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食用菌繁殖技术菌种筛选模型 根据不同的筛选目的，采用不同的筛选模型。如常规筛选抗生素产生菌的方法是将土壤中分离所得的纯种，在含有琼脂培养基的平皿上培养后，用打孔器将菌块移至含有试验菌的琼脂培养基上，在适宜的温度下培养一定时间后取出，如在菌块的周围有透明的抑菌圈，则表明此菌种具有产生抑制试验菌生长的抗菌物质的能力。所得菌种经过摇瓶液体发酵，测定发酵液或菌丝体内抗生素的含量，选出生产能力高的菌种。另一方面对所提取的抗生素进行结构分析、药理试验及临床试验等，确为有效者，即可作为生产菌种。又如筛选脂肪酶生产菌种的方法是将分离所得的霉菌涂布于含有牛脂的琼脂培养基上，恒温培养一定时间，如菌落周围出现透明圈的，则该菌具有分解脂肪的能力，进一步作摇瓶发酵测定酶活力，挑选产量高者作生产菌种的出发菌株。菌种改良 即采用遗传育种的方法，使野生型菌株(从自然界分离筛选而得的出发菌株)的遗传因子 DNA发生突变、重组，从而从中选出产量高、成品质量好或具有新的培养特性如耐产物抑制、能利用廉价原料以及具有生产新品种能力的优良菌种。采用的方法有诱变育种、杂交育种、细胞融合技术和重组DNA技术。诱变育种是利用诱变因子如紫外线、钴-60、乙烯亚胺类等物理或化学诱变剂处理生产菌株的单孢子悬浮液，以获得诱发突变株。随后进行突变株的筛选，从中筛选高产菌株。由于随机的突变群体中，有益突变所占比例很低，要获得高产突变株必须进行大量筛选。近年来，随着发酵代谢控制研究的发展,可根据生物合成途径中的反应点,并通过它们的改变以提高产率或其他特性，如选育抗产物反馈抑制的突变株、增加细胞透性的突变株及营养缺陷型的突变株等。这种理性筛选法广泛应用于氨基酸产生菌的选育。菌种制备 也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。种子制备包括孢子制备和菌丝体制备(见图)，其中(1)(4)为孢子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，无菌操作挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25(或较高温度)下培养57天(或较长时间)。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于2528培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于2837培养514天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐 (6)的种子。如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆等),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应是生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%20%。菌种保存 折叠 总述 使优良菌种的性状保持稳定，人为地创造条件，使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态，即选取优良菌种的休眠体(孢子或芽孢)或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。折叠 低温保存法 简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4冰箱保存,保存时间不超过12个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达34个月;液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35时，即可置于-150-196的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。