溃疡性结肠炎易感性的白细胞介素- 17A和白细胞介素- 17F基因多态性的影响.doc

溃疡性结肠炎易感性的白细胞介素- 17A和白细胞介素- 17F基因多态性的影响摘要：我们调查溃疡性结肠炎（UC）和IL - 17A（rs2275913的G - 197A）和IL - 17F（rs763780，7488T / C）基因多态性之间的关联。我们采用多重PCR - SSCP方法检测基因多态性。两个号码（IL - 17F）- 197A（IL - 17A）和7488T等位基因显着正相关的UC的发展。- 197A / A和7488T / T基因型在UC组的频率显着高于那些在非UC组高。调整后的分析显示，- 197A和7488T等位基因发展加州的独立危险因素。此外，这两种基因多态性与全结肠炎的表型显着相关。此外，- 197A等位基因显着相关的慢性复发性的表型和197A / A纯合子steroiddependent情况下更频繁，而7488T等位基因与慢性连续表型相关。我们的研究结果首次提供了证据- 197A（IL - 17A）和7488T等位基因（IL - 17F）可能影响易感性和UC的病理生理特点独立。关键词：IL-17；单核苷酸多态性（SNP）；溃疡性结肠炎简介：溃疡性结肠炎（UC）的影响结肠和直肠，通常涉及的最内层的内衬黏膜，炎症持续方面表现没有段与正常粘膜1。它的特点是慢性，复发性结肠炎的病因不明。一些研究表明，UC是由一个复杂的交互环境，遗传沉淀和免疫调节的因素2,3。因此，免疫失调和遗传因素被认为是UC的发病机制中发挥重要作用。近日，有报道在UC的发病机制的先天免疫反应的重要作用4，细胞因子的配置文件提供了一个夸张的2型辅助响应的证据5。此外，一些基因与UC本身有关联，而另增加UC的风险，或与疾病表型6,7相关联。因此，加州是多方面的，可能是遗传异质性的多基因遗传性疾病。白细胞介素17（IL - 17）是一个相对新近被描述的的细胞因子，桥梁的适应性和先天免疫系统。到目前为止，6 IL - 17家族的配体（IL - 17A - F）和5个受体（IL - 17RA - IL - 17RD和海基会）已经确定8,9。白细胞介素- 17A和IL - 17F的IL - 17细胞因子家族的成员负责的的Th17细胞致病性活动10，一个对CD4不同的血统+效应细胞11，和细胞因子，诱导多种促炎调解员，包括上皮细胞和成纤维细胞趋化因子，细胞因子和金属蛋白酶，8。在小鼠的疾病和感染模型的体内研究表明，Th17细胞谱系起着致病J临床免疫（2008）28:44-49作者10.1007/s10875-007-9125-8 T.有泽（*）：T。田原：T柴：M.长坂：M.村：神谷Y. H.藤田：M.村：D.吉冈：Y。华冠：M.大久保：一，平田：H.野部消化科，藤田保健大学医药，1-98，Dengakugakubo，沓挂町，丰明470-1192，日本E - MAIL：tarisawafujita-hu.ac.jp在自身免疫性疾病和保护作用，在免疫监视的作用12-15。它也已报道，IL - 17的mRNA和IL - 12在炎症性肠病（IBD）的16，17患者的肠黏膜的表达。最近，作用IL - 17和IL - 23在鸡传染性法氏囊病，张等人发病的基础。表示控制的表达/生产的IL - 17和IL - 23可能是一个新的鸡传染性法氏囊病的治疗方法18。另一方面，川口等。表明，IL - 17F 7488T / C（rs763780），这会导致氨基酸161（H161R）变种替代他的精氨酸，影响哮喘的危险，是一个天然IL - 17F在已知多态性拮抗剂IL - 17的基因19。不过，也有IL - 17基因多态性是否会影响UC的发展和病理生理功能，或者不没有报告。在本研究中，我们试图澄清7488T / C多态性和溃疡性结肠炎的IL - 17F基因之间的关联。此外，rs2275913（G / A）在位于加州大学的发展和临床病理特征，IL - 17A基因的起始密码子-197位置，作用进行了研究。材料与方法 临床标本研究人口由359科目，其中包括加州大学（UC组，n = 111）藤田保健大学医院和正常人没有加州（非UC组，n = 248）入院的病人。 