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文档简介

传代培养步骤-准备t 准备t 熟悉步骤t 洗手向老师（李）索要种子细胞（注意不要倾斜）倒置相差显微镜下观察细胞密度和大概形态t 点燃酒精灯t 手用酒精棉球消毒t 打开D-Hanks液瓶塞（打开前、后用酒精灯烤热玻璃瓶口）t 从吸管筒中取一支吸管套上胶滴管头（手勿接触细端即近细端部分），（该吸管暂称“自取吸管”，不用时，手持或置于安全无菌处（前段悬空）。全部操作完成后拿出超净台置收集桶中）传代培养步骤-洗细胞t 洗细胞t 用自取吸管吸净培养皿中的培养上清，弃于废液杯中（注意吸管悬空，切勿接触杯体或杯中物）t 用D-Hanks液专用吸管（插于标有“Hanks”字样的离心管中）吸取1-2mL D-Hanks液悬空加入培养皿，静置片刻t 用原自取吸管吸净液体弃于废液杯中。传代培养步骤-消化分离细胞t 消化分离细胞t 打开胰酶瓶塞（ ）t 用专用吸管（插于标有“0.25%胰酶”字样的离心管中），吸取少许胰酶液悬空滴加入培养皿中，4-5滴即可覆盖培养皿底壁t 盖上培养皿于倒置相差显微镜下观察消化程度（细胞形态变化），打开培养液瓶塞（）t 消化合适时，用专用吸管（插于标有“1640”字样的离心管中）悬空加入1-2mL培养液以终止消化传代培养步骤-传代接种和培养t 传代接种和培养t 用原自取吸管轻轻吹打培养皿底壁将细胞悬浮起来t 用原自取吸管较平均地转移到两个培养皿中（无菌且已预先置入两张飞片）t 三个皿均补加RPMI1640培养液至合适高度（不超过1/3皿高）t 将卸下滴管胶头后的自取吸管置于无菌室门边的收集桶中t 倒置相差显微镜下
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