折叠 脱水保存法食用菌菌种的概念一,菌种的概念 原意是指孢子(相当于植物的种子) ,但在实际生产中,常将经过人工培养的纯菌丝体连同培养基质一同叫做菌种.二,菌种的类型 在生产中根据菌种的来源,繁殖代数及生产目的,把菌种分为母种,原种和栽培种.分别叫一级种,二级种,三级种.母种:将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成.可以繁殖原种,也适宜菌种保藏.原种:母种菌丝在固体培养基上繁殖而成.这一过程增强菌丝对培养环境的适应性,又起到扩繁的作用.原种可以直接出菇.栽培种:由原种扩繁而成.主要是为了扩繁,为生产提供足够的菌种.食用菌菌种的分类中国栽培食用菌历史悠久。1949年以前，主要是传统段木栽培方法栽培香菇和黑木耳二种。建国以后，双孢蘑菇栽培量逐年增加。二十世纪70年代主要栽培种类增加到10个(平菇、草菇、滑菇、金针菇、银耳、毛木耳、猴头)，80年代又增加到14个(增加了灰树花、金耳、茯苓、天麻蜜环菌)，90年代增加到44个，目前规模栽培的食用菌有双孢蘑菇、巴西蘑菇、大肥菇、美味蘑菇、香菇、糙皮侧耳、佛州侧耳、肺形侧耳、白黄侧耳、榆黄蘑、鲍鱼菇、盖囊菇、杏鲍菇、白阿魏菇、红平菇、元蘑、黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、黄伞、草菇、猴头、柱状田头菇、鸡腿菇、灰树花、长根菇、大球盖菇、银耳、金耳、蛹虫草、灵芝、中华灵芝、薄盖灵芝、松杉灵芝、茯苓、猪苓、蜜环菌(伴生天麻)、斑玉蕈、长裙竹荪、短裙竹荪、洛巴口蘑、牛舌菌、褐灰口蘑，其中大规模商业栽培的有31种。从商业规模栽培的种类及其品种看，近年商业规模栽培的种类有双孢蘑菇、巴西蘑菇、大肥菇、美味蘑菇、香菇、糙皮侧耳、佛州侧耳、肺形侧耳、白黄侧耳、榆黄蘑、杏鲍菇、白阿魏菇、黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、草菇、猴头、茶树菇、鸡腿菇、灰树花、银耳、灵芝、中华灵芝、薄盖灵芝、松杉灵芝、茯苓、天麻蜜环菌、斑玉蕈、长裙竹荪、短裙竹荪等。这些栽培种内都有丰富的品种多样性，供栽培者根据市场需要选择使用。这些多样化的栽培种和品种保证了中国在农业生产方式下食用菌的周年栽培和持续发展。 双孢蘑菇有鲜销品种和罐藏品种两大类。 香菇可以按照适宜的基质有段木品种和代料品种;按照出菇的迟早有早生品种和迟生品种;按照产品适宜的商品型式有鲜销品种和干制品种;按照出菇温度有低温(515)品种、中温品种(1015)、高温(1525)品种和广温(1028)品种;按照子实体大小有大叶品种、中叶品种和小叶品种。平菇按照出菇温度有高温品种、中温品种和低温品种;按照子实体色泽有灰色品种和白色品种;按照孢子释放情况有少孢品种、孢子晚释品种、无孢品种。 黑木耳按照子实体着生方式的不同有单片品种和菊花品种;按照色泽有黑色品种和褐色品种。 毛木耳按照子实体色泽的不同有黄背木耳、白背木耳和紫木耳三大类品种。 金针菇按照子实体色泽有黄色品种、淡色品种和白色品种三大类。 滑菇按照子实体发生迟早有极早生品种、早生品种、中生品种和晚生品种。 草菇按照子实体大小有大粒、中粒和小粒三类品种。 杏鲍菇和白阿魏菇按照出菇温度有高温品种和低温品种;杏鲍菇按照子实体形态有柱状品种和保龄球状品种;白阿魏菇按照子实体形态有掌状品种和马蹄状品种。木屑，是早期食用菌栽培主要原材料，随着天然林保护使用量减少，逐渐被玉米芯和棉籽壳所代替。但是，香菇、木耳等木腐菌栽培必须使用木屑。食用菌栽培使用的木屑来源有两种：一种是木材加工厂的废料，一种是专业加工的食用菌专用木屑，木屑作为食用菌栽培的主料使用，木屑的主要成分是粗纤维和碳水化合物，是配方中提供碳源的物质。1、食用菌栽培使用的是阔叶木屑食用菌栽培使用的木屑是阔叶木屑，松树、杉树等针叶木屑含有大量精油、树脂和单宁等成分，这些成分具有强烈的抑菌作用，不适合作为食用菌栽培的培养料。松杉木屑经过蒸煮、长期发酵等方式可以栽培食用菌，但是费工费时，操作不当容易影响菌丝生长，菇行天下建议即使你那里松杉木屑资源很丰富，也不要使用。