UC的诊断是基于标准的临床，内镜，放射，病理标准20。使用FlexiGene DNA试剂盒（QIAGEN，Hilden的，德国），从外围血液中分离基因组DNA。藤田保健大学医学院伦理委员会批准的协议，并书面知情同意从所有参与主体。基因型多态性多态性基因型的PCR - SSCP方法报道21。为了检测IL - 17A和IL - 17F多态性，使用的引物对（IL17AF：5 - AACAAGTAAGAATGAAAAGAGGACATGGT 3和IL17AR：5 - CCCCCAATGAGGTCATAGAAGAATC - 3，并IL17FF：5 - GTGTAGGAACTTGGGCTGCATCAAT 3和IL17FR：5 “AGTGGATATGCACCTCTTACTGCACA - 3”），分别进行了单管多重PCR在20L含0.1微克的基因组DNA量。变性的DNA在96 C为90秒，35个循环96 C为15秒，58 C和30秒72 C为72 C为3分45 s的最后一次延长。此后，2L的PCR产物在90变性5分钟与10L甲酰胺（Sigma - Aldrich公司有限公司，圣路易斯，美国）。SSCP技术进行了6个或12 C GeneGel Excel中12.5/24（Amersham公司生物科技公司，美国），后变性的单链DNA片段进行检测，使用的DNA银染试剂盒（Amersham公司生物科学使用一个GenePhor DNA分离系统公司）。统计分析年龄数据以平均值 SD表示。等位基因和基因型频率分别计算直接计数。 UC和非UC团体之间进行比较的等位基因数由一个2 2表使用卡方检验。此外，等位基因频率和疾病之间的关联强度评估计算logistic回归分析基因型或等位基因数作为回归量的比值比（OR）和95可信区间（95CI）。调整后的分析也进行Logistic回归分析，调整后的性别，年龄，和IL - 17基因多态性。与学生的t -检验比较两组间的平均年龄分别。对于所有的分析，显着性水平P 0.05。结果学科特点和基因型频率如图所示。 1，IL - 17A（G - 197A）和IL - 17F（7488T / C），单链DNA的显然是由SSCP分离。两个多态性基因型Hardy - Weinberg平衡。在非UC组的平均年龄是在UC组显着高于由学生的t -检验。 IL - 17F（7488T / C），在非UC组的C等位基因频率也明显比在UC组经卡方检验。有两组性别之间无显着差异，和IL - 17A（G - 197A）A等位基因频率。IL - 17基因多态性与溃疡性结肠炎之间的相关性IL-17A/-197A和IL-17F/7488Talleles数字到增加对发展中国家的加州的危险显着相关（OR = 1.53，95CI = 1.06-2.21和OR = 1.85，95CI = 1.06， 3.22，分别见表一）。非加州大学和加州大学组之间的基因型频率比较，我们发现IL-17A/-197A / A和IL-17F/7488T/T基因型的频率显着高于UC患者在那些非UC组（OR = 2.44,95CI = 1.17-5.08 = 1.81，95CI = 1.01-3.23，分别）。按性别和年龄调整后的调整分析，IL-17A/-197A和IL-17F/7488T等位基因也有显着增加了加州大学的发展风险。此外，由共变数使用的数量- 197A和7488T等位基因作为协变量，发现没有显着的相互作用关系UC的易感性（P = 0.35，数据未显示）（见表二）。IL - 17基因多态性与溃疡性结肠炎的表型之间的关系IL-17A/-197A等位基因的数量呈显着相关的慢性复发性和全结肠炎的表型和激素依赖的情况下（表三），而IL-17F/7488T等位基因的数量呈显着相关的慢性连续和全结肠炎表型（表四）。此外，频率的IL - 17A / - 197A / A基因型慢性复发性和全结肠炎比在非UC组表型，而IL - 17F T / T基因型在慢性持续和全结肠炎更频繁表型。讨论在本研究中，我们发现IL - 17A和IL - 17F基因和加州大学的多态性之间的一个显着的关系。 