四种肿瘤标志物在卵巢肿瘤检测中的联合应用.doc

四种肿瘤标志物在卵巢肿瘤检测中的联合应用【摘要】目的：探讨血清中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)，胰岛素样生长因子-2(IGF-2)，瘦素(leptin)和泌乳素(PRL)水平与卵巢癌的关系。方法：应用液相芯片技术检测20例卵巢癌术患者，35例卵巢良性肿瘤患者和30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者血清中IGF-2、leptin、MIF和PRL的水平，并进行比较。结果：卵巢癌手术前、后患者IGF-2、Leptin以及MIF 水平差异有统计学意义(P0.05);卵巢癌手术组与良性卵巢病变组间IGF-2和 MIF水平的差异有统计学意义(P0.01，P0.05)。结论：IGF-2 、leptin和MIF与卵巢癌有一定的关系，其对卵巢癌的诊断价值值得进一步研究。 【关键词】 卵巢肿瘤;IGF-2; Leptin; PRL;MIFABSTRACT Objective： To discuss the relation between the serum levels of insulin-like growth factor-2 ( IGF-2)， Leptin， prolactin (PRL) and macrophage migration inhibition factor(MIF) and diagnosis of ovarian cancer. Methods：By multiplexed Luminex assay， serum levels of IGF-2， Leptin， PRL and MIF were measured and compared in 20 patients with ovarian cancer,35 with benign ovarian tumor and 30 with ovarian endometriosis patients. Results：There were significant differences in serum levels of IGF-2， Leptin and MIF in patients with ovarian cancer before and after surgery (P0.05). Serum levels of IGF-2 and MIF in patients with ovarian cancer were significantly different from those of patients with benign ovarian tumor (P0.01 and P0.05， respectively). Conclusions：Changes of serum levels of IGF-2， Leptin and MIF were associated with ovarian cancer. The further study on their diagnostic value is needed.KEY WORDS Ovarian cancer; IGF-2; Leptin; MIF; PRL自20世纪80年代以来，许多学者致力于卵巢癌的筛查研究，以期提高亚临床期及疾病早期诊断率，降低死亡率。目前临床探索的重点仍为血清肿瘤标志物检测，虽然目前已经找到了一些肿瘤标记物， 但一直未达到满意结果。最近几年，国、内外研究者发现了几种新的生物标志物，可作为卵巢癌的相关肿瘤标志物，但是缺乏血清浓度的检测报道。我们应用液相芯片技术分别对胰岛素样生长因子-2(IGF-2)、瘦素(Leptin)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与泌乳素(PRL)这几种新型标志物进行了检测，以探讨其与卵巢肿瘤的关系，现报道如下。1材料与方法1.1研究对象选取2007年1月至2007年12月中山大学孙逸仙纪念医院妇科收治卵巢肿瘤病人85例，包括手术-病理检查确诊的卵巢癌病人20例，卵巢子宫内膜异位囊肿30例及卵巢良性肿瘤35例。患者入院次日晨间空腹抽取静脉血2 mL，置于未加抗凝剂的试管中，室温下静置0.5 h,3 000 rpm离心5 min，提取血清，置于-70 冰箱保存待检。各组患者在年龄、体重、生育情况上的差异无统计学意义，年龄18 74 岁，平均年龄49.5岁。对照组患者试验前6个月内均未接受过手术、化疗或激素药物替代等治疗。1.2研究方法应用Luminex液相芯片技术检测血清中IGF-2、Leptin、 MIF和PRL的浓度。