XRCC3基因多态性与宫颈癌发病风险的关系.doc

XRCC3基因多态性与宫颈癌发病风险的关系作者：肖洪玉,吴文清,包小梅,谢红艳单位：广东医学院附属南山医院妇产科【摘要】 目的：研究X线修复交叉互补基因3（XRCC3）Thr241Met多态性位点在广东人群中的分布，并分析其多态性与宫颈癌发病风险的关系。方法：采用病例对照研究方法，应用 PCR-RFLP检测158例宫颈癌患者及年龄相匹配的164例正常人群XRCC3 Thr241Met多态性位点基因型及等位基因，并分析该位点与宫颈癌发病风险的关系。结果：Thr241Met基因型和等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异有统计学意义（P0.05），等位基因Met可能增加个体患宫颈癌的风险（OR=1.983，95%CI1.3642.883，P=0.000），提示Thr241Met多态性可能与个体患宫颈癌风险相关；但Thr241Met多态性与宫颈癌患者临床病理特征无关。结论：Thr241Met多态性可能与宫颈癌风险相关，Met等位基因可增加个体患宫颈癌的风险，但与宫颈癌临床病理特征无关。 【关键词】 宫颈癌；病例对照研究；XRCC3基因；遗传多态性宫颈癌是发展中国家最常见的妇科恶性肿瘤之一，过去常认为高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的感染是导致宫颈癌的主要原因之一，但近年众多的研究表明，个体遗传因素的改变也起着非常重要的作用1。 X 线修复交叉互补基因3 (X-rag repair cross-complementing groups 3，XRCC 3)是主要的DNA修复基因之一，其编码的蛋白质参与同源重组修复（HRR）过程，以修复双链断裂损伤的DNA。研究发现该基因C→T（在exon7）变异，导致第241位密码子Thr→Met的改变。大量研究表明，Thr241Met多态性与恶性肿瘤发病风险相关，携带Met等位基因的个体患乳腺癌、皮肤恶性黑色素瘤、肺癌、膀胱癌等肿瘤的发病风险增加2-3。但目前XRCC3 Thr241Met多态性与宫颈癌发病关系的研究较少，且研究结果有矛盾之处。本实验拟探讨XRCC3 Thr241Met是否与广东人群宫颈癌发病风险相关，以期为宫颈癌的分子发病机制提供可参考的遗传学依据。1 材料与方法1.1 研究对象：158例原发性宫颈癌患者及年龄相匹配的164例健康正常对照人群均来自广东医学院附属南山医院病理科，所有对象均为无血缘关系、汉族个体。病例组均为经验丰富的两名病理医师确诊的宫颈鳞状上皮细胞癌患者，对照组为检验科健康体检者。病例组平均年龄（46.8 ± 10.35）岁，对照组平均年龄（47.2±11.49）岁，两组差异无统计学意义（P>0.05）。根据国际妇产科协会（International federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）临床分期标准，病例组期78例(49.4%)、期45例 (28.5%) ，期35例(22.1%)；有淋巴结转移者72例(45.6%)，无淋巴结转移者86例(54.3%)。所有研究对象均为原发性肿瘤，心电图、胸片正常，无其他器官系统疾病；所有个体血常规、血生化指标均在正常范围。对照组及病例组均在治疗前采血2 ml，经EDTA抗凝，-20保存，酚/氯仿方法提取DNA。1.2 目的片段的扩增与检测：扩增含XRCC3 Thr241Met位点目的片段，根据文献4设计引物，上游引物：5′-GGT CGA GTG ACA GTC CAA AC-3′；下游引物：5′- TGC AAC GGC TGA GGG TCT T-3′；由上海Invitrogen生物技术有限公司合成。PCR反应条件：25 μl PCR反应体系，模板DNA 210 ng，上、下游引物各0.4 μmol/ml，1.5 mmol/ml MgCl2，10×PCR缓冲液2.7μl， 1.5 U Tag DNA聚合酶，100 μmol/ml dNTP， 采用Bio-Rad热循环仪。循环条件：94预变性4 min，94变性45 s，61复性55 s，72延伸1 min，35个循环，最后再72延伸10 min。酶切反应体系为20 μl，10×PCR缓冲液3.5 μl，PCR产物10 μl，限制性内切酶Nla 10 U，其余用水补足20 μl 。反应混合液于37恒温水浴锅6 h，2.0%琼脂糖凝胶电泳（电压130 V），紫外灯显色，摄像并分析检测结果。1.3 统计学分析：采用HWE统计学软件进行Hardy-Weinberg平衡检测，各组间基因型频率和等位基因频率比较采用χ2（Pearson Chi-Square）或确切概率法（Fisher′s Exact Test）检验，以相对危险度近似估计值比值比（odds ratio，OR）和95%可信区间（95%CI）估计各研究因素与宫颈癌发病风险的关系。应用t检验检测两组中的年龄分布。所有的统计均应用SPSS11.5软件包完成。