讲座——Zorbax柱技术.pdf

Agilent Technologies 1页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 2003年3月24日 28日 创新的Zorbax柱技术 应用和方法开发 杭州 苏州 无锡 Agilent Technologies 2页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 1 LC色谱柱技术及ODS柱 2 创新的Zorbax色谱柱及应用 3 HPLC方法开发与优化 创新的Zorbax柱技术 应用和方法开发 Agilent Technologies 3页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 3 1 LC色谱柱技术及ODS柱 分离模式的选择 样品 溶于有机溶剂 溶于水 溶于四氢呋喃 非离子化 离子化 溶于有机溶剂 溶于水 溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇 水 或乙腈或乙腈 水 用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式 用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式 抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式 用硅胶的正相模式 离子交换模式 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 大孔填料的离子交换模式 用大孔填料的反相模式 分子量 2 000 分子量 2 000 Agilent Technologies 4页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 反相分配色谱 极性 固定相 流动相 固定相 极性 流动相 己烷 庚烷 非极性 极性物质后出峰 正相色谱20 反相色谱 80 3 1 LC色谱柱技术及ODS柱 正相 pH 7 600C 碳覆盖率 12 表面积 180m2 g 粒径 3 5 5 m 孔径 80 键合试剂 双齿 C18 封端 双 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 34页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 高pH下的反相 HPLC 增加游离碱性化合物在反相固定相上的保留 改善选择性 扩充LC MS的使用范围 改善样品溶解度 对部分化合物进行离子交换 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 35页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 高pH下 键合相稳定性 硅胶溶解量 mg 色谱柱 4 6 x 150 mm 5 mm 冲洗 50 ACN 50 0 02 M 磷酸钾缓冲液 pH 11 流速 1 5 mL min 温度 25 C 检测 钼酸硅显色反应测硅酸盐浓度 淋洗液体积 L Eclipse XDB C8 Eclipse XDB C18 Extend C18 0 2 4 6 8 10 12 14 16 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 36页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 高pH下 Extend C18 可改善碱性成分峰形 高pH下 碱性成分的保留增加 色谱柱 ZORBAX Extend C18 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 30 缓冲液 70 MeOH pH 7 缓冲液20 mM Na2HPO4 pH 11缓冲液 20 mM TEA 流速 1 0 mL min 温度 RT检测器 UV 254 nm Extend C18 pH 11 0 5 1 2 3 4 5 Time min 7 6 Extend C18 pH 7 tR 8 5 0 5 10 1 2 3 4 Time min 6 5 7 tR 11 4 样品 1 Maleate 马来酸盐 2 Scopolamine 东莨菪碱 pKa 7 6 3 PseudoEphedrine 假麻黄碱 pKa 9 8 4 Doxylamine 抗敏安 多西拉敏 pKa 9 2 5 Chlorpheniramine 氯苯吡胺pKa 9 1 6 Triprolidine 苯丙烯啶pKa 6 5 7 Diphenhydramine苯海拉明 pKa 9 0 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 37页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 高pH下分析金丝桃素 色谱柱 ZORBAX Extend C18 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 10 20 mM TEA pH 11 90 MeOH 流速 1 5 mL min 温度 30 C 检测器 UV 254 nm Hypericin 金丝桃素在碱性溶液和有机碱中溶解性最好 高pH下Hypericin 金丝桃素的灵敏度提高了两倍 Hypericin 金丝桃素 pH 7制备样品 Hypericin 金丝桃素 pH 11制备样品 0 0 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5 