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12药剂学专业实验论文药剂学专业实验论文学 校：清华大学 学 院: 化 工 学 院 年 级: 药物制剂 学 号: 。姓 名。 同 组 者: 。 复方双黄连胶囊的研制摘要：目的: 通过复方双黄连胶囊制备的整个过程，掌握常用的中药提取的方法和原理；掌握湿法制粒、制胶囊的过程和技术；掌握胶囊剂项下的质量检查项目和检查方法及药效学研究方法；掌握旋转蒸发仪、溶出仪、崩解仪、及紫外分光光度计的使用。利用统计法观察双黄连对二甲苯所致小鼠耳肿胀的作用。方法： 水煎法提取金银花、连翘、黄芩药材中的有效成分；湿法制粒制胶囊；用分析天平测定胶囊的质量差异、用崩解仪测定崩解时限、用紫外分光光度仪进行黄芩苷含量测定、薄层色谱法进行胶囊剂的鉴别；用小鼠耳肿胀模型进行双黄连胶囊的药效学研究。结果：从原料药制得了胶囊，对胶囊进行了鉴别、质量检查和含量测定及药效学研究，基本符合规定。结论:通过原药材提取，制得胶囊，并进行各项检查和研究，掌握了全套的药物提取、制剂、检查方法，锻炼了良好的实验设计分析和实验技能。关键词：复方双黄连、胶囊、回流提取、湿法制粒、鉴别、检查、含量测定、药效学 Preparation of compound Shuanghuanglian capsulesAbstract：Purpuses To master the commonly used extraction methods and principles of traditional Chinese medicine,to master the usage of Rotary evaporator and Vacuum drier ;to master the methods and principles of wet granulation; to master the methods for the examination of the quality of the capsules and pharmacodynamic research methods; to master Thin Layer Chromatography technique and the use of Disintegration apparatus and Uv spect rophotometry.Methods Chinese medicine Jinyinhua、Lianqiao and Huangqing were extracted using the method of decocting.The capsules were prepared by wet granulating.and identified using the method of TLC identification.The disintegration time of the capsules was examed using Disintegration apparatus. The content of Huangqingan in compound Shuanghuanglian capsules was determined using the method of dual wavelength spectrophotometry. The research of pharmacodynamics of compound Shuanghuanglian capsules was conducted using the model of mouse ear inflammation. Results We got thirty compound Shuanghuanglian capsules that conform to the quality criterions and have anti-inflammatory effect.Conclusion We can prepare compound Shuanghuanglian capsules that conform to the quality criterion with the methods above.These capsules have anti-inflammatory effect ,besides,the greater dose ,the better anti-inflammatory effect it has.Keywords：compound Shuanghuanglian capsules， the method of decocting , wet granulation , identification, examination , content determination , pharmacodynamics引言 复方双黄连胶囊是治疗感冒的常用药，主要成分是黄芪、金银花和连翘，具有清热解毒之功效，用于风热感冒引起的发热、咳嗽、咽痛等。