蔬菜质量安全快速检测技术与应用.doc

蔬菜质量安全快速检测技术与应用ppt文档可能在WAP端浏览体验不佳。建议您优先选择TXT，或下载源文件到本机查看。 蔬菜质量安全快速检测技术与应用 无公害蔬菜基地的认证过程 蔬菜质量安全快速检测技术的检测指标 农药残留量 有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药) (有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药) ? 硝酸盐 ? 亚硝酸盐 ? 吊白块：目前主要在我国北方已经发 吊白块： 现有一些不法商贩使用漂白粉漂白一 些蔬菜，但情况尚不严重， 些蔬菜，但情况尚不严重，其主要污 染物为甲醛。 染物为甲醛。 我国现行的主流检测技术体系 检测技术体系的要求： 满足有关标准对检测方法及设备的要求； 操作简便，稳定度高； 检测结果能够与其它分析机构比对。 ? 目前全国最大的检测体系： 由农业部蔬菜品质监督检验测试中心（北京）和农业 部药检所创建，并常年进行检测，具有技术成熟以及结果可 靠等特点。 ? 设备： 电子天平、电热恒温水浴锅、调速多用振荡器、TU18 00/1810紫外可见分光光度计 ? 要求： 同时对蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐和农药残留量进行 检测，需要时检验吊白块。 农药残留量快速检测方法 传统的农药残留量分析技术的一般过程 分析步骤 1、采集样品 2、称取样品 3、捣碎样品 4、样品的提取 5、样品的净化 6、样品的浓缩 7、样品的定性、定量检测 所需设备 分析天平 高速组织捣碎机 分液漏斗等 SPE、SPME 等 氮吹仪、旋转蒸发器等 GC、HPLC、GC-MS、HPLC-MS 等 传统的农药残留量分析技术的优缺点 优点 能够对每一种农药进行准确的定性和定量 缺点 检验分析周期长 检验费用高 需要消耗大量的有机溶剂，容易造成环境污染 需要使用 GC、HPLC 等昂贵的大型仪器设备 对检验分析人员的化学分析水平有较高的要求 检验分析过程繁琐，影响因子复杂，不易掌握 传统的农药残留量分析技术存在的问题 ?能对农产品的生产、运输、批发、零售环节农药残留量分析 作出快速响应，无法满足农产品生产、流通环节的需要 ? ?检测费用太高，如果在农产品的生产、运输、批发、零售各 个环节普遍使用，社会可能无法承担 ? ?检验缺乏针对性，在农产品的生产、运输、批发、零售各个 环节普遍使用传统的农药残留量分析技术，可能会带来一定 程度的浪费 ? ?检验需要专业的检测机构来完成，现有的社会检测机构及检 验能力无法承担社会各个环节的所有检测任务 ? ?检验需要配置大量的仪器设备，造成了传统的农药残留量分 析技术无法在商场、农产品生产基地等场所进行推广使用 国内外现行的农药残留量快速检测方法 生化检测法（胆碱酯酶/酶抑制法） 生化检测法（胆碱酯酶/酶抑制法） ? 免疫分析法 是将抗体抗原反应与现代测试手段相结合的微量分析法。具 有高灵敏度和高效能等优点，仅需要很少的仪器设备和专业 培训，是农药残留量快速检测及测定致癌物的好方法。但该 方法开发费用高，开发时间长约1年，而且只适用于分析一种 农药或一类农药。 ? 活体生测法 安达市植保植检站利用敏感家蝇对蔬菜低残毒生产区的蔬菜 进行大面积多点次检测，查出严重超标的蔬菜比率为0.15%。 该法测定时间需3小时，但必须具有专用养虫室并常年饲养昆 虫。 我国现行的农药残留量分析的总体解决方案 检测方法 速测卡法 酶抑制法 传统法 应用范围 快速筛选 快速筛选并提供总量抑制率指标 农药残留量的准确定性、定量 方法精度 低 中 高 检测速度 快 中 很慢 农药残留量快速检测技术的优缺点 缺点 无法对每一种农药进行准确的定性 无法定量或定量准确度不高 能够检验的农药种类范围较窄 缺点 检验分析周期短 检验费用低 无需要消耗大量的有机溶剂，不会造成环境污染 不需要使用 GC、HPLC 等昂贵的大型仪器设备 对检验分析人员的化学分析水平要求较低 检验分析过程简便，容易掌握 我国现行的农药残留量快速检测技术 方法 速测卡法（纸片法） 酶抑制法 标准编号 GB/T 5009.1992002 NY/T 4482001 GB/T 5009.1992002 GB/T 186252002 GB/T 186262002 GB/T 186302002 适用范围 蔬菜 蔬菜 蔬菜 茶 肉 蔬菜 （最新有关标准）GB/T5009.199-2002，由卫生部制 订，是目前使用最广泛的标准。 农药的分类 农药残留量快速检测技术的检测对象 有机磷类农药 ? 氨基甲酸酯类农药 ? 以上两类农药的有毒代谢产物 蔬菜农药残留量危害程度评估及取样方法 评估原则： 危害性（Hazard）=毒性接触程度（Exposure） ? 评估方法： 危害性越大，采样频次越高，样本数量越大，监管等级越高 ? 蔬菜中农药残留量样品采集原则： 蔬菜品种数量越大，采样频次越高，样本数量越大。 蔬菜抽样数量在生产基地和流通环节（如：市场）均使用 货物“货批”数来衡量。 产地检验原则：以同一品种、同一田块、同期采收的蔬菜， 以1hm2为一抽样批次，不足1hm2也视为一个货批。 市场检验原则：以同一产区、同一品种、同一销售单位为 一个货批。 产地蔬菜样品采集方法 原则： 对每一货批按5点抽样法取样，将样品缩分后抽取2kg， 取1kg样品作为备样，备样应低温保存。 