2、木材加工厂的木屑使用木材加工厂的木屑一定要慎重，要搞清楚木屑的种类，有些木材加工厂加工的不是单一的木材，一旦混入松杉木屑，会对菌丝生长带来影响。木材加工厂的木屑颗粒大小不受控制，一般比较细，在栽培时必须配合棉籽壳等透气性好的原材料，这样才能适合菌丝的生长，取得理想的产量。3、陈旧的木屑比新鲜的好即使是阔叶木屑，也要存放或堆积一段时间，因为新鲜的阔叶木屑也含有一些树脂和单宁等不利于菌丝生长的物质，只不过含量远远少于松杉木屑。4、木屑在食用菌配方中的添加量香菇、黑木耳等木腐菌以木屑为主，其他品种，如平菇、金针菇等配方木屑的添加量不宜过大，菇行天下建议不超过25%，过多会影响产量，因为其他主料棉籽壳、玉米芯的营养远远高于木屑。5、食用菌栽培常用木屑种类食用菌栽培常用的木屑有：杨木、榆木、柳木、柞木、桦木、椴木等，其中硬杂木类木屑最好，产量较高。食用菌属于异养大型真菌，其生长发育所需全部营养物质均来自培养料，为此，栽培食用菌原料的营养与配方，直接影响到其生物学效率。食用菌栽培的原料基质可分为主要原料和辅助原料。主要原料包括菇树和耳树、工农业副产物和下脚料、禽畜粪便、野草和树枝以及食用菌栽培废料等，简称为主料。它们富含纤维素、半纤维素和木质素等有机物，是食用菌生长的主要营养源。辅助原料在培养料中所占比例较小，但对整个培养料的营养起着重要调节与平衡作用的原料，我们简称为辅料。此外，还有覆土、其它添加剂等。一、主要原料1菇树和耳树是木腐食用菌的营养来源，也是这些食用菌人工栽培的培养基质。我国适于木腐菌生长的树木种类多，分布广，在实际生产中要根据树木材质、树龄和粗度以及对不同菇、耳的亲和力，选用适生树种。2 工农业副产品及下脚料 适于栽培食用菌的主要有稻草、麦秸、棉籽壳、玉米秸、玉米芯、木屑、大豆秸、花生壳、甘薯藤、马铃薯秧、花生藤、大豆荚、大麦草、甘薯渣、粉渣等秸杆类、饼渣类。3 禽畜粪便 一般多作为双孢蘑菇、大肥菇、草菇、鸡腿蘑等粪草菌的栽培主料。常用的有马粪、牛粪、猪粪、鸡粪等。4 野草与树叶 一般含有食用菌生长所需的营养，与其他主料配合使用效果更好。5 食用菌栽培废料 也就是一般栽培过香菇、平菇、银耳、金针菇、草菇等的废料称为菌糠，仍含有多量的纤维素等有机物，可再次用它栽培食用菌，用量可达50-80%。下面重点介绍几种常用的主料。 棉籽皮：上个世纪七十年代，河南安阳供销社刘纯业先生发明了利用棉籽皮栽培平菇，从此，中国的食用菌栽培掀开了新的一页。到目前为止，棉籽皮仍是栽培各种食用菌最好的原料，特别是对于木腐食用菌种类更是如此。所以，棉籽皮也称为通用培养料或万能培养料。用棉籽皮为培养料栽培各种食用菌之所以能获得高产，究其原因为：棉籽皮营养丰富全面。不但含有丰富的碳源（木质素和纤维素等），而且还含有丰富的氮源，其C/N（碳氮比）也非常适合菇类的生长发育。由于棉籽皮特殊物理性状而透气性较好。棉籽皮含有大量的短绒，拌料后可容纳大量水份和氧气，能满足出菇时对培养料含水量的要求而获得高产。我们知道，对大多数食用菌品种来讲，子实体的含水量为90%左右，这些水分绝大部分来自培养料，而出菇环境的空气相对湿度主要是减少菇体内水份向外蒸发。 本屑：木屑是仅次于棉籽皮的优质培养料。实践证明，颗粒状的粗木屑优于细木屑；硬杂木屑优于软杂木屑；针叶树旧木屑优于新木屑。对于大多数食用菌来讲（灰树花除外）阔叶树旧木屑均优于新木屑。需要注意的是：阔叶树的旧木屑一定不能腐烂变质，霉变结块，而是指在干燥通风的环境中存放时间较长的木屑或旧木材所产生的新木屑。针叶树的新木屑一定要经过处理才能用于生产。处理方法一般将针叶树新木屑在露天场地堆积半年以上，在此期间应不断向上喷水，使之风吹日晒自然发酵，逐渐改善其物理及化学性状，使一些不利于菌丝生长的芳香性物质和树脂等得到分解和挥发。如果以木屑为主料栽培食用菌须添加一些辅料才能获得高产。 玉米芯：在棉籽皮、木屑缺乏地区，可采用玉米芯为主料栽培食用菌。实践证明，玉米芯作为主料熟料栽培木腐食用菌其效果远远好于麦秸、稻草、玉米秸 、棉花秸 、杂草等。其特点为：透气性好，持水力强，含氮量低，质地疏松，营养后劲不足。为此，栽培实践中应添加一定量的辅料。玉米芯作为主料或辅料栽培食用菌，使用前可先将其粉碎成玉米粒大小，然后用1%的石灰水提前浸泡一夜，使之充分吸水并软化。