损失 这样会形成硫酸氢钾 而不与氨作用 因此 当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时 要增加硫酸的量 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 12 注意事项 6 加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点 硫酸铜为催化剂 硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂 7 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色 在中性溶液中呈灰色 在酸性溶液中呈红色 如果没有溴甲酚绿 可单独使用0 1 甲基红乙醇溶液 8 氨是否完全蒸馏出来 可用PH试纸试馏出液是否为碱性 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 13 注意事项 9 吸收液也可以用0 01当量的酸代表硼酸 过剩的酸液用0 01N碱液滴定 计算时 A为试剂空白消耗碱液数 B为样品消耗碱液数 N为碱液浓度 其余均相同 10 以硼酸为氨的吸收液 可省去标定碱液的操作 且硼酸的体积要求并不严格 亦可免去用移液管 操作比较简便 五 凯氏定氮法分析蛋白质分析原理与过程 14 注意事项 11 向蒸馏瓶中加入浓碱时 往往出现褐色沉淀物 这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应 生成氢氧化铜 经加热后又分解生成氧化铜的沉淀 有时铜离子与氨作用 生成深兰色的铜氨络合物 Cu NH3 4 2 12 这种测算方法本质是测出氮的含量 再作蛋白质含量的估算 只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量 六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 1 常用的一种冒充蛋白质的含氮物质是尿素 不过尿素的含氮量不是很高 46 6 溶解在水中会发出刺鼻的氨味 容易被觉察 而且用一种简单的检测方法 格里斯试剂法 就可以查出牛奶中是否加了尿素 所以后来造假者就改用三聚氰胺了 三聚氰胺含氮量高达66 6 含氮量越高意味着能冒充越多的蛋白质 白色无味 没有简单的检测方法 要采用 高性能液体色谱 这种高科技去检测 是理想的蛋白质冒充物 六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 2 三聚氰胺是一种重要的化工原料 广泛用于生产合成树脂 塑料 涂料等 目前的价格大约是1吨12000元 在生产三聚氰胺过程中 会出现废渣 废渣中还含有70 的三聚氰胺 造假者用来冒充蛋白质的就是三聚氰胺渣 有些 生物技术公司 在网上推销 蛋白精 其实就是三聚氰胺渣 在饲料 奶制品中添加 蛋白精 冒充蛋白质 六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 3 三聚氰胺是怎么加到牛奶中的呢 有两种可能途径 一种是奶站加到原奶中 这样做有一定的局限 因为三聚氰胺微溶于水 常温下溶解度为3 1克 升 也就是说 100毫升水可以溶解0 31克三聚氰胺 含氮0 2克 相当于1 27克蛋白质 由此可以算出 要达到100毫升 2 95克蛋白质的要求 100毫升牛奶最多只能兑75毫升水 并加入0 54克三聚氰胺 另一种途径是在奶粉制造过程中加入三聚氰胺 这就不受溶解度限制了 想加多少都可以 六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 4 三聚氰胺之所以被不法之徒当成 蛋白精 来用 可能是因为觉得它毒性很低 吃不死人 大鼠口服三聚氰胺 半致死量 毒理学常用指标 指能导致一半的实验对象死亡 大约为每千克体重3克 和食盐相当 大剂量喂食大鼠 兔 狗也未观察到明显的中毒现象 六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 5 三聚氰胺进入体内后似乎不能被代谢 而是从尿液中原样排出 但是 动物实验也表明 长期喂食三聚氰胺能出现以三聚氰胺为主要成分的肾结石 膀胱结石 我们无法拿人体做试验 而即使患肾结石的人曾经服用过偷加了三聚氰胺的食物 也很难确定三聚氰胺就是罪魁祸首 除非患者的食物来源很单一 例如只吃配方奶粉的婴儿 在中国 没想到还真有人敢拿婴儿来做试验 不但证明了它真的出现各种结石 而且它也能吃死人 六 三聚氰胺冒充蛋白质的 原因 6 有人认为既然蛋白质检测法的缺陷导致了致命的造假 还不如干脆取消蛋白质检测 默许牛奶兑水得了 其实凯氏定氮法的缺陷并不难弥补 只要多一道步骤即可 先用三氯乙酸处理样品 三氯乙酸能让蛋白质形成沉淀 过滤后 分别测定沉淀和滤液中的氮含量 就可以知道蛋白质的真正含量和冒充蛋白质的氮含量 这是生物化学的常识 也早成为检测牛奶氮含量的国际标准 ISO8968 蛋白精 骗局在国内出现已有一些年头 三鹿奶粉 事件不过是把这一 行业秘密 摆在了公众面前 只有改进国家标准 堵住漏洞 才能挽回人们对国产乳业的信心 七 食品中三聚氰胺含量新开发的分析方法 1 GC MS法测定动物食品中的三聚氰胺2 超高效液相色谱 电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺3 反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量4 高效液相色谱 二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺含量5 高效液相色谱 四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量6 固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺含量7 液相色谱串联质谱法 LC MS 分析宠物食品中三聚氰胺8 液相色谱 串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法 过程与分析条件 1 1 液相色谱及其离子对色谱简介2 高效液相色谱 UV 二极管阵列监测器 DAD 3 高效液相色谱 质谱法 LC MS 分析过程 食品中三聚氰胺的提取与净化 分离色谱柱分离 检测器检测 