Luminex液相芯片检测仪及多肿瘤标志物液相芯片检测试剂盒由广州益善生物技术有限公司研制。数据采用中位数与四分位数间距描述，不同组间比较选用秩和检验。检验水准α=0.05，以P0.05时为显著差异。2结果卵巢癌患者术后Leptin(Z=-2.036，P=0.042)及IGF-2(Z=-2.132，P=0.033)明显升高，MIF术后显著降低(Z=-1.993，P=0.046)，差异均有统计学意义。PRL术后降低，但是差异无统计学意义(Z=-1.458，P=0.145)，见表1.表1术前、术后Leptin、MIF、PRL及IGF-2水平比较表2卵巢癌组与良性对照组间Leptin，MIF，PRL及IGF-2水平比较3讨论卵巢癌是女性生殖器常见肿瘤，其发病隐匿，病死率高，且缺乏理想的早期诊断方法。当早期肿瘤局限于卵巢时，超声检查难以诊断，而血清肿瘤标志物水平升高可先于影像学改变和临床症状数个月出现， 因此检测高敏感性和高特异性的血清肿瘤标志物水平是早期诊断卵巢恶性肿瘤的重要方法。目前检测肿瘤标记物进行卵巢瘤诊断一直未达到非常满意结果。近来国、内外研究者发现了几种新的生物标志物，可作为卵巢癌的相关肿瘤标志物检测。但是由于某些肿瘤标志物在血清中的含量较低，一般常用的血清肿瘤标志物检测方法(比如放射免疫分析、酶联免疫分析以及化学发光免疫测定等难以检出。本文应用液相芯片技术分别对IGF-2、Leptin、MIF与PRL进行了检测。IGF-2为有丝分裂原，是细胞从G→S期转变所必须的因子，通过自分泌和旁分泌机制对许多组织细胞有促增殖和抗凋亡作用1。IGF-2在许多肿瘤中表达明显增加 ，对肿瘤的发生、发展、转移及预后等起重要作用。研究表明，在多种肿瘤中如肝癌、大肠癌及胰腺癌等IGF-2表达明显增2。长期以来， 对IGF-2与卵巢肿瘤相关研究较少。近来有研究发现3， 进展期上皮性卵巢癌细胞中IGF-2 基因过度表达， PCR 法测得上皮性卵巢癌细胞中IGF-2 基因表达为正常卵巢表面上皮细胞的三百多倍(P0.001)，且肿瘤分化越低IGF-2 基因表达越高，多变量分析表明， IGF-2 表达是低生存期的一个独立预测因子。在生理状态下，血清中IGF-2含量甚微，一般较难检出，因此长期以来对肿瘤患者血清中IGF-2的研究不多。吉亚君等4利用放射免疫分析研究的结果表明， 肺癌患者在化疗前血清 IGF -2水平(2.51.8) ng/mL显著高于正常人组(0.450.13) ng/mL，经化疗后一个月(1.10.55)ng/mL与正常人组比较仍有显著性差异。Mor等5 则研究发现， 卵巢癌患者血清中IGF-2水平较对照组显著降低，可以作为一种血清标志物用于早期诊断卵巢癌。血清IGF-2浓度可能有复杂的调控机制，与局部组织不同。本研究显示卵巢癌患者IGF-2与对照组比较有明显差异，呈低水平表达，与Mor等5 研究结果一致。我们认为IGF-2 有可能为上皮性卵巢癌诊断的血清分子标记物之一，尤其在早期卵巢肿瘤诊断中具有重要的临床意义。Leptin是肥胖基因(ob 基因)编码的产物，1994年由Zhang 等从遗传性肥胖小鼠(ob) 的脂肪组织中首次克隆，主要由白色脂肪组织产生、分泌，在调节能量代谢、摄食行为和体重平衡中发挥着重要作用。1998年Sierra-Honigmann 及 Anne首次报道了Leptin是一种促血管生成因子。Leptin能促细胞增殖分化以及血管生成，可能在肿瘤的发生、发展中发挥了一定的作用。近年研究发现在肿瘤组织中有高表达的Leptin及受体的存在，表明Leptin与乳腺癌、前列腺癌及胃癌等恶性肿瘤的发生有关6-9。流行病学调查研究发现，绝经前妇女血清Leptin水平与乳腺癌发生的危险性存在着负相关。而另有研究结果表明乳腺癌患者的Leptin血清水平明显高于对照组，绝经前、后Leptin水平无显著差异。Coskun10等通过检测 30 例转移乳腺癌、55 例非转移癌者及正常对照者中血浆Leptin水平，发现三组Leptin水平无显著差异，认为血浆Leptin水平与乳腺癌无关。Mor5等通过系列研究发现Leptin在卵巢上皮性癌患者血清中呈低水平状态，可以作为一种血清标志物早期诊断卵巢癌，与其他三种标志物联合检测即可预测卵巢上皮性癌，具有较高的准确度。本研究显示Leptin在卵巢癌术前组中与其他对照组中有明显差异，也呈低水平表现，与Mor等5 研究结果一致，提示Leptin水平与卵巢癌有关。PRL的催乳和促黄体作用早已为人们熟知，近来许多研究显示，PRL及其受体在多种肿瘤细胞中都有表达，推测它在肿瘤的发生、发展中有一定作用。有学者发现，许多乳腺癌患者尤其是绝经期妇女，其血清PRL水平显著升高。