二、辅助原料在食用菌固体培养料中，用于增加营养，补充维生素或微量元素，改善化学、物理状态的一类物质，用量较小，一般称为辅料，常用的辅料一般有以下几种：1 天然有机物质 主要用于补充主料中有机态氮、水溶性碳水化合物及其他营养成分，如糖、米糠、麸皮、玉米粉、蚕砂、蛋白胨、酵母膏（粉）、麦芽根、大豆粉、玉米糠、高粱糠、谷壳糠等。2 化学含氮物质用于补充主料中的氮素营养，如尿素、硫铵等。3 无机盐用于补充主料中的矿质元素，调节酸碱度，改善化学、物理状态，如石膏、碳酸钙、石灰、过磷酸钙、硫酸镁等。下面重点介绍几种常用的辅料。 麸皮：麸皮是栽培各种食用菌最常用的辅料，它的作用主要是增加培养料的氮源，其蛋白质含为11-13%。麸皮的添加量一般为5-20%且越新鲜越好。 玉米粉：将玉米粒粉碎成米粒大小我们称之为玉米粉。现在来看，用玉米粉比用玉米面的效果要好一些，特别是在高温季节，用玉米面作为辅料，拌料后很容易出现酸败，这是因为玉米面更容易被细菌所利用。玉米粉也是常用的辅料之一，它的作用是增加培养料的碳源和维生素。作为辅料玉米粉添加量应为2-5%，也是越新鲜越好。高温季节可少加些，低温季节可多加些。一般来说，添加了玉米粉就没必要再添加糖类。 米糠：是指水稻或谷子的细米糠，也是越新越好，主要作用是增加氮素。其作为辅料栽培食用菌的效果亦很好，一般添加量为5-15%。 黄豆粉：将大豆粒粉碎成米粒大小我们称之为黄豆粉。主要补充培养料的氮源，其蛋白质含量高。作为辅料黄豆粉添加量应为2-3%，也是越新鲜越好。高温季节可少加些，低温季节可多加些。 粕饼：有些农副产品榨油后的下脚料，如花生饼、豆饼、芝麻饼、菜籽饼等。主要补充培养料的氮源，其蛋白质含量高，还含大量不饱和脂肪酸。但要控制添加量，一般应为0.5-2%为宜。 石灰：石灰可分为生石灰（CaO）和熟石灰（Ca(OH)2），我们通常用的石灰为生石灰，主要作用是调节酸碱度，添加量为1-3%。此外还可用轻质碳酸钙（CaCO3），主要是对培养料的酸碱度起缓冲作用。其添加量为1-3%。 石膏：石膏可分为生石膏和熟石膏。栽培食用菌通常用的是生石膏（CasO3），添加量为1-3%。 白糖：一般为蔗糖（双糖），主要作用是增加栽培初期的碳素，添加量应为1-2%。三、覆土有些菌中在其生长过程中需要覆土，并且有“不覆土不出菇”的习性。常见的有双孢蘑菇、鸡腿菇、竹荪、天麻等等。此外，多数食用菌都可覆土栽培，一旦覆土，生长壮，产量高。因此，覆土也是食用菌栽培的重要原料基质。下面以双孢蘑菇为例说明对覆土的选择要求及处理方法。覆土对双孢蘑菇的发育有重要的作用。首先，覆土能改变培养料中二氧化碳的浓度，使双孢蘑菇的菌丝从营养生长期转入到生殖生长期，形成子实体，并保持培养料的水分，有利于子实体的发育；其次，覆土层中含有许多有益的微生物如臭味假单孢杆菌等，它们的代谢产物含有多种激素，能促进双孢蘑菇子实体的形成；第三，覆土层对子实体有支撑作用，能防止培养料温、湿度的急剧变化，保护料层中菌丝的生长发育，并有机械刺激作用，能促进结菇。（一）、覆土的选择覆土的性质往往影响到出菇的迟早与产量的高低。澳大利亚的蘑菇农场目前多采用泥炭土作覆土材料。泥炭苔藓是最理想的覆土材料，与土壤河泥等材料相比，泥炭苔藓的吸水量要高得多。目前，我国蘑菇栽培上所用的覆土，根据土粒的大小，分为粗土与细土。粗土直径2cm左右，其质地以壤土为好，要选毛细孔多、有机质含量高、团粒结构好、持水量大、且含有一定的营养成分的土壤作覆土材料，以利于蘑菇菌丝穿透泥层生长。菇房每平方米床面约需粗土35kg。细土直径约为0.5cm，如黄豆大小，每平方米床面需细土20kg左右，其质地以稍带粘性的壤土为宜，因床面的泥层上经常喷水，稍带粘性的土粒喷水后不会松散，也不会造成床面板结的现象，如细土选用砂性土，床面喷水后泥粒变得松散，造成床面泥层板结，直接影响到土层的通气性，不利于菌丝的生长，也不利于子实体的形成。（二）、覆土的杀虫灭菌处理。为了防止覆土中带入害虫、杂菌，要严格消毒灭菌，可采用下列处理方法。用10%甲醛溶液及1%的杀虫剂溶液洒在土粒上，1000kg土用以上两种农药各2-4kg，喷洒后拌匀，用塑料薄膜严密覆盖两天，利用农药挥发出的气体杀死病菌与虫卵。