产地蔬菜样品采集方法 原则： 从每一货批中随机抽取2kg样品，取1kg样品作为备样， 备样应低温保存。 ? 注意： 随机 随机随意 常见蔬菜农药残留量的采集对象及检测部位 采集对象： 蔬菜基地：上市前的蔬菜 市场：正在售卖的蔬菜 检测部位 样品名称 番茄、茄子 黄瓜 萝卜、胡萝卜 大白菜、小白菜 检测部位 去蒂供测 去果柄供测 叶、根（用水轻轻洗去根泥、稍晾干）分别供测 去根、去外测腐叶、供测 蔬菜农药残留量快速检测结果判定基本原则 农药残留量按简易测定方法进行测定时，从 每一货批中随机抽取3个样品进行现场测定。对 于一次检验出现阳性时允许复测。若复测仍呈阳 性者，应进行色谱测定，以色谱测定法测定的结 果为判定依据。 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 原理 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 1、试剂 ? 速测卡：固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片。 ? 洗脱液（pH7.5缓冲溶液）：取15.0g磷酸氢二钠Na2HPO412H2O 与1.59g无水磷酸二氢钾KH2PO4，用500mL蒸馏水溶解。 2、仪器 ? 常量天平 ? 372恒温装置（选配） 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 整体测定法 1、选取有代表性的蔬菜样品，檫去表面泥土，剪成1cm左右见方 碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL缓冲溶液，振摇50次， 静置2min以上。 2、取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行 预反应，有条件时在37恒温装置中放置10min。预反应后的 药片表面必须保持湿润。 3、将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色 药片与白色药片迭合发生反应。 4、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 表面测定法（粗筛法） 1、檫去蔬菜表面泥土，滴23滴缓冲溶液在蔬菜表面，用另一 片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。 2、取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 3、放置10min以上进行预反应，有条件时在37恒温装置中放置 10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 4、将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色 药片与白色药片迭合发生反应。 5、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 结果判定： 检测结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制（阳性）、 未抑制（阴性）表示，具体见下表： 判定结论 强阳性结果 弱阳性结果 阴性结果 判定依据 速测卡白色药片不变色，说明农药残留量较高 速测卡白色药片显浅蓝色，说明农药残留量相对较低 速测卡白色药片显天蓝色或与空白对照卡相同 速测卡法测定结果 阳性结果 阴性结果 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 部分常见农药的检出限及最大残留限量（单位：mg/kg） 农药名称 甲胺磷 对硫磷 水胺硫磷 马拉硫磷 久效磷 乙酰甲胺磷 检出限 1.7 1.7 3.1 2.0 2.5 3.5 残留限量 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 0.2 农药名称 敌敌畏 敌百虫 乐果 西维因 好年冬 呋喃丹 检出限 0.3 0.3 1.3 2.5 1.0 0.5 残留限量 0.2 0.1 1.0 2.0 不得检出 不得检出 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 速测卡法的使用注意事项 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶 有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整 株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也 可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。 ? 当温度条件低于37，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的 时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温）手指捏 3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡 放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药片表面 缓冲溶液加得过少、预反应后的药片表面不够湿润，二是温度太低。 ? 速测卡对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀虫剂， 以及操作者和器具沾有微量农药，都会造成对照和测定药片不变蓝。 ? 红色药片与白色药片叠合反应时间以3min为准，3min后的蓝色会逐渐加 深，24h后颜色会逐渐褪去。 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 原理 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 1、试剂 ? pH8.0缓冲溶液：取11.9mg无水磷酸氢二钾与3.2mg磷酸二氢 钾，用1000mL蒸馏水溶解。 ? 显色剂：取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸 氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，在4冰箱中保存。 ? 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱加8.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置 于4冰箱中保存，保存期不超过一周。 ? 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，但吸 光度值应控制在0.3以上。 2、仪器 ? 常量天平 ? 372恒温水浴或恒温箱 ? 分光光度计或快速测定仪 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） ? 分析步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，檫去表面泥土，剪成1cm 左右见方碎片，取1g放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液浸没菜 叶，每3min摇动一下烧杯，于10min后吸取2.5mL提取液于试管，待 测。 测定： 对照溶液测试：于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.1mL酶液、0. 1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中， 于410nm波长下比色，记录反应3min的吸光度变化值或仪器记录值A0。 样品测试：于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测 试相同，记录反应3 min的吸光度变化值或仪器记录值At。 结果的表述计算： 注意：使用速测仪可以直接读出抑制率值，而无须手工计算。 注意 ? ? ? 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 结果判定 判定依据 抑制率50 抑制率50 注意： 注意 抑制率与农药残留量正相关，测定值越高，说明农药残留量越高。 说明 合格 超标，说明蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯农药 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） CL-1型农药残留速测仪的操作步骤 将阻断光路黑块放入速测仪的比色池内，接通仪器电源，此时仪 器自动进入预热阶段，显示屏显示数值为1200； 仪器显示数值由1200减少为0，并发出“嘀”蜂鸣声时，表示仪 器预热完成（整个过程约需时15min）； 按下“0”按钮，进行调“0”操作，此时仪器显示数值为0或其左 右的数值； 取出阻断光路黑块，按下“100”按钮，进行调满度操作，此时仪 器显示数值为100或其左右的数值； 放入对照溶液，按下“对照”按钮，仪器将自动进行对照样品的 测试，3min后，仪器发出“嘀”蜂鸣声时，表示对照溶液测试完成； 取出对照溶液，放入待测样品，按下“样品”按钮，仪器将自动 进行待测样品的测试，3min后，仪器发出“嘀”蜂鸣声时，表示样 品溶液测试完成，此时按下再次“样品”按钮，仪器即可显示样品 抑制率； 其余样品的测定重复步骤的操作即可。 ? ? ? ? ? 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 部分农药浓度与抑制率对照（实验条件：37，乙酰胆碱酯酶） 甲胺磷 浓度（ug/mL） 抑制率（%） 浓度（ug/mL） 抑制率（%） 浓度（ug/mL） 抑制率（%） 浓度（ug/mL） 抑制率（%） 0.4 35.0 0.4 26.4 0.1 13.6 0.001 25.2 0.8 52.0 0.6 29.4 0.15 22.9 0.002 50.3 1.6 69.0 0.8 36.7 0.2 37.2 0.003 58.8 3.75 90.0 1.2 52.7 0.25 50.6 0.004 66.8 1.6 59.6 0.4 63.9 0.006 73.2 3.75 76.3 0.5 73.9 0.008 78.9 氧乐果 敌百虫 呋喃丹 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 酶抑制法的使用注意事项 葱、蒜、胡萝卜、生姜、韭菜等蔬菜中含有破坏酶活性或使蓝色产 物褪色的物质，处理这类样品时，不要剪得太碎，浸提时间不要太 长，必要时可采取整株（体）蔬菜浸提法。 ? 如室温低于20，建议使用30水浴，即提取液要在水浴中预热， 并且加入酶液后的试管也需要放置于水浴中，同时室温也应控制在2 0以上。 ? 速测试剂对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀 虫剂，以及操作者和器具沾有微量农药，都会对检测结果带来影响。 ? 速测仪长期处于开机等待状态时，应将阻断光路黑块放入速测仪的 比色池内，避免仪器感光元件因过度疲劳而损坏。 ? 标准NY/T 4482001使用的丁酰胆碱酯酶对甲基对硫磷、乐果、毒 死蜱、二嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。 GB/T 1862002系列标准方法的应用 方法特点 该方法是与国际接轨的一个农药残留量快速检测方法，它等 同于美国公职分析化学师协会AOAC 12th 29.049-29.055食 品中有机磷农药残留测定胆碱酯酶抑制法方法，在国外 已得到普遍的应用，检测结果更具可比性。 方法检测对象广泛（有机磷农药和氨基甲酸酯类农药），而 且适用于一些基质复杂的样品，例如：蔬菜、水果、茶叶和 肉等。 具有较高的灵敏度。 适用的温度范围广，在1535下可直接测定，无需其它温 控设施。 比色波长为600nm。 样品测定时，无需设置对照。 测定结果表示简单，无需计算抑制率，由吸光度值直接作出 判定。 ? ? ? ? ? GB/T 1862002系列标准方法的应用 GB/T 1862002系列标准方法与GB/T 5009.1992002等标 准方法的比较 比较项目 适用样品 检测对象 可直接测定的温度范围 比色波长 是否需要设置对照 使用的主要设备 操作过程 结果的表示 GB/T 1862002 蔬菜、 水果、 茶叶和肉等多种类型 有机磷农药和氨基甲酸酯类农药 1535 600nm 否 分光光度计 较为复杂 吸光度值 GB/T 5009.1992002 蔬菜 有机磷农药和氨基甲酸酯类农药 2035 410nm 是 分光光度计或速测仪 简单 抑制率 GB/T 1862002系列标准方法的应用 原理 GB/T 1862002系列标准方法的应用 1、试剂 ? 缓冲液： pH 7.71磷酸盐缓冲液（适用于蔬菜等的检测）： ? ? A液1/15mol/L磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）2.3876g，加水定容至1 00mL。 B液1/15mol/L磷酸二氢钾溶液：取磷酸二氢钾0.9078g，加水定容至100mL。 取A液90mL、B液10mL混合，即得pH 7.71磷酸盐缓冲液。 pH8的三羟甲基氨基甲烷（Tris）盐酸缓冲液（适用于茶叶、肉等的检测）： 取50mL0.1mol/LTris、29.2mL0.1mol/L盐酸加水定容至100mL即可。 ? 底物溶液（2%碘化硫代乙酰胆碱水溶液）： ? 1g碘化硫代乙酰胆碱，加缓冲液溶解并定容至50mL即可。 ? 显色剂：0.04%2,6-二氯靛酚水溶液。 ? 氧化剂：0.5%次氯酸钙水溶液。 ? 还原剂：10%亚硝酸钠水溶液。 ? 胆碱酯酶液：0.2g胆碱酯酶酶粉溶于10mL缓冲液中。 ? 脱色剂：活性炭。 ? 丙酮：分析纯。 ? 碳酸钙：分析纯。 2、仪器 ? 常量天平 ? 分光光度计 GB/T 1862002系列标准方法的应用 几 种 代 表 性 农 产 品 的 测 定 步 骤 GB/T 1862002系列标准方法的应用 结果判定 吸光度值 蔬菜 0.9 茶叶、肉 1.3 未检出 可能检出，但残留量较低 检出 说明 注意：吸光度值与农药残留量正相关，测定值越高，说明农药残留量越高。 GB/T 1862002系列标准方法的应用 GB/T 1862002系列标准方法 对部分农药的最低检出浓度（单位：mg/kg） 农药 番茄 敌百虫 乐果 甲基对硫磷 呋喃丹 甲胺磷 0.3 0.5 0.5 3.0 10 蔬菜 黄瓜 0.8 0.5 0.3 3.0 15 生菜 0.4 0.4 0.1 2.0 15 2.0 3.0 3.0 4.0 20 2.0 3.0 3.0 4.0 20 茶叶 肉 GB/T 1862002系列标准方法的应用 GB/T 1862002系列标准方法的使用注意事项 如室温低于15，建议使用30水浴，即提取液要在水浴中预热， 并且加入酶液后的试管也需要放置于水浴中，同时室温也应控制在2 0以上。 ? 速测试剂对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀 虫剂，以及操作者和器具沾有微量农药，都会对检测结果带来影响。 ? 分光光度计长期处于开机等待状态时，应将比色室盖打开，避免仪 器感光元件因过度疲劳而损坏。 GB/T 1862002系列标准方法的应用 农药残留量快速检测中比色皿使用的注意事项 ? 使用的比色皿均须用待测液润洗三遍后方可装样，如外部 被浸湿可用擦镜纸擦干。 ? 比色皿的清洗，可将比色皿浸泡在阴离子表面活性剂的碳 酸钠溶液中（2%,W/V )，必要时应在40-50加热约10min,取 出然后在1+5过氧化氢的硝酸溶液中浸泡30min，用水冲洗 后用蒸馏水洗净，倒立在清洁的纱布上控干。放入干燥器保 存。若急用时可在水洗后用