4 04 5 5 0 Time min 10 5 0 M A U 10 5 0 M A U 0 0 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5 4 04 5 5 0 Time min 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 38页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 0 0 2 5 Time min 0 0 2 5 Time min 高pH下分析苯酚 SB C8 Extend C18 流动相 35 10 mM NH4OH NaOH pH 11 65 MeOH 流动相 20 H2O 80 MeOH 流速 1 0 mL min检测器 UV 254 nm温度 RT N 13279 N 13831 可使用氨流动相进行高效分析 在LC MS上使用时 兼容性 灵敏度高 ESI MS中 苯酚可电离 Phenol pKa 9 5 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 39页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 高pH改善柱效和峰形 普鲁卡因酰胺 样品 1 Procainamide 普鲁卡因酰胺 2 2 N AcetylProcainamide N 乙酰基普鲁卡因酰胺 3 3 N propionylProcainamide N 丙酰基普鲁卡因酰胺 50 20 mMTEA pH 11 50 MeOH50 25 mMNa2HPO4 pH 7 0 50 MeOH 塔板数 1 4903 2 7621 3 7567 0 0 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5 2 1 3 Time min 塔板数 1 9475 2 8823 3 8794 0 0 2 5 5 0 7 5 2 1 3 Time min 色谱柱 ZORBAX Extend C18 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 See Above 流速 1 0 mL min 检测器 UV 254 nm 温度 RT 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 ZORBAX Extend C18 Agilent Technologies 40页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 键合相 适用pH范围 StableBond pH 1 6 1 使用空间位阻大的硅烷 2 未 封端 Eclipse XDB pH 2 9 1 致密键合的二甲基烷基硅烷 2 专利技术双 封端 Bonus RP pH 2 8 1 极性烷基固定相 2 使用空间位阻大的硅烷 3 三封端 Extend C18 pH 2 11 5 1 独特的双齿键合结构 2 双封端 Si O Si O Silica Support C18C18 Si O NH O Silica based 色谱柱Packing with Alkyl amide Stationary Phase O R R Si OH Si O Si R R R O OH R CH CH CH CH CH CH O SiO O O O Si Si Si CH CH CH CH CH CH Si 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 OR Si Si O Si OR R 1 CH3 CH3 CH3 CH3 R R 1 CH3 R 1 R1 R 1 CH3 R1 1 1 Si Si PG PG PG R 1 R 1 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 四项Zorbax创新的键合技术 Agilent Technologies 41页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 尝试Bonus RP 碱性物质保留不当 当碱性物质色谱峰峰形是首要考虑因素时 在pH 6 8使用时 色谱峰峰形较好 低 pH 下 柱寿命长 色谱峰峰形好 StableBondEclipse XDB 高 pH 下尝试Extend 适用于低有机相 可用于100 水相 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 四项Zorbax创新的键合技术 Agilent Technologies 42页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 Zorbax 产品的具体应用 常规小分子分离 StableBond Eclipse XDB Bonus RP Extend 亲水化合物分离 用于 100 含水流动相的反相色谱柱 SB Aq 低 pH Bonus RP 中 pH 疏水化合物分离 StableBond色谱柱 低 pH 高温 Extend C18 高 pH 室温 碳水化合物分析 Zorbax 碳水化合物分析色谱柱 手性分离 Chiradex 色谱柱 Ultron ES OVM Ultron ES 胃蛋白酶色谱柱 肽或蛋白质分离 300SB和300Extend 80 A 固定相也可用于肽的分离 GF 系列尺寸排阻色谱柱 Eclipse AAA 色谱柱 氨基酸分析 最新 Poroshell 300SB C18 C8 和 C3 蛋白质分析柱 双链DNA分离 Eclipse 