根据信号大小确定含量 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 2 1 液相色谱简介色谱是流动相载着样品在固定相上实现分离 以液体为流动相的统称为液相色谱 包括柱层析 纸层析 薄板层析和现在通用的高效 压 液相色谱等 液相色谱根据分离原理分为 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱和凝胶色谱 它克服了通常意义上的气相色谱要求样品挥发 热稳定性好的局限 特别适应于大分子量的高分子化合物和离子型化合物的分析 根据流动相和固定相的相对极性 又可分为正向色谱和反相色谱 正相色谱流动相的极性小雨固定相的极性 一般的正相分配色谱 选用正乙烷 异丙醇等极性较小的溶剂作流动相 反向色谱 选用H2O CH3OH或H20 CH3CN作流动相 如是离子交换色谱 则用水作流动相 添加磷酸二甲酸氢钾等缓冲溶液作离子交换试剂 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 3 1 液相色谱中离子对色谱介绍无机离子以及离解很强的有机离子通常可以采用离子交换色谱或离子排斥色谱进行分离 有很多大分子或离解较弱的有机离子需要采用通常用于中性有机化合物分离的反相 或正相 色谱 然而 直接采用正相或反相色谱又存在困难 因为可离解的有机化合物在正相色谱的硅胶固定相上吸附太强 致使被测物质保留值太大 出现拖尾峰 有时甚至不能被洗脱 在反相色谱的非极性 或弱极性 固定相中的保留又太小 在这种情况下 就可采用离子对色谱 离子对试剂 阴离子 采用烷基胺类 阳离子 采用烷基磺酸类 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 4 1 离子对色谱分离原理在离子色谱原理作中 又分为离子交换 离子排斥和离子对色谱 离子对色谱也称离子相互作用色谱 是在流动相中加入适当的具有与被测离子相反电荷的离子 即 离子对试剂 使之与被测离子形成中性的离子对化合物 此离子对化合物在反相色谱柱上被保留 保留的大小主要取决于离子对化合物的解离平衡常数和离子对试剂的浓度 离子对色谱也可采用正相色谱的模式 即可以用硅胶柱 但不如反相色谱效果好 多数情况下采用反相色谱模式 所以离子对色谱也常称反相离子对色谱 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 5 2 三聚氰胺HPLC DAD检测方法三聚氰胺是强极性化合物 在传统的反相C18柱上保留很差 需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离 按照美国食品药品监督管理局 FDA 的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法 采用艾杰尔 Agela ASB系列亲水色谱柱 可以得到良好的分离效果 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 6 2 三聚氰胺HPLC DAD检测方法三聚氰胺的提取与净化三聚氰胺呈弱碱性 弱阳离子化合物 净化过程一般应选择阳离子交换柱 混合型的阳离子交换柱 PCX 通过将磺酸基团 SO3H 键合在极性高聚物聚苯乙烯 二乙烯苯 PEP 吸附剂上 具有阳离子交换和反相吸附两种机理 离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX 北京艾杰尔科技有限公司 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 7 3 三聚氰胺HPLC DAD检测方法称取饲料样品5g 加入50ml0 1 三氯乙酸提取液 充分混匀 加入2mL2 乙酸铅溶液 超声20min 然后取部分溶液转移至10mL离心管中 8000rpm min离心10min 取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱 PCX 3 净化 PCX小柱 60mg 3mL a 活化及平衡 3mL甲醇 3mL水b 上样 加入提取液3mLc 淋洗 3mL水 3mL甲醇 弃去淋洗液并将小柱抽干 d 洗脱 5mL5 氨化甲醇 v v 洗脱 5 氨化甲醇的配制 5mL氨水 95mL甲醇 e 浓缩 50 氮气吹干 20 甲醇 水定容至2mL HPLC分析 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 8 4 三聚氰胺HPLC DAD检测方法 LC UV紫外 仪器与分析条件Agilent1100高效液相色谱仪 美国 Agilent公司 二极管阵列检测器 DAD 检测波长240nm 柱温 40 艾杰尔 Agela ASB系列亲水色谱分离柱 1 AgelaVenusilTMASBC18 4 6 250mm 缓冲液 10mM柠檬酸 10mM庚烷磺酸钠 流动相 缓冲溶液 乙腈 85 15 流速 1 0mL min 2 AgelaVenusilTMASBC8 4 6 250mm 流动相 缓冲液 乙腈 85 15 缓冲液 10mM柠檬酸 10mM辛烷磺酸钠 调pH为3 0 流速 1 0mL min 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 9 三聚氰胺LC MS检测方法由于FDA公布的HPLC UV方法中 流动相添加了离子对试剂 因此限制了液质联用方法的使用 但不用离子对试剂色谱方法 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差 不能得到较好的分离定量 基于此问题 艾杰尔科技公司自主开发了新的方法 采用艾杰尔 Agela ASB系列亲水色谱柱 不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离 因此方法中流动相不含离子对试剂 可以用于质谱检测 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分析条件 10 与FDA2007年4月公布的 UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation HPLC UV 相比较 该方法大大降低了最低检测限 MSD 0 5ppm UV 2ppm 提高了检测灵敏度 八 三聚氰胺含量主要分析检测方法过程与分