酶提取桑葚渣中花色苷的提取.doc

桑葚渣中花色苷的提取摘要：以提高花色苷的提取率为目的。探索果胶酶提取桑葚渣中花色苷的工艺条件。考察影响提取效果的主要因素：酶用量，酶解时间，酶解温度，根据单因素实验结果，设计正交实验优化桑葚花色苷提取工艺。1. 材料与方法1.1材料 酿桑葚酒后的桑葚渣1.2主要仪器 紫外可见光光度计 TU-1800PC 电热恒温振荡水槽 DKZ-2 电子分析天平 BS-210S 高速组织搅碎机 DS-1 电子PH计 PP-15 超滤装置 纳滤装置1.3主要试剂 果胶酶 30000U/g 柠檬酸 分析纯 磷酸氢二钠 分析纯 盐酸 分析纯 无水乙醇 分析纯1.4 试验设计1.4.1 提取液的配制磷酸缓冲液的配制；配制0.1mol/L的柠檬酸溶液；配制0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液；0.1mol/L的柠檬酸溶液398ml，加入0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液102ml。稀释1000ml。2.桑葚中花色苷提取2.1用果胶酶酶解桑葚渣称取10g的桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入一定量的去氧水，加入酶进行酶解。2.2粗提取花色苷（1） 将上述各酶解后的溶液进行灭酶处理，（2） 过滤提取上清液。（3） 在提取液中加入聚合硫酸铁，并进行过滤，除去絮凝沉淀物，得初级滤液（4） 用石油醚对初级滤液萃取3次除去脂类（5） 最后再真空抽滤，保证提取液无颗粒杂质。最终得到桑葚花苷素粗提取液。2.3纯化花色苷（1） 用大孔树脂对粗提取液进行吸附，然后采用45%的乙醇水溶液对已经吸附在大孔树脂上的花色苷有效成分进行洗脱，得洗脱液；（2） 采用纳滤装置对（1）所得洗脱液进行过滤处理，得到透过液和截留液，实现对所需溶液和洗脱溶剂的分离；（3） 将所需溶液旋转蒸发后装入 培养皿中 , 冷藏 于 - 8 0 冰箱冷冻 2 后放入冷冻干燥机冻成干粉 。（4） 所得干粉即为纯化后的花色苷2.4称量干粉的重量3. 花色苷理论测定指标花色苷含量：采用消光系数法计算花色苷含量，用分光光度计，于1cm比色皿中，波长为530nm处测定吸光度。消光系数法：用9mL酸化乙醇（95%乙醇和1.5N盐酸，体积比85：15）于1cm比色皿中，在波长为530处测定吸光值。总花色苷含量计算公式如下：总花色苷含量式中：E-530nm处直接测定的吸光度值（)V-萃取液测定时稀释的总体积数（mL)M-样品重量（g)98.2-1%de1花色苷1mol消光系数 4.桑葚渣中花色苷酶提取法单因素实验4.1.1果胶酶用量对花色苷提取量的影响称取 10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，在温度50，PH3.0，酶解时间1h条件下，酶用量分别为0，3，6，9，12和15mg/g果渣酶解后，移取上清液1ml，测定花色苷含量。果胶酶（mg/g）03691215花色苷提取率画出折线图：由图可知：4.1.2果胶酶酶解PH对花色苷提取率的影响称取 10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解时间1.5h，温度50。分别在PH为2，3，4，5，6，7的条件下进行酶解，移取上清液1ml，测定花色苷含量。PH234567花色苷提取率画出折线图：由图可知：4.1.3果胶酶酶解温度对花色苷提取率的影响称取 10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解时间1.5h，PH3.0，分别在温度为20，30，40，50，60和70的条件下进行酶解后，移取上清液1ml，测定花色苷含量。酶解温度/203040506070花色苷提取率画出折线图：由图可知：4.1.4果胶酶酶解时间对花色苷提取率的影响称取 10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，酶用量40mg/g果渣，在温度50，PH3.0，酶解0，0.5，1，1.5，2和2.5h后，移取上清液1ml，测定花色苷含量。酶解时间/h00.511.52.02.5花色苷提取率 画出折线图： 由图可知：4.2花色苷酶法提取的条件优化 根据单因素实验结果。以酶用量，酶解时间，酶解温度为考察因素，按正交法对酶法提取工艺进行研究，优化花色苷酶法提取的最佳工艺条件。4.2.1正交实验提取花色苷 选用4因素3水平正交设计法,见下表水平因素果胶酶用量PH提取温度/提取时间/h133401264501.5395