肉汤琼脂培养基使用说明.doc

编号：022020品种名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(Nutrient Agar)用 途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995)。原 理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。图鉴：配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠 5g琼脂15g最终pH 7.30.2使用方法：1、 称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌15min，备用。2、 (食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000稀释液。3、 根据对样品污染情况的估计，选择23个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。4、 稀释液移入平皿后应及时将凉至46左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于361温箱中培养482h。5、 观察结果。6、 菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。7、 菌落计数的报告：选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计A：稀释度的选择：应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。菌落数的报告：菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。稀释度选择及菌落数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数个/g或mL报告方式个/g或mL10-110-210-31多不可计1642016 40016 000或1.61042多不可计295461.637 7503 8000或3.81043多不可计271602.2 27 100 27 000或2.71044多不可计多不可计313 31 300 31 0000或3.1105527115 270270或2.71026 000 110107多不可计3051230 500 31 000或3.1104质量控制：本品接种下列菌株，置于361恒温箱中培养482h，结果如下：菌 名菌 号 生长状况 菌落特征大肠埃希氏菌ATCC25922良好白色灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。金黄色葡萄球菌