课件：洋铁酸模抗真菌活性部位筛选.ppt

长春 中医药 大学 洋铁酸模抗真菌活性部位筛选 长春中医药大学 董佳佳指导老师 贡济宇教授 贡济宇 现任长春中医药大学药学院副院长 教授 硕士研究生导师 吉林省实验教学示范中心 中药学实验教学示范中心主任 国家中医药管理局三级实验室 中药药物分析实验室负责人 吉林省第二批拔尖创新人才 中国中医药学会中药分析专业委员会委员 副秘书长 2008年长春市药学会药物分析专业委员会副主任委员 2004年国家药品价格评审专家 2005年吉林省科学技术评估中心评审专家 2005年吉林省中医药学会理事 2005年吉林省真菌学会理事 2006年国家发改委第一批药品价格评审专家 2007年高等学校实验教学示范中心评审专家 2007年吉林省微生物学会理事 2007年九三学社长春中医学院委员会副主委 2001年 目的 洋铁酸模提取物体外抗真菌作用 1 研究 方法 采用滤纸片法研究洋铁酸模2种不同溶剂提取物的抑菌活性及筛选抑菌活性部位 结果 洋铁酸模乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的生长有较明显的抑制作用 结论 洋铁酸模抑制真菌生长的活性部位为乙酸乙酯层 关键词 洋铁酸模 乙酸乙酯提取物 2 正丁醇提取物 抗真菌作用 DSX 280型手提式灭菌锅 杭州汇尔仪器设备有限公司 C52型医用超净工作台 上海绿宇精密仪器公司 乙酸乙酯 正丁醇为分析纯 沙氏培养基 供试菌 红毛癣菌JLC31374由吉林大学基础医学院病原微生物教研室真菌菌种保藏中心提供 抑菌滤纸片 内径6mm 实验用洋铁酸模药材采于吉林省吉林市左家地区 经长春中医药大学药用植物教研室张亚芝副教授鉴定为洋铁酸模 Rumexpat1entiaL var eallosusF Sehm etMaxim 正品 洋铁酸模药材经不同溶剂提取所得正丁醇提取物 乙酸乙酯萃取物 精密称取各提取物适量 均以氮氮二甲基甲酰胺 DMF 为溶剂 分别配制成高浓度80mg ml 低浓度40mg ml供试品溶液 另取氮氮二甲基甲酰胺 DMF 溶液适量 作为空白溶液 将各供试品溶液与空白溶液置于121 高压灭菌30min 备用 沙氏培养基 3 蛋白胨10g 葡萄糖40g 琼脂15g加入无菌水1000ml 搅拌加热煮沸至完全溶解 121 高压灭菌30min 备用 配制好的培养基 经高压蒸汽消毒灭菌后 冷却至50 左右 无菌操作下倒于干热灭菌好的培养皿内 每皿约15 20ml 即培养皿内培养基的厚度约2 2 5mm 将测试菌于28 环境下活化 用接种环挑取少许菌加入生理盐水充分振荡 制备菌悬液 采用麦氏比浊法调菌悬液浓度达0 5Mcfarland单位 即含1 5 107 108cfu ml 稀释10倍 备用 在无菌条件下用微量移液器吸取菌悬液100 l 滴在平板培养基上 用涂布器涂匀 分别将2种提取物抑菌滤纸片均以三点法放在涂有菌液的培养基上 5 同种提取物置于同一平皿上 每种提取物重复做3次 做好标记 将2种提取物滤纸片放于同一培养皿中 重复做3次 做好标记 同法制备空白对照组 将各组抑菌平皿倒置于恒温培养箱中 28 培养72h后 取出测定抑菌圈直径大小 根据抑菌圈大小计算出抑菌率 数据结果按统计学方法进行单因素方差分析 复方克霉唑乳膏 无菌条件下 称取3 6g 1 8g 0 90g药膏 研磨均匀 分别加DMF稀释并定容至10ml 克霉唑浓度为3 6mg ml 1 8mg ml 0 9mg ml 硝酸益康唑乳膏 唯达宁 无菌条件下 称取3 6g 1 8g 0 90g药膏 研磨均匀 分别加DMF稀释并定容至10ml 有效成分浓度为3 6mg ml 1 8mg ml 0 9mg ml 在无菌条件下用微量移液器吸取菌悬液100 l 滴在平板培养基上 用涂布器涂匀 将滤纸片蘸取阳性药 以三点法放在涂有菌液的培养基上 重复做3次 做好标记 将抑菌平皿倒置于恒温培养箱中 于28 培养72h后 观察抑菌圈 取出测定抑菌圈直径大小 4 结果分析 三种阳性药高 中 低浓度组于28 培养72h后 观察抑菌圈 取出测定抑菌圈直径大小 根据抑菌圈大小 所得数据均以均值 标准差 S 表示 结果见表1 并如图1所示 抑菌圈直径在20mm左右时最适宜 最适抑菌阳性药结果见表2 表2红毛癣菌的最佳阳性药 表1不同阳性药浓度的抑菌圈 红毛癣菌 比较 mm 取洋铁酸模的2种提取物 正丁醇提取物 乙酸乙酯提取物 按2 1 2 4项下抑菌实验条件操作 观察其抑菌效果利用SPSS13 0软件进行统计学处理 各组总体均数用单因素方差分析比较 ANOVA 分别比较洋铁酸模乙酸乙酯提取物 洋铁酸模正丁醇提取物的抑菌效果 采用t检验 P 0 05 结果见表3 4 结果表明 洋铁酸模的2种提取物在高浓度时 对两种真菌的作用均强于空白对照组 在低浓度时 抑菌作用随之减弱 其中乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的生长均有一定的抑制作用 形成明显的抑菌圈 而正丁醇提取物的抑菌作用不明显 在相当于10g ml的生药浓度时 两菌株间抑菌圈显示出统计学差异 P 0 05 实验表明 洋铁酸模乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的抑菌效果更加显著 表4乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的抑菌率 注 与空白组相比 P 0 05 P 0 01 表3正丁醇提取物对红毛癣菌的抑菌率 5 1本实验首次对洋铁酸模进行抑真菌实验 经采用打孔法与纸片法比较 两种方法均操作简便但实际操作时 打孔法操作常出现打孔不完整或破损情况 且平皿间实验不易平行 而滤纸片法 滤纸规格统一 相对误差较小且药量消耗小 灵敏度高 故采用滤纸片法 洋铁酸模的2种粗提液与空白对照组比较 洋铁酸模乙酸乙酯提取物 洋铁酸模正丁提取物的抑菌效果均强于空白对照组 5 2正丁醇与乙酸乙酯2个部位对红毛癣菌的生长有抑制作用 其中乙酸乙酯部位抑菌作用明显 正丁醇部位抑菌作用不理想 以上创新研究为开发吉林省洋铁酸模的药用资源提供了理论依据和技术支持 5小结与讨论 1 曹松年 赵芳洲 中药复方及单味药对真菌的抑菌作用 J 中华医学杂志 1962 12 781 786 2 周英 段震 李纯纯等 石莲子的体外抑菌活性研究 J 时珍国医国药2008 19 4 995 996 3 王端礼 医学真菌学 实验室检验指南 M 北京 人民卫生出版社 2005 4 国家药典委员会 中华人民共和国药典 一部 北京 中国医药科技出版社 2010 附录134 5 国家药典委员会 中华人民共和国药典 一部 北京 中国医药科技出版社 2010 附录126 6 叶萍 何前军等 抗常见细菌及真菌作用实验研究 J 现代预防医学 1997 24 1 17 参考文献 后面内容直接删除就行资料可以编辑修