对乙酰氨基酚实验.doc.gzip.doc

对乙酰氨基酚的生物利用度和药物动力学参数的测定 2008级药本药物动力学实验 2011-4【实验目的】 通过实验掌握兔体内血药浓度的测定方法。 掌握用血药浓度法计算药物的动力学各参数。【实验原理】对乙酰氨基酚水解生成对氨基苯酚，对氨基苯酚在次溴酸钠的存在下，能与苯酚产生反应，生成靛蓝染料，靛蓝染料在波长620nm处有最大吸收。为了排除血浆中蛋白的干扰，测定血药浓度时首先应加入适量20的三氯醋酸沉淀蛋白。【实验方法】血药标准曲线的制作及求出回归方程:【EP管的准备】EP管6支洗净编号，标号S1到S6，备用。【对乙酰氨基酚标准液的制备】 a 精密称取105干燥恒重的对乙酰氨基酚粉末400mg，用热蒸馏水溶解于100ml容量瓶中，冷却至室温后稀释至刻度，至冰箱保存备用（4000g/ml）。b 分别精密吸取上述4000g/ml的浓贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，得40g/ml、80g/ml、120g/ml、200g/ml、280g/ml、400g/ml的标准溶液。*【空白血浆的制备方法】将实验动物家兔耳缘静脉处毛拔掉，涂擦酒精，用100W灯泡烤5min，将耳静脉横向切开，用经1肝素溶液处理并烘干的离心管采血约9ml。然后将刀口贴上棉球，用夹子夹住。离心得上清液血浆约4.5ml，制备标准曲线用3ml。余下部分放置冰箱供测样品用。【显色操作】按照表A操作至求出回归方程。操作步骤表中部分试剂的准备方法:【20%三氯醋酸溶液的制备】称取三氯醋酸20g，加蒸馏水溶解， 稀释至100ml。【40% NaOH溶液的制备】称取氢氧化钠40g，加蒸馏水溶解， 稀释至100ml。【4mol/L HCl溶液】取33.2ml浓盐酸，加蒸馏水溶解， 稀释至100ml。【显色剂的制备】a、【0.2mol/L氢氧化钠溶液】称取8g氢氧化钠，溶解于蒸馏水中，稀释至1000ml。b、【1%酚溶液】吸取1ml液化酚（含量99%以上）溶解于蒸馏水中，稀释至100ml。（临用前新鲜配制）c、【饱和溴水溶液】取适量液态溴，加入蒸馏水中，振摇溶解，放置至少24h后再使用。d、【碳酸钠-溴溶液(0.5mol/L)】称取106g无水碳酸钠。溶解于蒸馏水中，添加15ml饱和溴水溶液混合均匀，稀释至100ml。（临用前新鲜配制）e、【显色剂】取0.2mol/L氢氧化钠溶液80ml，加1%酚溶液10ml。振摇混匀后，加入碳酸钠-溴溶液100ml，混匀即得。步骤二：动物给药及血药浓度的测定A静脉注射给药途径：【动物】取雄性家兔（3kg以上）1只，称重记录。 【EP管的准备】10ml的EP管（8支+8支）洗净编号，经100unit/ml肝素溶液（配法为肝素注射剂一支溶于250ml生理盐水中）处理，烤干（105）。【对乙酰氨基酚注射液的配制】精密称取对乙酰氨基酚0.5g，置小烧杯中，加50%丙二醇（混溶剂）水溶液5ml，加热37下使溶解即成，浓度为100mg/ml。【给药】按照60mg/kg静脉注射上述注射液。【取血】以上两种途径给药后立即记录注射时间，并按此时间开始0min、5min、15min、30min、1h、1.5h、2.5h、4h、6h定时采血约1.5ml（换算成滴数 滴），每份样品离心10min（3500转/分），将上清液血浆转移至另一个对应编号的洁净干燥1.5ml的EP管中，置冰箱保存。【显色操作】按照表B操作至得到实验结果。B口服给药途径： 【动物】取雄性家兔（3kg以上）1只，称重，实验前禁食24h。【给药】口服给药0. 