原子吸收光谱讲义.docx

原子吸收光谱仪火焰法检测细胞内重金属含量一、 实验目的1. 掌握原子吸收光谱仪的使用方法2. 掌握生物体内重金属含量测定方法二、 实验原理2.1原理 原子吸收是一个受激吸收跃迁的过程。当有辐射通过自由原子蒸气，且入射辐射的频率等于原子中外层电子由基态跃迁到较高能态所需能量的频率时，原子就产生共振吸收。原子吸收分光光度法就是物质产生的原子蒸气对特定波长光的吸收作用来进行定量分析的。当光源发射的某一特征波长的辐射通过原子蒸气时，被原子中的外层电子选择性的吸收，使透过原子蒸气的入射幅度强度减弱，其减弱程度与蒸气相中该元素的原子浓度成正比。当实验条件一定时，蒸气相中的原子浓度与试样中该元素的含量（浓度）成正比。因此，入射辐射减弱的程度与试样中该元素的含量（浓度）成正比。定量关系式是：A=lg（I0/I）=KcL式中：A是吸光度；I0是入射辐射强度；I是透过原子蒸气吸收层的透射辐射强度；K是吸收系数；c是样品溶液中被测元素的浓度；L是原子吸收层的厚度。2.2 测定方法2.2.1标准曲线法原子吸收光谱分析是一种相对测定方法，不能由分析信号的大小直接获得被测元素的含量，需要通过一个关系式将分析信号与被测元素的含量关联起来。校正曲线就是用来将分析信号（即响应信号）转换为被测元素的含量（或浓度）的“转换器”，此转换过程称为校正。之所以要进行校正，是因为同一元素含量在不同的试验条件下所得到的分析信号强度是不同的。校正曲线的制作方法是，用标准物质配制标准系列溶液，在标准条件下，测定各标准样品的吸光度数值Ai，以吸光度Ai（i = 1，2，3，4，5）对标准样品的含量ci（i = 1，2，3，4，5）绘制校正曲线I=f（c）。在相同条件下，测定待测样品的吸光度Ax，根据被测元素的吸光度Ax从校正曲线求得其含量cx。三、 实验步骤1. 配置标准溶液梯度配置重金属标准溶液0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、1.5mg/L、2mg/L2. 样品消解与过膜将在重金属溶液中培养3天的细菌离心，过滤，过0.2m滤膜，消解稀释2000倍待测。3.原子吸收光谱仪火焰法操作检测3.1 装灯、启动电脑。等待其启动完毕。3.2打开仪器电源，仪器自检（狭缝响至停止，灯转，波长电机响，自检完毕）3.3运行工作站软件，联机自检。3.4设置仪器参数：选择元素参数选中灯号，灯电流Ma或者3Ma，狭缝0.2nm。“下一步”“扫描”“灯位置调整”“能量平衡”（手动转动灯，使检测到的能量最大） 若能量不是100%时，再点能量平衡。3.5 对光： 将对光板放在燃烧头中间位置，调节对光调节螺丝使得屏幕能量显示50左右， 再通过轻轻转动燃烧头角度使得燃烧头左右能量显示在40%60%之间。3.6设置测量参数：采样速度（350ms），积分时间2秒，3.7新建项目：添加浓度系列；空白根据需要选择；浓度单位。测量次数2-3次。保存。3.8 检查水封里是否有水。如无水，加水；打开排气扇。3.9 打开空压机（先风机，后工作开关），调节气压为0.3Mpa左右；打开乙炔，分压阀压力调至0.06-0.08Mpa（0.07Mpa）不能超过0.1Mpa。3.10 在仪器参数里设置乙炔流量，按住红色开关数秒，待燃烧头上火焰点着后松开，将左边的乙炔流量计调至贫燃焰（1.3L /min左右）3.11 将毛细管放入蒸馏水中点“能量平衡”（若不是99%或100%再点击“能量平衡”）点“开始”红线出现 后，按“空白”一次（起调零作用），毛细管依次放入系列标样中，采样。3.12 标样测量完毕后，将毛细管放入蒸馏水中，观看屏幕左下角线性相关系数符合0.999以上。则开始分析样品。3.13 分析样品：依次放入样品中， 每次样品之间用毛细管放入蒸馏水中清洗。3.14测量完毕，点击“停止”。毛细管放入蒸馏水中中清洗十分钟左右。处理打印结果。取出毛细管3.15 关乙炔主压阀，然后燃烧到灭火。 关闭空压机（先关工作，后风机