微生物 显微镜和显微技术 课件.ppt

2020 1 21 1 2显微镜和显微技术 2020 1 21 2 2020 1 21 3 借助于显微镜观察微生物的方法即显微技术 显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一 2020 1 21 4 显微镜的种类和原理 显微观察样品的制备 2020 1 21 5 一 显微镜的种类和原理 一 光学显微镜 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 现在的光学显微镜分辨的最小极限达0 2 m 2020 1 21 6 普通光学显微镜的几个基本概念 2020 1 21 7 2020 1 21 8 2020 1 21 9 2020 1 21 10 2020 1 21 11 1 普通光学显微镜 由三部分构成 照明系统 包括光源和聚光器 光学放大系统 由物镜和目镜组成 是显微镜的主体 目镜和物镜都由复杂的透镜组构成 机械装置 用于固定材料和观察方便 2020 1 21 12 油镜使用 光镜使用方法 2020 1 21 13 2 暗视野显微镜 原理 聚光镜中央有挡光片 使照明光线不直接进人物镜 只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜 因而视野的背景是黑的 物体的边缘是亮的 适用范围 生活细菌运动性观察 2020 1 21 14 特点 只能看到物体的存在与运动 不能辨清其微细结构 暗视野显微镜的使用 2020 1 21 15 基本原理 把透过标本的可见光的光程差变成振幅差 从而提高了各种结构间的对比度 使各种结构变得清晰可见 3 相差显微镜 相差显微镜使用 2020 1 21 16 微分干涉差显微镜DIC显微镜下的硅藻形态 适用范围 对透明的活体进行直接观察 2020 1 21 17 4 荧光显微镜 原理 荧光素吸收紫外线并放出部分波长较长的可见光 发荧光的物体会在黑暗背景显现为光亮有色物体 2020 1 21 18 绿色 铜绿假单胞菌黄色 蜡样芽孢杆菌 绿色 微管红色 微丝蓝色 核 2020 1 21 19 1931年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的 用高速电子束代替光束 放大倍数可达80万倍 分辨的最小极限达0 2纳米 二 电子显微镜 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 2020 1 21 20 1 透射电子显微镜 目前TEM的分辨力可达0 2nm 用电子束作光源 用电磁场作透镜 用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片 放大倍数最高可达近百万倍 由电子照明系统 电磁透镜成像系统 真空系统 记录系统 电源系统等5部分构成 2020 1 21 21 高尔基体的TEM照片 伪彩色 2020 1 21 22 2020 1 21 23 2 扫描电子显微镜 扫描电子显微镜 大肠杆菌扫描电镜图 工作原理 电子束扫描 激发样品表面放出二次电子 电子产生多少与标本表面立体形貌有关 电子经探测器收集 经光电倍增管和放大器 产生样品立体图像于荧光屏上 主要用于 样品表面结构 2020 1 21 24 扫描电子显微镜原理 2020 1 21 25 2020 1 21 26 3 扫描隧道显微镜 STM 扫描隧道显微镜拍摄的7个铀原子团 2020 1 21 27 2020 1 21 28 4原子力显微镜 2020 1 21 29 2020 1 21 30 光学显微镜和电子显微镜的特点比较 2020 1 21 31 一 光学显微镜制样 活体观察 染色 压滴法 悬滴法 菌丝埋片法 活菌 死菌 美蓝染色 简单染色 鉴别染色 革兰氏染色 鞭毛染色 芽孢染色 二 显微观察样品的制备 2020 1 21 32 1 压滴法 菌悬液滴于载玻片上 加盖玻片 观察 2 悬滴法 盖玻片中央加一小滴菌悬液 翻转置于特制的凹载玻片上 观察 3 菌丝埋片法 无菌小块玻璃纸铺于平板表面 涂布放线菌或霉菌孢子悬液 培养 取下玻璃纸置于载玻片上 观察菌丝形态 光学显微镜样品制备 活体观察 特点 避免染色对细胞结构的破坏 用于运动性 摄食特性 生长繁殖过程中形态变化等观察 2020 1 21 33 用途 微生物的细致形态和结构染色前需要对样品固定 常用固定方法 酒精火焰加热 化学固定 光学显微样品制备 染色观察 2020 1 21 34 1 简单染色法 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检2 革兰氏染色法 涂片 固定 结晶紫色染色 水洗 碘液媒染 水洗 酒精脱色 番红复染 水洗 干燥 观察 2020 1 21 35 二 电子显微镜的制样样品在进行电镜观察前必须进行固定和干燥 制样时一般采用重金属盐染色或喷镀 提高在电镜下的反差 2020 1 21 36 1 透射电镜的样品制备 负染技术 投影技术 超薄切片技术 冰冻蚀刻技术 2020 1 21 37 负染法 将样品的背景染色以凸现样品 所以称为负染法 一般是采用电子密度高 本身不会显示任何结构 又和样品不起反应的物质 如磷钨酸的钠盐将样品包围 同时染色剂还会进入观察对象的内部 这样 既能显示外形 又可在一定程度上反映样品的内部结构 负染法原理 2020 1 21 38 负染色法观察的鞭毛 用途 可以观察细菌细胞 病毒等 2020 1 21 39 在真空条件下 用电子散射能力强的重金属原子来喷镀样品表面 这样在样品和没有喷镀的区域形成了较强的反差 而没有喷镀的部分成了样品的投影 根据投影了解样品的立体形状 高度 投影法 2020 1 21 40 投影法观察的噬菌体 用途 观察细菌的鞭毛或病毒的颗粒 2020 1 21 41 这是最常用的方法 可以观察细胞或其它样品内部的细微结构 样品固定 脱水 包埋 切片 只有在20 100纳米厚度的切片用透射电子显微镜才能观察 所以一般细菌样品 一个细胞要分割成10片到50片 超薄切片法 超薄切片法观察的一种厌氧弧菌 2020 1 21 42 样品 196 迅速冷冻 加温到 100 切割样品 升华 真空 掉断口处的冰 重金属喷镀断口表面 电子显微镜观察 冰冻蚀刻法 2020 1 21 43 冰冻蚀刻法制备的酵母菌内部结构图 优点 可以避免在固定 脱水和包埋过程中造成细胞结构的人为改变而形成的假象 2020 1 21 44 2 扫描电镜样品的制备 样品先要经过