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文档简介

实验九土壤微生物的分离与计数 涂布平板法 1 一 实验目的 1 学习利用平板分离法从土壤分离微生物的基本操作 2 掌握微生物平板计数的方法 2 二 实验原理 土壤是微生物生活的大本营根据某微生物的生长条件 营养 酸碱度 温度 氧气等 而供给它适宜的培养条件 或加入某种抑制剂造成只利于该菌生长 而抑制其他菌生长 用稀释涂布平板法获得单菌落 并不能绝对保证是纯培养 需要结合观察其菌落特征 个体特征 进一步分离纯化 3 样品充分混匀 同一稀释度三个以上重复 取平均值 每个平板上的菌落数目合适 便于准确计数 4 一般用菌落形成单位 colonyformingunits CFU 来表示原样品中的细胞数 5 三 实验材料 1 土样 选择某一生境土壤 去表层土 挖5 20cm深度的土壤数10g 装入已灭菌的牛皮纸袋 2 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 细菌淀粉琼脂培养基 高氏1号 放线菌 每300ml培养基加入1ml3 的重铬酸钾抑制细菌和霉菌生长马丁氏培养基 真菌 孟加拉红抑制细菌和放线菌 6 1 倒平板2 土壤菌悬液的制备 四 实验方法 10g土样 90ml无菌水振荡20min 3 梯度稀释取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中 吹吸均匀 为稀释10倍的样品 依次进行梯度稀释10 1 10 6 7 4 涂布 取0 1ml适当浓度的稀释液涂布于相应平板 每个稀释度做3个平行 每种菌需要做9块平板 及时标记 涂布后静置10分钟 8 5 培养将细菌 真菌 放线菌培养基倒置于30 培养箱中培养3 5d 6 计数7 挑菌 纯化 将培养后长出的单菌落数量 形态 培养特征进行观察 分别挑取单菌落于相应平板上划线 分离 培养 检查菌落是否一致 单纯 也可以用显微镜涂片染色镜检是否是单一的微生物 如有杂菌需进一步纯化 分离 每毫升菌落形成单位 同一稀释度的三次重复平均数 稀释倍数 5 9 平板计数 五 思考题 1 记录利用稀释涂布法对土壤样品进行活菌计数的结果 每克含菌样品中细菌 放线菌 真菌活细胞数 同一稀释度平板上菌落平均数 10 稀释倍数

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