双链DNA分析色谱柱 寡核苷酸分离 Zorbax Oligo 色谱柱 IEX RP 色谱柱 300Extend C18 3 2创新的Zorbax色谱柱及应用 四项Zorbax创新的键合技术 Agilent Technologies 43页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 1 LC色谱柱技术及ODS柱 2 创新的Zorbax色谱柱及应用 3 HPLC方法开发与优化 创新的Zorbax柱技术 应用和方法开发 Agilent Technologies 44页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agilent Technologies 45页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 pH 1 3 时碱性组分峰形较好 方法重现性好 非 极性极性可电离 萘苯甲醇苯甲酸 苊硝基苯苯甲酰基苯胺 pH 3 pH 7 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Time min Time min Time min 3 3 HPLC方法开发与优化 样品与pH值 大部分样品 可电离 Agilent Technologies 46页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 样品的pKa与pH对峰形的影响 色谱柱 ZORBAX SB C8 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 40 5 mM KH2PO4 60 ACN 流速 1 0 mL min 温度 RT 0 1 2 3 4 5 6 7 89 100 1 2 3 4 5 6 7 89 10 Time min Time min pH 4 4pH 3 0 Ibuprofen 异丁苯丙酸 pKa 4 4 CH3CHCOOH CH2CH CH3 2 尽量避免使用与待测物的pKa相近的流动相 否则可能出现不一致的拖尾峰 3 3 HPLC方法开发与优化 样品与pH值 Agilent Technologies 47页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 低pH下碱性组分峰形较佳 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB C8 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 85 25 mM Na2HPO4 15 ACN 流速 1 0 mL min 温度 35 C USP TF 5 4 1 33 pH 3 0 pH 7 0USP TF 5 4 2 35 Time min 0 2 5 5 0 1 2 3 4 5 Time min 0 02 55 0 3 5 4 2 1 在低pH下 硅胶硅羟基上的质子化后 碱性组分峰形较佳 样品 Amphetamine 苯丙胺 1 Phenylpropanolamine 去甲麻黄碱pKa 9 4 2 Ephedrine 麻黄素pKa 9 6 3 Amphetamine 苯丙胺pKa 9 9 4 MethAmphetamine 脱氧麻黄碱pKa 10 1 5 Phentermine 苯丙胺pKa 10 1 3 3 HPLC方法开发与优化 样品与pH值 Agilent Technologies 48页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 避免样品过载 酸洗以改善色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agilent Technologies 49页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 05 10 15 Time min OCH3CHCH2NHCH CH3 2 OH Rx SIL硅胶基质的ZORBAX StableBond 有效改善色谱峰峰形 硅胶类型 A 酸性更强 色谱柱 ODS 4 6 x 250 mm 5 m 理论塔板数 92 USP Tf 5 2 90 Propranolol 萘心安 pKa 9 5 硅胶类型 B 高纯 Rx Sil 色谱柱 SB C18 4 6 x 150 mm 5 m 理论塔板数 6371 USP Tf 5 1 09 流动相 75 50 mM KH2PO4 pH 4 4 25 ACN 流速 1 5 mL min 高纯 Rx SIL 基质的C18 色谱柱可有效的改善色谱峰峰形 0 5 10 Time min 3 3 HPLC方法开发与优化 硅胶基质 Agilent Technologies 50页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 二氧化硅NaKMgAlCaTiFeZrCuCrZn Zorbax Rx SIL10 341 52nd3ndndnd1 Zorbax SIL17ndnd579322188 1nd88 Nucleosil56N A N And1305776ndN A N And Hypersil2900 N A403003865230 N A N A N A N A nd 未检出 金属浓度 ppm A类硅胶 Original ZORBAX SIL 1970s 由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上 金属含量高 硅羟基的pKa低 导致碱性化 合物发生拖尾 B类硅胶 高纯 ZORBAX Rx Sil 1987 由于金属含量低 