IL-17A/-197A和IL-17F/7488T等位基因与加州大学的发展增加风险显着相关。川口等人。 H161R替代的功能带来的后果，通过检查发现重组野生型和突变型的IL - 17F蛋白9，所以表达和/或抑制IL - 17F的活动可能会在IF-17F/7488C等位基因携带者。另一方面，一直没有rs2275913（ILTable 17A/-197G/A）基因产物的表达的影响评估研究。因此，它并没有得到澄清如何多态性影响的活动和表达IL - 17A，和我们也没有获得任何证据。然而，在我们的研究中，两个IL-17A/-197A和IL-17F/7488T等位基因的独立危险因素加州大学的发展，前者更与风险密切相关。关于这一点，需要进一步研究，但我们怀疑的IL - 17A的启动子多态性（rs2275913），可能会影响人类疾病，通过改变基因产物的活性。不受控制Tcell激活和功能异常的先天免疫系统对正常肠道菌群在IBD的发病机制的一个关键部分22。近日，IL - 15和IL - 23是重要的刺激诱导的IL - 17A。双方IL - 15的IL - 23已被证明在记忆T细胞的发展非常重要23，和IL - 23是在先天免疫和粘膜T细胞反应24。这两种细胞因子能够诱导IL - 17A可作为先天免疫和适应性免疫之间的桥梁，其中的IL - 17细胞因子的主要效应细胞因子。因此，IL - 17的成员可能在UC的发病中发挥重要作用。IL - 17A是超过10年前第一只克隆25以及另外5个成员，2000年和2002年之间发现26-29。 IL - 17家族成员属于不同类别的细胞因子，并发挥作用，协调当地组织的炎症诱导促炎和中性粒细胞的动员的细胞因子的释放9。几项调查还表明，IL - 17增加细胞表面的ICAM - 1的表达30，上调一氧化氮的产生31。其致炎活动和粘附分子的影响建议的IL - 17在UC的重要性。从预测的氨基酸序列对齐，整体最高的氨基酸序列的身份是发现自己的能力之间的IL - 17家族的IL - 17A和IL - 17F，IL - 17A和IL - 17F有着相似的功能之间诱导是中性粒细胞的招募和激活的重要的趋化因子。此外，IL - 17A和IL - 17F基因定位6p12。虽然IL - 17A和IL - 17F在UC的发病机制的意义至今仍不清楚，我们推测这两个细胞因子可能影响协调发展的UC或独立。因此，我们研究了在UC的发病机制中的两种细胞因子基因多态性的影响。有少数报告显示IL - 17F多态性在人类疾病的风险的影响。近日，川口等。表明，IL - 17F编码变种H161R阻止野生型IL - 17F在体外诱导IL - 8表达的功能性实验19。此外，它也表明，这种变异是体内功能，它是影响哮喘易感性。拉姆齐等其他研究。使用1027白色的女性受试者，发现哮喘和白细胞介素- 17F多态性32之间没有任何关联。这种差异可能是一个事实的结果是美国在欧洲（4.5）科目IL-17F/7488C等位基因频率低于健康的日本（11.4）科目。近日，川口等。表明，IL - 17F编码变种H161R阻止野生型IL - 17F在体外诱导IL - 8表达的功能性实验19。此外，它也表明，这种变异是体内功能，它是影响哮喘易感性。拉姆齐等其他研究。使用1027白色的女性受试者，发现哮喘和白细胞介素- 17F多态性32之间没有任何关联。这种差异可能是一个事实的结果是美国在欧洲（4.5）科目IL-17F/7488C等位基因频率低于健康的日本（11.4）科目。此外，由共变数使用的数字- 197A和7488T等位基因作为协变量，发现没有显着的相互作用关系对UC的敏感性（P = 0.35）。也就是说，双方的G - 197A（IL - 17A）和7488T / C（IL - 17F）可能是UC的独立危险因素，前者似乎更接近UC的风险增加。当IL - 17A和IL - 17F基因多态性的关系在UC患者的临床参数进行了评估，我们发现这两个多态性与全结肠炎的表型显着相关。此外，IL-17A/-197A等位基因显着相关的慢性复发性表型和- 197A / A纯合子steroiddependent情况下更频繁，而IL-17F/7488T