2 结果2.1 Thr241Met基因型分析：PCR产物为456 bp，等位基因Thr有1个Nla酶切位点，而Met有2个Nla酶切位点，所以经Nla消化后，基因型Thr/Thr产生316 bp和140 bp 2个片段，而基因型Met/Met有211 bp、140 bp、105 bp 3个片段，杂合子基因型Thr/Met则有316 bp 、211 bp、 140 bp及105 bp 4个片段，如图1。经测序证实基因型Thr/Thr等位基因为C、C，基因型Thr/Met等位基因为C、T。2.2 Hardy-Weinberg平衡检测：Thr241Met多态性基因型及等位基因频率分布见表1，病例组及对照组基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P0.05），说明研究对象选择能代表研究人群。表1 XRCC3 Thr241Met多态性基因型频率分布及与宫颈癌发生风险的关系例（略）2.3 基因多态性与宫颈癌发病风险的关系：病例组与对照组Thr241Met多态性基因型和等位基因频率分布差异有统计学意义（P<0.05），提示该位点与宫颈癌发病风险有关。携带Met/Met基因型个体患宫颈癌风险是Thr/Thr个体的2.980倍；而与Thr/Thr基因型相比，Thr/Met基因型个体患宫颈癌的风险提高了2.018倍；携带等位基因Met个体的患病风险显著高于携带Thr的个体（P=0.000），见表1。2.4 Thr241Met多态性与宫颈癌临床病理特征的关系：Thr241Met多态性基因型频率在宫颈癌患者不同临床分期和有无淋巴结转移组分布差异无统计学意义（P>0.05），见表2。表2 XRCC3 Thr241Met多态性与宫颈癌患者临床病理特征的关系例（略）3 讨论 DNA修复系统通过同源重组修复、碱基切除修复等途径修复多种因素所致的DNA损伤，对维持个体遗传稳定性起着重要作用。研究表明DNA修复基因多态性可能改变其蛋白质表达水平，从而影响DNA修复功能，成为肿瘤易感性的重要因素。本文报道了XRCC3 Thr241Met多态性与广东人群宫颈癌发病风险的关系。结果显示，在病例组和对照组中该多态性基因型和等位基因分布有显著性差异（P0.05）。与Thr/Thr相比，携带Met/Met基因型个体宫颈癌患病风险显著增加，而携带等位基因Met者患病风险是Thr个体的1.983倍。Narter等研究结果显示241Met是膀胱癌的危险因子，携带Met等位基因的个体患膀胱癌的风险是Thr个体的4.87倍5；同样，Improta等研究结果也显示Met等位基因能显著提高意大利人群患肺癌和结肠癌的风险6。本实验研究结果与上述研究结果一致，但He等研究结果显示XRCC3 Thr241Met多态性与宫颈癌发病风险无关7。 目前，虽然基因多态性与肿瘤发病风险的关系国内外研究较多，但结果仍然不是很明确，来自不同民族、不同地域研究对象或不同的实验室可能得到不同、甚至矛盾的结果，这可能是遗传因素的地域性和种族性差异造成的；也有可能是不同个体暴露因素的差异导致修复蛋白的修复功能不同；还有可能是样本的选择偏倚、不同实验室所用方法的差异等造成的误差。尽管本实验显示在广东地区人群中XRCC3 Met等位基因能显著提高个体患宫颈癌的风险，但该多态性位点与宫颈癌发病机制的关系仍有待于进一步的研究。【参考文献】 1Lars-Christian H，Georgios R.Familial cancer history in patients with carcinoma of the cervix uteriJ.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2002，101(1)：54.2Misra RR，Ratnasinghe D，Joseph A.Polymorphisms in the DNA repair genes XPD，XRCC1，XRCC3，and APE/ref-1，and the risk of lung cancer among male smokers in FinlandJ.Cancer Lett，2003，191(2)：171.3张忠彬，管继如，叶 榕，等.某些同源重组修复基因多态性与慢性苯中毒风险性关系研究J.中国职业医学,2004，31(5)：8.4Mateuca R，Aka PV，Boeck M，et al.Influence of hOGG1，XRCC1 and XRCC3 genotypes on biomarkers of genotoxicity in workers exposed to cobalt or hard metal dustsJ.Toxicol Lett，2005，156(2)：277.5Narter KF，Ergen A，AgaChan B，et al.Bladder cancer and polymorphisms of DNA repair genes (XRCC1，XRCC3，XPD，XPG，APE1，hOGG1)J.Anticancer Res，2009，29(4)：1389.6Improta G，Sgambato A，Bianchino G，et al.Polymorphisms of the DNA repair genes XRCC1 and XRCC3 and risk of lung and colorectal cancer：a case-control study in a South