硅羟基pKa高 碱性化合物不发生拖尾 Zorbax Rx SIL 11种金属 35 ppm 未检出其他杂质 1ppm 99 995 纯度的二氧化硅 Type B Type A 3 3 HPLC方法开发与优化 硅胶基质 Agilent Technologies 51页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 金属敖合反应导致色谱峰峰形不佳 待测组分与金属发生敖合反应导致色谱峰峰形不佳 金属络合物导致色谱峰前伸和拖尾 液相系统中金属来源 溶剂 管线 不锈钢过滤芯 高纯硅胶能消除硅胶上的金属来源 3 3 HPLC方法开发与优化 硅胶基质 Agilent Technologies 52页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 避免样品过载 酸洗以改善色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agilent Technologies 53页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 pH 7双封端改善色谱峰峰形 两支色谱柱均为高纯硅胶基质 双封端的色谱峰柱上硅羟基的二次作用减少 保留与拖尾都减少 4 色谱柱 4 6 x150 mm 5 mm 流动相 60 ACN 40 10 mM 磷酸盐缓冲液pH 7 0 流速 1 5 mL min 温度 40 C 单封端 非Zorbax C18 双封端 Eclipse XDB C8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Time min 1 2 3 1 2 3 4 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Time min Tf 1 2 95 2 1 90 3 2 54 4 1 22 Tf 1 1 79 2 1 41 3 1 24 4 1 01 样品 1 Nortriptyline 去甲替林 pKa 9 7 2 Doxepin 多塞平 pKa 9 0 3 Amitriptyline 阿米替林 pKa 9 4 4 Trimipramine 三甲丙咪嗪 3 3 HPLC方法开发与优化 双封端 Agilent Technologies 54页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 避免样品过载 酸洗以改善色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agilent Technologies 55页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 大分子需要大孔径填料以改善色谱峰峰形 大孔径300 全多孔色谱柱 可用于分离蛋白质和多肽 分子量虽小但hydrodynamic volume 水动力学体积 较大的分子 Poroshell 色谱柱 高流速下 高柱效分析大分子的蛋白质和多肽 色谱柱填料孔径必须适合待测物分子 自由进出键合相孔 与孔内表面的键 合相进行反应 3 3 HPLC方法开发与优化 大孔径 Agilent Technologies 56页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 0 20 0 0 02 0 04 0 06 0 08 0 10 0 12 0 14 0 16 0 18 300SB C18 300 SB C18 80 PW 1 2 Leu Enkephalin M W 556 AngiotensinII 血管紧张素II M W 1046 Insulin B M W 3 496 Cyt C M W 12 327 Rnase 核糖核酸酶 M W 13 684 Lysozyme 溶菌酶 M W 13 900 300 色谱柱改善蛋白质和多肽峰形 对大分子分析选择相应孔径的填料可获得最佳峰形 孔径 分子尺寸对峰宽的影响 梯度分离 3 3 HPLC方法开发与优化 大孔径 Agilent Technologies 57页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 300 色谱柱可改善大分子的峰形 色谱柱 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 60 MeOH 40 0 1 TFA 流速 0 75 mL min 温度 RT 检测器 UV 282 nm 溶液中的分子尺寸决定适宜的色谱柱孔径 窄的峰宽表明待测分子进入填料孔没有受到阻碍 SB C3 80 300SB C3 300 Pw 1 2 0 442 Pw 1 2 0 125 O O N HO HO CHO HO OH OH O O O O O O O CH3 CH3 OCH3 OCH3 CH3 CH2 CH2 CH2 CH3 CH3 CH3 H3C H3C H3C 0 5 10 Time min 0 5 10 Time min Tylosin 泰乐菌素 MW 926 分子量虽小但 hydrodynamic volume 水动力学体积 较大的分子 3 3 HPLC方法开发与优化 大孔径 Agilent Technologies 58页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 多孔外壳 实心核 m Poroshell填料颗粒高效分离蛋白质和多肽 Poroshell 300SB C18专用于 大分子的蛋白质和多肽分析 Poroshell填料颗粒由实心硅 胶核和300 孔径表面多孔 层构成 Poroshell填料颗粒有利于高 