全文预览已结束
下载本文档
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
实验二:动物细胞融合一、实验目的1、了解动物细胞融合的常用方法聚乙二醇诱导细胞融合的基本原理。2、学习化学融合的基本操作过程。二、实验用品1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、Hanks溶液(pH7.4)、Alsevers细胞保存液0.85%氯化钠溶液。3、器材普通光学显微镜、离心机、量筒、载玻片、盖玻片离心管、废液缸等。三、实验原理细胞融合是指在自发或者诱导条件下,两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合,包括病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。1、病毒诱导融和仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后,这些病毒即可诱导细胞发生融合。2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合,如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列,在去除这些物质之后,细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力,细胞膜融合,胞质流通,发生融合。化学诱导方法,操作方便,诱导融合的概率比较高,效果稳定,适用于动、植物细胞,但对细胞具有一定的毒性。PEG是广泛使用的化学融合剂。3、电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。其中,电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子,沿电力线排布成串,再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜,细胞膜的脂质分子发生重排,由于表面张力的作用,两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。PEG,又名聚乙二醇,是目前应用做多的一种化学促溶剂。其优点是使用方便,活动稳定,容易制备和控制。四、实验步骤1、鸡血细胞的制备与保存。2、取鸡血1ml+0.85%的NaCl溶液4ml,在1000r/min的离心机内离心5分钟。3、将上一步的沉降血球(去上清液后,约0.1-0.2ml),加入GKN液至4ml,制成细胞悬液。4、取细胞悬液1ml稀释到10倍,共10ml5、取上步得到的细胞悬液1ml,加0.5ml的PEG液,静置5min后摇匀。6、吸取细胞悬液,在凹面载玻片上滴一滴,加入Janus green染液,用牙签搅匀,染色3min后用滴管滴到盖有盖玻片的血细胞计数板,在显微镜下观察并计数。五、实验结果计数结果:右上角:14个细胞核,6个融合右下角:20个细胞核,8个融合左上角:13个细胞核,7个融合左下角:10个细胞核,6个融合中间格:17个细胞核,8个融合融合率=47.3%六、 结果分析及讨论1、实验速度较慢,鸡血细胞失去活性。2、结果中由于PEG的作用,细胞变形情况较为严重。3、离心速度较小,时间较短使细
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2024年04月河南省地震局2024年度公开招考事业单位工作人员笔试历年高频考题摘选后附答案详解
- 2024年04月河北承德平泉市卫健系统所属事业单位选聘32人笔试历年高频考点试题后附答案详解
- 2024年04月江苏南京市卫生健康委员会所属事业单位招考聘用239人笔试历年高频考点试题后附答案详解
- 2024年04月广西科学院空间智能团队招考聘用笔试历年高频考题摘选后附答案详解
- 2024年高等教育文学类自考-04121中国文化导论笔试参考题库含答案
- 2024年高等教育农学类自考-06634园林植物遗传与育种笔试参考题库含答案
- 2024年陕西住院医师-陕西住院医师儿外科笔试参考题库含答案
- 2024年重庆住院医师-重庆住院医师妇产科笔试参考题库含答案
- 2024年证券从业-证券发行与承销笔试参考题库含答案
- 2024年艺术设计行业技能考试-陶瓷拉坯工笔试参考题库含答案
- 企业进出口业务授权委托书
- 喷塑技巧培训课件
- 2024中国农业科学院公开招聘高频考题难、易错点模拟试题(共500题)附带答案详解
- 教学能力比赛 中职公共基础《英语》教案
- 2024年福建广电网络集团招聘高频考题难、易错点模拟试题(共500题)附带答案详解
- 2022-2023学年江西省重点高中高一(下)期中数学试卷(含解析)
- 【课件】律师办理刑事案件基本流程及风险防范
- 有效课堂教学策略课件
- 康复机构肢体残疾儿童功能评估规范
- 项目管理模式类型
- 投资测算-高尔夫球场-高尔夫球场投资估算及运营费用和收益
评论
0/150
提交评论