本实验通过提取、制备、鉴别、检查、含量测定及药效学研究来掌握基本的实验操作技能和常用方法，贯穿天然药物化学、药剂学、药物分析和药理学四大学科。通过本次实验，可以进一步巩固理论基础知识和基本实验技能，并且是对自己独立设计、发现问题、分析问题、解决问题的能力的一次考察和提升。实验部分 1 材料 1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器 低速离心机、数显鼓风干燥箱、循环水式多用真空泵、数控超声波清洗器、数显恒温水浴锅、旋转蒸发仪、通风柜、蒸煮锅、调温加热套、电热炉、电吹风、紫外可见分光光度计、粉碎机、崩解时限测试仪、漏斗、离心管、玻璃棒、温度计、纱布、试管、研钵、容量瓶（100ml、10ml）、烧瓶（2000ml、1000ml)分液漏斗（250ml）、锥形瓶、密度计（黄骅市滨海玻璃仪器厂）、胶头滴管、洗耳球、14目筛、16目筛、托盘天平、FA12048电子天平、YP202N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）、YP601ND电子天平、小铝盆、不锈钢托盘、胶囊板、0号囊壳滤纸、展开缸、玻璃板、量筒（100ml、10ml）、烧杯（1000ml、500ml、200ml、100ml）、灌胃器、剪刀、打眼器、喷壶、试管夹、PH试纸及比色卡、棉签、保鲜膜等。1.1.2 试剂 黄芩苷对照品溶液、绿原酸对照品溶液、连翘苷对照品溶液、氨制硝酸银溶液（现配）、10%硫酸乙醇溶液（现配）、盐酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液（现配）、醋酸乙酯（分析纯）、甲醇（分析纯）、正丁醇（分析纯）、冰醋酸、三氯甲烷（分析纯）、蒸馏水（分析纯）、二甲苯、2mol/LHCl、75%乙醇、80%乙醇、无水乙醇、硅胶、羧甲基纤维素钠、苦味酸等。1.2 药物原料药：黄芩、金银花、连翘辅料：淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁、0号胶囊壳1.3 动物健康的小白鼠4只(重量在20-30g）2 制备方法2.1 黄芩、金银花、连翘的提取2.1.1 黄芩的提取 称取黄芩75g，水回流提取三次 ，各2h、1h、1h，合并三次提取液，滤过(两层纱布)，取滤液，滤液回流浓缩至相对密度1.031.08的浸膏，80C下加2mol/L HCL调PH至1.02.0并保温一小时，静置一夜，滤过取沉淀水洗至PH5.0，再用70%的乙醇洗至PH7.0，低温干燥备用。 2.1.2 金银花、连翘的提取 精密称取金银花75g、连翘150g，预留10g左右的干药材粉碎备用。将药材放入2000ml的烧瓶中，加入95%乙醇（没过药材1-2ml)，溶解，用电加热套小火加热，保持微沸，回流提取。1.5h后停止，滤过(2层纱布),取滤液于500ml烧杯中，想药渣中加入适量水（没过药材1-2ml)，继续回流1h，滤过（2层纱布)。合并两次滤液，回流浓缩药液，使成清膏，用密度计测器相对密度为1.20-1.25(70-80)。室温冷却至40，搅拌下加入乙醇，使含醇量达75。充分搅拌，静置12h，滤过，取滤液，残渣继续加入75的乙醇适量，搅匀，滤过，取滤液，合并两次滤液。回收乙醇至无醇味，浓缩成稠膏，测相对密度为1.34-1.40(60)，减压干燥备用。2.2 双黄连胶囊的制备2.2.1 处方组成： 提取的黄芩粉末 提取量金银花、连翘粉碎粉末 10.0g金银花、连翘稠膏 提取量 淀粉 适量 羧甲基淀粉钠 适量 硬脂酸镁 适量 乙醇 适量 制备30粒 2.2.2 制法 将上述制得的金银花、连翘稠膏微热，向其中加入部分预留的金银花连翘粉末，并且迅速用玻璃棒搅拌均匀，然后采用等量递加的方法加入提取的黄芩粉末，搅匀，使成大小不一团块状，可用粉碎机粉碎成较小的颗粒。等量递加淀粉，羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁适量及剩余预留药材细粉，搅拌均匀，用喷雾法喷入无水乙醇适量，迅速用手搅拌均匀并制成软材，过16目筛，湿粒在60温度下烘干，干粒过14目筛整粒，最后用胶囊板装入胶囊壳，得胶囊。2.3 复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查、含量测定2.3.1 双黄连胶囊的鉴别2.3.1.1黄芩的鉴别 供试液的制备：取双黄连胶囊4g，甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇2mL使溶解。黄芩对照药材溶液的制备： 黄芩对照药材1g，同上法，制成黄芩对照药材溶液。黄芩对照品：精密称定，加甲醇制成1mg/mL的溶液。