p16和细胞周期素D1蛋白在子宫内膜癌中的表达.doc

p16和细胞周期素?D1蛋白在子宫内膜癌中的表达中华妇产科杂志 1999年第9期第34卷 论著摘要作者：廖予妹魏丽惠富琪屠铮虞有智虞幸单位：廖予妹（现在河南医科大学第二附属医院），魏丽惠，富琪, 屠铮, 虞幸北京医科大学人民医院妇产科100044；虞有智病理科近年来人们发现，细胞周期失控是癌变的重要原因。p16是近年来发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因1，其表达产物为p16蛋白。细胞周期素D1蛋白可与p16蛋白竞争性的与周期素依赖激酶(CDK)4结合，共同完成对细胞周期的调控2。p16及细胞周期素D1蛋白与子宫内膜癌的关系尚不清楚。本研究应用免疫组化方法，观察p16及细胞周期素D1蛋白表达与子宫内膜癌生物学行为的关系。一、材料与方法 1.材料:随机选取本院1989年12月至1997年6月的子宫内膜癌(内膜癌)手术切除标本41例，其中腺癌32例，腺鳞癌6例，透明细胞癌2例，浆液性乳头状腺癌1例。12例正常子宫内膜(正常内膜)组织来源于手术切除的子宫肌瘤或腺肌症标本，其中增生期内膜7例，分泌期内膜5例。所有标本均经常规甲醛固定，石蜡包埋。内膜癌的细胞分级采用FIGO 标准，分为1、2、3级。临床分期采用1988年FIGO分期标准进行分期，其中I期24例、II期3例、III期13例、IV期1例。2.免疫组化染色:兔抗p16多克隆抗体和鼠抗细胞周期素D1单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，采用链酶菌素-生物素(LSAB)方法，双抗体染色。3.结果判定:p16蛋白表达：细胞膜或胞浆呈棕黄色或黄色为阳性细胞，切片中无阳性细胞为阴性表达(-)；阳性细胞30为弱阳性或低表达()；30为阳性或正常表达(+)。细胞周期素D1蛋白表达：细胞核呈棕黄色或黄色为阳性细胞，切片中阳性细胞10为阴性表达(-)；1050为弱阳性表达(+)；50为强阳性表达(+)，(+)及(+)均视为阳性表达。4.统计分析:采用2检验及Fisher精确检验。二、结果1.p16和细胞周期素D1蛋白在正常内膜和内膜癌中的表达:p16蛋白在正常内膜的增生期呈阳性表达，2例分泌期呈阳性表达，3例分泌晚期呈弱阳性表达。在内膜癌中，p16蛋白阳性表达17例，占41.46%，弱阳性或低表达10例(24.39%)、阴性表达14例(34.15%)。细胞周期素D1蛋白在正常内膜呈阴性表达。在内膜癌中,细胞周期素D1蛋白呈强阳性表达12例（29.27%），呈弱阳性表达7例（17.07%）。2.p16和细胞周期素D1蛋白表达的关系:与p16蛋白阳性表达者相比，p16蛋白阴性表达或低表达者的细胞周期素D1蛋白强阳性表达率明显增高，分别占11.76%和41.67%(2=4.262，P0.05)。细胞周期素D1蛋白的强阳性表达与p16蛋白表达呈负相关。3.p16及细胞周期素D1蛋白表达与内膜癌临床病理特征的关系： (1)与病理类型的关系：内膜腺癌的p16及细胞周期素D1蛋白阳性表达率与其他类型癌相比,差异无显著性(P0.05)。 (2)与病理分级的关系：p16蛋白在1、2级（高、中分化)内膜癌中的阳性表达率明显高于3级(低分化)癌(2=6.447，P0.05)，而细胞周期素D1蛋白在高分化子宫内膜癌中的阳性表达率显著低于中、低分化癌(2=4.174，P0.05)。 (3)与肌层浸润及临床分期的关系：p16蛋白表达在无肌层浸润及浸润1/2者的阳性表达率为55.17%，显著高于肌层浸润1/2者(2=6.671，P0.05)，而细胞周期素D1蛋白在浅、深肌层浸润者蛋白表达阳性率比较，差异无显著性。