5g。 其余步骤同A给药途径的各对应步骤。【实验要求】略附1：家兔的采血方法 1、家兔耳缘静脉采血 穿刺采血法：是家兔最常用的采血方法。具体方法同耳缘静脉注射给药。此法一次可采血5lOml，可多次重复使用。针头不可连接注射器，直接让血液滴在有抗凝剂的试管内。 切割采血法：当兔耳部血管被充分扩张后，可用刀片割破耳缘静脉，或用注射针刺破耳缘静脉，让血液自然流出。采血穿刺和注射穿刺方向不同。采血穿刺逆血流方向行针，采血量越大，越要靠近根部行针。 2、兔耳中央动脉采血：经兔耳中央的一条较粗、颜色鲜红的动脉采血，可采到约15 ml/次血。操作方法基本与静脉采血同。由动脉末端，朝向心方向进针，取血完毕后注意止血。附2：直线回归方程的求法（最小二乘法）Y=a+bXb=(XiYi-nX平Y平)/(Xi2-n(X平2) a=y(平均)-bx（平均）直线回归方程的一般形式为： （应变量）：一般是难测（或不可测）的变量。X（自变量）：一般是可测或人为给定的量的变量。a：为常数项，又称截距；b：为斜率，又称回归系数，表示自变量X增加（或减少）一个单位，应变量Y平均改变的单位数。b为正，表示X增加，Y增加；b为负，X增加，Y减少；b=0，X与Y无直线回归关系。直线回归分析一般可分为三个步骤：（1）将原始数据在坐标图上绘散点图，散点图呈直线趋势，再进行下列步骤，否则，不必进行直线回归分析。（2）根据样本数据求得估计值a、b，从而得到表示应变量Y与自变量X的数量关系表达式： （直线回归方程）， 为Y的估计值（预测值），即当X为某一定值时Y的样本均数， （3）对回归方程作假设检验，并对方程的拟合效果作出评价。附3：对乙酰氨基酚（扑热息痛）：非甾体抗炎解热镇痛药 棱柱体结晶或白色结晶性粉末。无臭，味微苦。分子式C8H9NO2，通常为白色结晶性粉末，能溶于乙醇、丙酮和热水，微溶于水，不溶于石油醚及苯。商品名：日夜百服咛、必理通、醋氨酚、泰诺止痛片、退热净、雅司达、泰诺林、泰诺、对乙酰氨基酚、斯耐普、一粒清。用于发热、缓解轻中度疼痛，如头痛、肌肉痛、关节痛以及神经痛、痛经、癌性痛和手术后止痛等。尤其用于对阿司匹林过敏或不能耐受的患者。对各种剧痛及内脏平滑肌绞痛无效。对乙酰氨基酚是非那西丁(phenacetin)的体内代谢产物，属于苯胺类。通过抑制下丘脑体温调节中枢前列腺素合成酶，减少前列腺素PGE1缓激肽和组胺等的合成和释放，PGE1是主要是作用神经中枢，它的减少将导致中枢体温调定点下降，体表温度感受器感觉相对较热，进而通过神经调节引起血管扩张的导致外周血管扩张、出汗而达到解热的作用，其抑制中枢神经系统前列腺素合成的作用与阿司匹林相似，但抑制外周前列腺素合成作用弱，故解热镇痛作用强，抗风湿作用弱，对血小板凝血机制无影响。 口服吸收迅速，完全，在体液内分布均匀，大部分在肝脏代谢，中间代谢产物对肝脏有毒，以葡萄糖醛酸结合物形式或从肾脏排泄，半衰期一般为1-4小时。仅对轻、中度疼痛有效。本品无明显抗炎作用。口服易吸收，血药浓度0.51h达峰值，在体内95%与葡萄糖醛酸或硫酸结合而失活，5%经羟化转化为对肝脏有毒性的代谢物，均从尿中排出。血浆蛋白结合率为25%。90%95%在肝脏代谢，主要与葡萄糖醛酸、硫酸及半胱氨酸结合。中间代谢产物对肝脏有毒性作用。T1/2一般为14小时（平均为2小时），肾功能不全时不变，但在某些肝病患者可能延长，老年人和新生儿可有所延长，而小儿则有所缩短。对乙酰氨基酚主要以葡萄糖醛酸结合的形式从肾脏排泄，24小时内约有3%以原形随尿排出。不宜长期应用对该品过敏及严重肝肾功能不全者禁用。在岁以下儿童及