另有研究显示PRL与前列腺癌之间相关，提示PRL及其受体可能在前列腺癌的发生、发展中发挥了重要作用。2005年Mor等5研究发现卵巢癌患者血清中PRL与对照组有明显差异，提出PRL可以作为卵巢癌诊断的血清标志物之一。但是本文的研究结果表明PRL在卵巢癌患者血清中与对照组无明显差异。PRL与卵巢肿瘤是否相关尚有待进一步研究。MIF是由激活的T淋巴细胞产生的细胞因子，因能减慢或抑制巨噬细胞的移动而命名。MIF具有多种生物学功能，包括巨噬细胞活性，如粘附、吞噬、杀瘤活性及诱导一氧化氮(NO)产生等。近来研究认为其还参与肿瘤的发生，刺激肿瘤生长和肿瘤血管的形成11,12。有研究表明13在上皮性卵巢癌细胞浆中存在MIF表达， MIF蛋白的表达强度与临床分期相关，在转移癌组织中MIF蛋白表达强度与原发癌差异有显著性，提示MIF与肿瘤转移有关。以上关于MIF的研究均采用免疫组化的方法。 Mor5使用蛋白芯片检测方法发现MIF在卵巢癌术前组、术后组及健康组血清中有显著性差异，但其利用ELISA方法重复检测时，MIF则未能测出。本文采用液相芯片技术检测出部分卵巢癌患者的血清中MIF明显增高，其他患者的检测值均低于检测的灵敏度及线性范围。MIF可以作为卵巢癌诊断的一个预测指标，在卵巢癌的诊断和治疗监测中有一定的临床价值。【参考文献】 1Byrne AT，SouthgateJ，BrisonDR，et al.Effects of insulin-like growth factor andon tumor necrosis factor alpha induced apoptosis in early murine embryosJ. Reprod Fertil Dev,2002,14：79-83.2Weber MM， Fottner C， Liu SB， et al. Overexpression of insulin-like factor II receptor in human colon carcinomasJ . Cancer， 2002， 95 ：2086-2095.3Sayer RA， Lancaster JM， Pittman J， et al. High insulin-like growth factor-2 (IGF-2) gene expression is an independent predictor of poorsurvival for patients with advanced stage serous epithelial ovarian cancerJ. Gynecol Oncol， 2005， 96： 355-361.4吉亚君，杨成喜，卞宝祥等.肺癌患者化疗前后血清NSE、IGF-和TNF-检测的临床意义J. 放射免疫学杂志.2008,21：118-119.5Mor G， Visintin I， Lai Y， et al. Serum protein markers for early detection of ovarian cancerJ. Proc Natl Acad Sci USA， 2005， 102：7677-7682.6Hu X， Juneja SC， Maihle NJ， et al. Leptin-a growth factor in normal and malignant breast cells and for normal mammary gland developmentJ.J Natl Cancer Inst， 2003， 95：1171-1173.7Ishikawa M， Kitayama J， Nagawa H. Enhanced expression of leptin and leptin receptor (OB-R) in human breast cancerJ. Clin Cancer Res， 2004， 10：4325-4331.8Saglam K， Aydur E， Yilmaz M， et al. Leptin influences cellular differentiation and progression in prostate cancerJ. J Urol， 2003， 169： 1308-1311.9Cal K. Lin M.D， Rama Pai Ph.D， Teresa D， et al. Does leptin promote gastric cancer growthJ? Gastroenterology,2003， 9：55-56.10Coskun U， Gunel N， Toruner FB， et al. Serum leptin， prolactin an