抗狂犬病血清生产工艺及检查.doc

抗狂犬病毒血清：由狂犬病毒固定毒免疫马所得的血浆，经胃酶消化后纯化制得。生产工艺流程：1.原液：从免疫马匹（单采血浆术）获得免疫血浆，分离血浆(血浆精制:去除杂蛋白)（可加入适宜防腐剂），并做无菌检查即得原料血浆（其抗狂犬病效价应不低于80IU/ml）；免疫血浆稀释，加适量胃酶（用生理氯化钠溶液将胃酶配制成1mg/ml溶液），进行类A血型物质含量测定（通则3415，血凝抑制法），必要时可加适量甲苯，调整适宜PH值后，在适宜温度下消化一定时间(胃酶消化:切去Fc端)。加热、硫酸铵盐析、明矾吸附进行纯化；超滤法或硫酸铵沉淀法进行浓缩，加适量防腐剂硫柳汞或间甲酚，然后澄清、除菌过滤后即得到原液。2.半成品：合格原液按成品规格以灭菌注射用水稀释，调整效价、蛋白质浓度、pH值及氯化钠含量，除菌过滤。3.成品：分批、分装、包装。原液半成品成品1. 抗体效价 第一法小鼠中和试验法（仲裁法）（通则3512）2. 无菌检查（通则1101）3. 热源检查（通则1142）无菌检查（通则1101）1. 鉴别（1）动物中和实验（通则3512）（2）免疫双扩散法（通则3403）或酶联免疫法（通则3418）2. 物理检查（1）外观（2）渗透压摩尔浓度（通则0632）（3）装量（通则0102）3. 化学检定（1）pH值（通则0631）（2）蛋白质含量（通则0731第一法）（3）氯化钠含量（通则3107）（4）硫酸铵含量（通则3104）（5）防腐剂含量（加硫柳汞通则3115，加间甲酚通则3114）（6）甲苯残留量（通则0861）4. 纯度（1）白蛋白检查（通则0541第三法）（2）F(ab)2含量，SDS-PAGE（通则0541第五法）5. 抗体效价（通则3512）6. 无菌检查（通则1101）7. 热源检查（通则1142）8. 异常毒性检查（通则1141）F(ab)2 ：Fragment antigen-binding即抗原结合片段。抗体免疫球蛋白IgG经胃酶处理,切除pFc段,纯化获得的F(ab)2。图1 被胃蛋白酶消化的抗体产生两个片段：F（ab）2片段和pFc片段。免疫双扩散法：指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线；将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。酶联免疫吸附试验(以下简称ELISA)：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N，N一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP)，N，N，N，N四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各