效质量传输和改善大分子蛋 白质和多肽色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 大孔径 Agilent Technologies 59页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 快速 高分辨率 分离蛋白质和多肽 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0 5 1 0 Time min 色谱柱 Poroshell 300SB C18 2 1 x 75 mm 5 mm 流动相 A 0 1 TFA B 0 07 TFA in ACN 梯度洗脱 5 100 B in 1 0 min 流速 3 0 mL min 温度 70 C 压力 250 bar 检测器 UV 215 nm 样品 1 Angiotensin II 血管紧张素 II 2 Neurotensin 神经降压素 3 Rnase 核糖核酸酶 4 Insulin 胰岛素 5 Lysozyme 溶菌酶 6 Myoglobin 肌红蛋白 7 Carbonic Anhydrase 碳脱水酶 8 Ovalbumin 卵清蛋白 表面多孔颗粒有利于快速质量传输 因此只有Poroshell 填料可提供高流速下 蛋白质和多肽的高效分离分析 1秒内 3 3 HPLC方法开发与优化 大孔径 Agilent Technologies 60页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 避免样品过载 酸洗以改善色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agilent Technologies 61页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 流动相缓冲液影响色谱柱寿命 冲洗色谱柱体积 0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000 丙醇塔板高 cm 0 016 0 014 0 012 0 010 0 008 0 006 0 004 0 002 0 000 色谱柱 Eclipse XDB C8 4 6 x 150 mm 老化 流动相 55 MeOH 4 5 0 017 M 缓冲液 pH 11 流速 1 5 mL min 温度 23 C 测试 流动相 同上 流速 1 0 mL min 温度 40 C 磷酸钾 三乙胺 HCl 1 甲基 哌啶 HCl 有机缓冲液可有效延长色谱柱寿命 3 3 HPLC方法开发与优化 缓冲液 Agilent Technologies 62页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 使用缓冲液的流动相以改善色谱峰峰形和保留 A pH 7 0 25 mM 磷酸盐缓冲液 色谱柱 ZORBAX Rapid Resolution Eclipse XDB C8 4 6 x 75 mm 3 5 m 流动相 44 A 56 甲醇 流速 1 0 mL min 温度 25 C 检测器 UV 250 nm 在流动相中使用缓冲液可以增加保留 分辨率和改善色谱峰峰形 Time min 012345 1 2 3 4 6 7 5 A pH 7 0 water 01234 1 4 6 7 2 3 5 Time min 样品 1 ketoprofen 酮洛酚 2 ethylparaben 羟苯乙酯 3 hydrocortisone 氢化可的松 pKa 5 1 4 Fenoprofen 苯氧苯丙酸 pKa 4 5 5 propylparaben 对羟基苯甲酸丙酯 6 Propranolol 萘心安 pKa 9 5 7 Ibuprofen 异丁苯丙酸 pKa 4 4 3 3 HPLC方法开发与优化 缓冲液 Agilent Technologies 63页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 避免样品过载 酸洗以改善色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agilent Technologies 64页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 样品溶剂溶解强度过大导致色谱峰峰形不佳 样品溶剂溶解能力强于流动相导致色谱峰峰形问题 裂分峰或宽峰 色谱柱 ZORBAX StableBondSB C8 4 6 x 150 mm 5 mm 流动相 82 H2O 18 ACN 进样体积 30 mL A 样品溶剂 100 乙腈 0 10 Time min 1 2 B 样品溶剂 流动相 0 10 Time min 1 2 样品 1 Caffeine 咖啡因 2 Salicylamide 水杨酰胺 3 3 HPLC方法开发与优化 样品溶剂 Agilent Technologies 65页 免费服务电话 800 820 3278 2003 March Zobax 色谱柱 改善色谱峰峰形的HPLC方法优化 选用完全羟基化的高纯硅胶基质的色谱柱 Zorbax Rx Sil 色谱柱 StableBond Eclipse XDB Bonus RP和Extend 针对中等pH或复杂碱性样品 选用双封端色谱柱 Eclipse XDB 针对中等或高pH 选用特殊 键合相以改善色谱峰峰形 Bonus RP Extend 针对大分子量组份 选用大孔径色谱柱 尽可能使用低pH缓冲液以减少二次作用 在不同pH范围下 均使用25 50 mM缓冲液 注意选择溶解样品的溶剂 避免样品过载 酸洗以改善色谱峰峰形 3 3 HPLC方法开发与优化 建议 Agi