p16蛋白在晚期内膜癌的阳性表达率明显低于早期(2=5.468，P0.05)，而细胞周期素D1蛋白在晚期内膜癌的阳性表达率明显高于早期(2=5.381，P?0.05)。见表1。表1子宫内膜癌p16和细胞周期素D1蛋白表达及其临床病理参数的关系项别总例数p16蛋白细胞周期素D1蛋白例数阳性率(%)P值例数阳性率(%)P值-+-+病理类型腺癌32181443.75 0.05 18 1443.750.05其他*9633/9*4 55/9*病理分级G1136753.85 10323.08G2178952.94 0.0571058.820.05G3111019.095654.55肌层浸润无6155/6*51 1/6*1/2 23131147.830.05 131043.480.051/2 121118.334866.67临床分期III期27121555.560.0518933.330.05IIIIV期1412214.2941071.43*包括腺鳞癌6例，透明细胞癌2例，浆乳癌1例*例数少于10,不计算百分比为G1及G2与G3比较为G1与G2及G3比较三、讨论1.p16和细胞周期素D1蛋白协同异常表达的意义:细胞的增殖失控是肿瘤组织最显著的特点,癌基因、抑癌基因对细胞增殖周期各环节直接或间接的调控作用发生异常时,可导致肿瘤的发生。CDK是细胞周期调节的中心,其成员的激活和磷酸化,可促进细胞由G1期向S期及G2期向M期的转变2，CDK4需与细胞周期素D1蛋白结合才能被激活，p16蛋白能与CDK4结合，抑制CDK4细胞周期素D1蛋白复合物的催化活性,任何引起细胞周期素D1蛋白过度表达或p16蛋白缺失或下调的因素，都会导致细胞分裂增殖失控。本研究发现,在正常增生期，子宫内膜p16蛋白呈阳性表达，而细胞周期素D1蛋白呈阴性表达。41例子宫内膜癌患者中，p16蛋白正常阳性表达率仅为41.46%,而细胞周期素D1蛋白强阳性表达率为29.27%，弱阳性表达率为17.07%,且周期素D1蛋白强阳性表达与p16蛋白阳性表达呈负相关,表明,p16蛋白的缺失或下调及细胞周期素D1蛋白的过度表达，在内膜癌的形成过程中可能起一定作用。2. p16蛋白异常表达与内膜癌生物学行为的关系:p16蛋白产物对肿瘤细胞生长具有抑制作用，p16蛋白失活是其参与肿瘤进展的机理之一。p16蛋白表达与内膜癌的关系国内外研究较少3，本研究结果显示，内膜低分化癌的p16蛋白表达率明显下降；随着癌细胞肌层浸润深度的增加,p16蛋白的正常表达率也显著下降,且与临床分期有关,即晚期患者的正常表达率低于早期患者。徐苗厚等3报道，p16蛋白阴性者内膜癌细胞分化程度低，易转移。表明p16蛋白的异常表达，在内膜癌的进展过程中可能起一定作用。3细胞周期素D1蛋白异常表达与内膜癌生物学行为的关系:细胞周期素D1蛋白与内膜癌的关系,国内外研究甚少，目前仅见1篇报道4。本研究结果显示，细胞周期素D1蛋白表达与内膜癌的细胞分化及临床期别有关,中、低分化及临床期别晚的内膜癌患者细胞周期素D1蛋白表达率明显升高。表明细胞周期素D1蛋白的过度表达与内膜癌的生物学行为有关。在内膜癌患者中是否存在细胞周期素D1的基因扩增尚不清楚,有待进一步探讨。参考文献1Kamb A,Cruis NA,Weaver-Fedhaus J,et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science,1994,264:436-440.2Hunter T,pines J. Cyclins and cancer: cyclin D and CDK inhibitors come of age. Cell, 1994,79:573-582.3徐苗厚，张振国，鹿群，等.子宫内膜癌中p16蛋白表达的免疫组化检测及其临床意义的研究.现代妇产科进展，1997，6:320-323.4Nikaido T, Shuanfang L