用泥土质量1%-2%的石灰拌人泥中，杀死线虫等害虫。由于菇房的覆土量大，且对覆土的质量要求较高，如在覆土期遇到长期下雨等不良天气，往往延误覆土，影响产量。因此，蘑菇菌床所需要的覆土必须在覆土前及早准备，并晒干贮藏备用。（三）覆土的具体方法是：先覆粗土一层，铺满料面，以不见料为标准，并用中土(介乎粗土与细土之间的土粒)填满粗土的缝隙，以防止调水时水分渗入培养料内，造成料内菌丝萎缩，最后铺上一层薄细土。（四）、覆土层的调水双孢蘑菇覆土多采用先将粗土预湿，然后在2-3天内调粗土水分。一般覆粗土12天内开始调水，连续调水3天。在用水量上掌握两头轻、中间重的原则，即第一天调水2.53.5kg/m2，第二天调水4.5kg/m2，第三天调水2.53kg/m2，3天内共调水l011kg/m2。如土料干的调水量还可增加到13.5k/m2。喷水的方法采用轻喷勤喷、循环喷水的方法，不可一次喷水过多，防止水分流大料中，妨碍菌丝生长。调水的具体标准是粗土已无白心，质地疏松，手能捏扁土粒，手捏粘手，此时粗土的含水量在20%左右。其它菌类的覆土也可先喷透水，再保持土层湿润。四、添加剂添加剂是用于增温发酵、抑制杂菌或刺激生长的一类物质，主要有生物发酵剂、抑菌剂（多菌灵、克毒灵、甲基托布津）、生长调节剂（三十烷醇、萘乙酸、福菇肽）。几种原种培养基配方： 锯末培养基：锯末(阔叶树) 78、米糖(或麦麸)20、糖(红糖或白糖，下同)1、石膏粉1，水适量； 棉子壳培养基：棉子壳78、麦麸或米糠20、石膏粉1、糖1，水适量； 锯末玉米粉培养基；锯末(阔叶树) 90、玉米粉8、糖1、石膏粉1，水适量； 稻草段培养基：稻草段78、米糠或麸皮20、石膏粉1、糖1； 锯末、棉子壳混合培养基：锯末40、棉子壳40、麦麸18、石膏粉1、糖1，水适量； 酒糟培养基：干酒糟40、棉子壳(或锯末)40、麦麸18、石灰1、糖1，水适量。 麦粒原种培养基配方 麦粒培养基：小麦98%，石膏1，碳酸钙1%，含水量501，pH7.58.8。 （双孢菇还可加10%牛粪末，木耳香菇平菇可加10%木屑，这样底部不积水） 麦粒原种培养基制作方法 称量。用500毫升的菌种瓶时，一般每瓶用小麦（干）0.2千克左右，用750毫升的菌种瓶时，一般每瓶用小麦（干）0.3千克左右。根据灭菌锅的容量计算后称量。 漂洗。用清水将麦粒漂洗23遍，除去灰尘、麦糠等杂物，同时也减少培养基中杂菌的基数。 浸泡。在制种的前一天下午，用1的石灰水浸泡小麦，夏天一般浸泡1012小时，春秋季气温低时浸泡1520小时（图315）。 煮沸。小麦捞出后在煮麦锅内煮沸，水沸腾后再煮20分钟左右，当麦粒达到“无白心，不开花”的标准后及时捞出，沥干多余水分。煮麦时加水不可偏少，麦粒成熟度是关系麦粒菌种制作成败的关键。 晾晒。将麦粒摊开，晾去表面水分，麦粒不沾手时及时收起。 加辅料。把石膏、石灰（还有粪末或木屑）按比例加入，搅拌均匀。 装瓶、加棉塞。麦粒装至瓶肩即可，棉塞大小、松紧度要适宜。 灭菌。采用高压灭菌，灭菌过程参照母种的灭菌，不过，由于麦粒培养基中杂菌基数大，培养基体积大，热不易穿透，控温灭菌时间应保持在22.5小时，才能保证灭菌彻底。灭菌是否彻底是影响制种成功率的关键。 冷却。灭菌结束后，自然冷却，当压力回复到0时，打开锅盖，利用锅体余热烘干棉塞，当培养基温度降低到50左右时取出，放到干净的地方冷却到常温后才能接种。如果温度很高时就取出培养基，瓶内麦粒上会有大量的冷凝水，对菌丝生长不利。 3、将冷却后的培养基移入接种室接种制作食用菌母种有固体斜面培养基，液体培养基 data-id=link-to-so液体培养基两种方法。保存方法常用的有五种。 1. 斜面冰箱保藏法:把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。高温菌在16摄氏度为宜。有效期3-6个月。 2. 石蜡油保藏法:斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1-1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。保存期可1-2年。 3. 孢子保