流行病学科研设计报告.doc

同济医院消化内科流行病学科研设计报告幽门螺杆菌的分离培养技术和诊断实验程 静 07201100352008-5-12 成绩：801. 诊断性试验的金标准是什么？2. 样本量是如何计算的？研究背景一、幽门螺杆菌(HP)感染非常普遍,平均世界人口的50%被感染。国家的发达程度越低，感染率越高。二、HP是慢性胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的主要致病因素。HP感染与胃癌的关系也越来越受到人们的重视，世界卫生组织已经把HP列为第一类致癌因子。三、HP的特性：微需氧菌，在5%O2 、10%CO2、 85%N2的环境中生长良好。最适生长温度是37。对湿度、营养要求较高。四、目前,国内外检测HP的常用方法是：快速脲酶试验、组织切片染色镜检，14CO2呼气试验。另外还有血清学检测、分子生物学方法等。但都存在着缺陷。五、分离培养至少根据HP特殊的生长环境、典型的形态特征、尿素酶的作用三个要素来确诊的。分离培养应该作为微生物感染诊断的金标准。六、在中华消化学会制订的幽门螺杆菌若干问题的共识意见中，“临床诊断标准”和“科研诊断标准”都没有提到分离培养。七、HP耐药问题已经越来越严重，是导致根治HP失败的主要原因。国内外研究显示，克拉霉素、甲硝唑、阿莫西林等常规用于根治HP的药物有效率都在下降。目前解决HP耐药的做法是加强用药，联合用药。研究目的和意义一、 希望通过我们的研究能促进提高Hp分离培养技术，提高HP诊断的正确率，引起大家对HP分离培养重要性的认识，减少误诊误治率。二、 通过HP的分离培养和药敏试验可以正确指导临床用药，减少耐药菌株的产生。节约医疗资源，合理用药。提高根治率。资料和方法一、 研究对象：入选标准为来同济医院就诊的，有胃、十二指肠疾病主诉的、接受胃镜治疗的病人。年龄、性别不限。二、 方案设计：在同济医院消化内科门诊就诊的病人中选取符合条件的病人300例，告知病人及家属，填写知情同意书。每位患者做胃镜时在胃窦部取3块活检标本，分别进行分离培养、快速脲酶试验、病理切片检查，同时对病人进行14CO2呼气试验。然后收集上述四种方法的结果，先求出它们各自的总检出率，然后列四格表进行卡方检验，再对结果作统计学分析，比较分离培养方法与目前使用的三种常用检查方法的差异。三、 检查方法1、 分离培养：活检标本接种于Hp选择性血培养基上，置于专门设计的微需氧培养罐（含5%O2 、10%CO2、 85%N2 混合气体）内，电脑监测和控制气罐内气体比例，37培养72h。Hp菌落鉴定：针尖状菌落，经涂片革兰染色检查呈阴性S不可胜数或弧形弯曲状菌，脲酶阳性。2、 病理切片：活检甲醛固定，切片染色，镜下可见Hp典型形态的细菌，报告Hp阳性。3、 快速脲酶试验：取胃粘膜活检标本一块，置于快速脲酶制剂内，按制剂说明1min内试剂变红色，即判断为HP阳性。4、 14CO2呼气试验：是脲酶依赖性体内试验之一。嘱病人空腹，用温开水口服1粒14C-UB，静坐15min后，收集受试者呼气标本测试。四、 收集数据，对结果作统计分析：首先对四种诊断方法总检出率作统计，再分别将分离培养方法与目前常用的病理切片、快速脲酶检测、14CO2呼气试验三种诊断方法一一作比较，对它们之间检出率的差异显著性作卡方检验。技术路线存在问题成功地分离培养幽门螺杆菌（HP）是本研究的关键。 HP是个特殊的微生物，为微需氧菌，分离培养不同于一般细菌或厌氧菌，目前还没有成熟的分离培养技术，我们的研究还处于探索阶段，需要提供特定的恒定的环境，还要考虑杂菌生长，如霉菌等。这些均需要反复实验，逐步探索！根据国内外成功培养经验，以及实验室设施