他克莫司(FK506).doc

从Streptomyces tsukubaensis发酵得到。发酵过程如下：将100m1种子液(含1%甘油，1%玉米淀粉，0.5%葡萄糖，1%棉子粉，0.5%玉米浸渍液和0.2%碳酸钙，pH=6.5)移入500ml瓶中，在120下消毒30min。接入一圈经斜面培养的STsukubaensis No9993种子，在30下培养4天。将该培养液移入装有201。相同种子液的、已于120：消毒过30min的30L发酵罐中，在30下培养2天，鼓人空气2L/min，搅拌300r/min。将16L该培养液植入装有1600L发酵液(含4.5%可溶性淀粉，1%玉米浸渍液，1%干酵母，0.1%碳酸钙和0.1%Adekancd，pH=6.8)的、已在120消毒过30min的2000L，罐中，在30、170r/min搅拌和1600L/min的空气流下发酵4天。分离：1500L发酵液用25kg硅藻土辅助下过滤。滤饼用500L丙酮提取，提取液和滤液(1350L)合并，通过装有100LDiaion HP-20非离子吸收树脂(Mitsubishi(2hemical Industries Ltd，Japan产品)的柱子。用300L水和300L 50%丙酮水溶液洗后，再用75%丙酮水溶液洗脱。洗脱液在减压下浓缩至约剩300L水溶液，再用20L乙酸乙酯提取3次。提取液合并，减压浓缩至剩油状物。该油状剩余物和2倍重量的酸性硅胶(special silica gelgrade 12，Fuji(9evision Co，Japan产品)混合后，浸人乙酸乙酯中。蒸出溶剂，剩余的干燥粉末用8L同样的酸性硅胶柱层析，用30L正己烷、30L正己烷和乙酸乙酯(4：1)混合液、30L乙酸乙酯洗脱。收集含富吉霉素的洗脱液，减压浓缩。油状剩余物和2倍重量的酸性硅胶混合，浸入乙酸乙酯中。蒸出溶剂，产生的干燥粉末用3.5L酸性硅胶柱层析，用10L正己烷、10L正己烷和乙酸乙酯(4：1)混合液、10L乙酸乙酯洗脱。收集含富吉霉素的洗脱液，减压浓缩。得到的黄色油状剩余物溶于300ml正己烷和乙酸乙酯(1：1)的混合液中，用2L硅胶(230400m，Merck Co，LtdIJSA产品)柱层析，用正己烷和乙酸乙酯(先10L 1：1，后6L 1：2)、6L乙酸乙酯洗脱。收集含富吉霉素的洗脱液，减压浓缩，得到34g白色粉末状的富吉霉素。将其溶于乙腈，减压浓缩。浓缩液在5放置过夜，得到22.7g棱状的结晶。再用乙腈重结晶，得到13.6g无色棱状结晶的纯的富吉霉素。斜面：麦芽浸出物20 g/l 酵母浸出粉5g/l 葡萄糖10g/l 琼脂15g/l PH7.0种子培养基：可溶性淀粉15g/l 甘油5g/l 酵母粉10g/l 玉米浆10g/l葡萄糖10g/l 碳酸钙2g/l PH7.0发酵培养基：淀粉45g/l 酵母粉10g/l 甘油5g/l 碳酸钙2g/l PH7.0固体培养基：燕麦片、蔗糖、琼脂28度培养7天种子培养基：酵母粉、葡萄糖、甘氨酸 28度培养24小时发酵培养基：葡萄糖、淀粉、酵母粉、28度培养120小时尿素对FK506有影响 用亮氨酸做氮源最好。斜面培养基：麦片2% 蔗糖0.2%琼脂1% PH自然种子培养基：葡萄糖1% 酵母粉0.5% 甘油1% 玉米浆0.5% 碳酸钙0.2% 可溶性淀粉1.5% ph 7.0斜面28度培养7-10天斜面孢子变成深灰色种子培养：28度培养48小时优