TLC：点样量各2L，硅胶薄层板（硅胶3g、羧甲基纤维素10mL）展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（7:1:2）,展开，晾干，喷以盐酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液，供试品色谱中，在与黄芩对照药材和黄芩对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.3.1.2 双黄连胶囊中金银花的鉴别供试品的制备：取双黄连胶囊4g，加热水40mL使溶解，加醋酸乙酯提取两次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取的水溶液，加0.3ml 2mol/L的盐酸溶液调节pH至1.0，用醋酸乙酯提取二次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL，使溶解，滤过，滤液作供试品溶液。金银花对照药材溶液的制备：金银花对照药材5g，加水50mL，煎煮1h，滤过，滤液加盐酸调节pH至1.0，同法制成金银花对照药材溶液。绿原酸对照品溶液的制备：精密称定，加甲醇制成1mg/mL的溶液。TCL: 点样量各2L,硅胶G薄层板（用前活化处理）展开剂：醋酸丁酯：甲酸：水（7：2.5：2.5）的上层溶液为展开剂，展开，晾干喷以氨制硝酸银试液，立即检视。供试品色谱中，在与金银花对照药材和绿原酸对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.3.2 双黄连胶囊的质量检查2.3.2.1 装量差异取10粒胶囊（药典规定为20粒），称总重，求出平均装量，再分别精密称定重量后，倾出内容物（不得损失囊壳），囊壳用小刷拭净，置通风处使溶剂自然挥尽，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量与平均装量。每粒的装量与平均装量相比较，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。平均装量 重量差异限度 0.3g以下 10 0.3g或0.3g以上 7.5 2.3.2.2崩解时限 取供试品6粒，按中国药典2010年版二部附录XA进行崩解时限检查。硬胶囊应在30min内全部崩解。如有1粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。2.3.3 双黄连胶囊的含量测定对照品溶液的制备：精密称取真空干燥至恒温的黄芩苷对照品12.5mg置50mL容量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇，使溶解，放置至室温，稀释至刻度即得浓度为0.25mg/mL的溶液。供试品溶液的制备：取重量差异下双黄连颗粒研细，用电子天平称取供试品M=3.0000g，置100ml容量瓶中加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，稀释至刻度，摇匀。滤过，精密量取滤液2ml置100ml容量瓶中至刻度，摇匀，滤过，再精密量取续滤液2ml置100ml容量瓶中摇匀。滤过，精密量取滤液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得。标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml,分别置100ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，于277nm和377nm波长处分别测吸光度A值，并且计算A，以A对浓度y进行线性回归，得标准曲线方程。(本实验参考标准曲线为y=75.78x-0.0245 r=0.9994) 供试品吸光度测定：取供试品溶液于277nm和377nm波长处分别测吸光度，分别为A、A，得A=AA，根据回归方程计算样品中黄芩苷的含量。2.3.4 双黄连胶囊的药效学研究 选用健康小白鼠4只，称重，并分别用苦味酸标记。随机分成给药组（1号，2号，3号）和对照组，并且标号。每鼠左耳两面涂二甲苯约0.02mL，右耳做空白对照。分别取药配成0.0125g/ml、0.025g/ml、0.050g/ml的溶液,并且分别标上标签1号，2号，3号。30min后，两组分别灌胃给药0.4ml(最大给药量为0.3ml/10g)。给药组：取相对应的1号，2号，3号药液灌胃。对照组：给等量蒸馏水（代替生理盐水）。1h后，将小鼠处死，剪下双耳并在同一部位打圆耳片，电子天平称重，以（右耳重-左耳重）/左耳作为肿胀率，比较差异。3 结果与讨论 3.1 黄芩、金银花、连翘的提取3.1.1 结果得到黄芩粉末少许，金银花和连翘稠膏 33.1g3.1.2 讨论1. 回流提取法具有提取效率高，时间短，适用于对热稳定的物质的特点，提取得到的黄芩、金银花、连翘较其他方法要多，是常用的中药提取方法。2. 注意提取得到的金银花和连翘稠膏中水分很少，含药量大，同时含有鞣质、多糖等杂质较多，故粘度较大，在后续的制软材过程中要注意辅料的选用、用量及操作技巧。 3.在金银花、连翘提取过程中开始采用的是乙醇提取，但通过老师的指导，发现水提较醇提容易提出，量大，又考虑到使用的乙醇浓度较大了，故在提取过程中向其中加入了部分稀释，得到的实际是稀醇，在后面的二次提取中直接使用了水提，期望得到较高的提取率。3.2 双黄连胶囊的制备3.2.1 结果湿法制粒装囊共制得30粒胶囊。3.2.2 讨论在制软材、制粒过程中出现了一些失误，现总结如下：1. 制软材时，由于金银花、连翘稠膏粘度很大，且经干燥后几乎成硬物，微热后，虽趁热加入了黄芩及预留细粉混合，但是经搅拌后成了硬块，使用粉碎机粉碎后再加入各种辅料混合。由于各种辅料加入的太早且稀释剂淀粉加入量太多，未充分混匀，喷入乙醇粘合后，导致淀粉都包裹在药粉表面，里面的药物成了小的硬粒，导致过筛失败，最后只好使用粉碎机将其粉碎，再次过筛制粒。这在以后的实验过程中要引以为戒，为以后操作积累了经验。2. 制粒时，由于前面制软材时加入的辅料，尤其是淀粉较多，导致得到的颗粒较多，而有效药量相对减少了，装囊时颗粒有剩余，但实际上每个胶囊中有效药量减少了。这不仅浪费了辅料，而且影响了后续的操作。3. 在该处方中，我选用的是淀粉作为稀释剂和内加崩解剂，羧甲基纤维素钠为外加崩解剂，硬脂酸镁为润滑剂，考虑到药物的粘度较大，选用了乙醇，而不是水，作为润湿剂，起润湿粘合作用。如果有条件的话，可以设计不同的处方，定性、定量分析辅料对制备过程的影响。处方分析： 金银花+黄芩+连翘粉 主药 淀粉 稀释剂和内加崩解剂 羧甲基淀粉钠 外加崩解剂 硬质酸镁 润滑剂 乙醇 粘合剂3.3 双黄连胶囊的鉴别、质量检查、含量测定数据记录3.3.1 双黄连胶囊的鉴别色谱图讨论1. 黄芩：如上薄层色谱所示，黄芩供试品色谱中，在与对照药材、对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点（墨黑色），说明供试品中含有黄芩，即复方双黄连制剂中含有黄芩。2. 金银花：如上薄层色谱所示，金银花供试品中，在与对照药材、对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点（黄棕色），说明供试品中含有金银花，即复方双黄连制剂中含有金银花。 3. 连翘：如上薄层色谱所示，连翘供试品中，在与对照药材、对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点（黄绿色），说明供试品中含有连翘，即复方双黄连制剂中含有连翘。4. 3.3.2 双黄连胶囊的质量检查数据1.装量差异结果：平均囊重0.43072 ，平均囊壳重0.09459 ，平均装量0.33613 表3-3-2 胶囊装量差异统计表标号12345678910囊重(g)0.4324 0.4269 0.40690.43960.44110.44660.43800.42540.43330.4165壳重(g)0.09580.09540.09160.09550.09570.09960.09560.09000.09240.1100装量(g)0.33660.3315 0.31530.34410.34540.3470.34240.33540.34090.3065装量差异(%) 0.14-1.37 -6.19 2.372.75 3.23 1.86 -0.221.71 8.8 2.崩解时限：取6粒胶囊侧得崩解时限为12分30秒。讨论1. 由表3-3-2知，本组胶囊中有10粒装量0.3g，装量差异在 7.5% 以内，均符合装量差异要求。2. 崩解时间小于30分钟，符合药典规定。2. 双黄连胶囊中黄芩苷的含量测定数据标准曲线方程：A =75.78c -0.0245，r=0.99941. 表3-3-3 供试品吸光度测定结果波长（nm）277377吸光度A0.1250.037A(AA) 0.0882、黄芩苷的含量%计算代入标准曲线计算公式得黄芩苷浓度：c=0.00148g/100ml=0.0148mg/ml稀释倍数为：100倍黄芩苷的重量计算：m=c100=0.0148100=1.48mg黄芩苷的含量计算：黄芩苷的含量%=m/M100%=1.48/50100%=2.96%讨论1. 一般情况下，每粒胶囊中黄芩苷的量为50mg，含量约为11.6%，而本次实验测得的黄芩含量仅为0.020%，非常低，原因是在第一步提取得到的黄芩量就很少，在后续的操作中又有部分损失，且制软材过程中加入的辅料太多，又考虑到仪器误差、人为误差等诸因素，最终导致测得的含量相当低。2. 开始时测得的A值较大，不在0.2-0.8的范围内，为了减小对实验结果精确度的影响，故稀释了2倍（取5ml,稀释至10ml)，使之在范围内。3.3.4 双黄连胶囊的药效学研究1. 表3-3-4 -1 小鼠的重量标号空白123重量（g)21.022.324.625.5 2.给药量计算：每只20-30g小鼠的给药极限是0.1-0.3ml/10g，这四只小鼠的体重20g左右，则可以将给药体积定为0.4ml；由体重折算的给药浓度为：每只20g的小鼠的折算系数是：378.9将人一天的用药量一次给小鼠为：0.4g/粒*4粒/次*3次/天=0.48g，则：小鼠的给药浓度为：0.48/378.9=0.