豆浆成分测定.doc

关键词:凯氏定氮法;蛋白质;豆浆蛋白质是复杂的含氮有机化合物,分子量很大,大部分高达数万至数百万,分子的长链从数纳米至100nm ,它们由20 种氨基酸通过酰胺键以一定的方式结合,并具有一定的空间结构,所含的主要化学元素为C、H、O、N ,在某些蛋白质中还含有P、Cu、Fe 、I 等元素,但氮的相对丰度基本稳定,是区别于其它有机化合物的主要标志。不同蛋白质的氨基酸构成比例及方式不同,所以各种蛋白质其含氮量也不同。一般蛋白质含氮量平均为16 % ,即1 份氮素相当于6. 25 份蛋白质,此即蛋白质系数。我们利用蛋白质的这一特性,主要采用微量凯氏定氮法测定松杉灵芝子实。蛋白质含量测定最常用的方法凯氏定氮法是通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量，由于样品中含有少量非蛋白质用凯氏定氮法通过测总氮量来确定蛋白质含量，包含了核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉、以及含氮色素等非氮蛋白质含氮化合物，所以这样的测定结果称为粗蛋白。凯氏定氮法是测定总有机氮量较为准确、操作较为简单的方法之一，可用于所有动、植物食品的分析及各种加工食品的分析，可同时测定多个样品，故国内外应用较为普遍，是个经典分析方法，至今仍 被作为标准检验方法。此法可应用于各类食品中蛋白质含量测定（一）方法提要1、 消化 样品中含氮有机物经浓硫酸加热消化，硫酸使有机物脱水，然后，有机物炭化生成碳，碳将硫酸还原为SO2，碳生成CO2；SO2使氮还原为氨，本身则氧化SO2，而消化过程生成的H，又加速了氨的形成。反映过程中，生成无水和SO2逸去，而NH3则与硫酸结合成硫酸铵，留在溶液中。2NH2(CH)2COOH 13H2SO4 (NH4)2SO4 6CO2 12SO2 16H2O 2H2SO4 C 2SO2 2H2O CO2H2SO42NH3 (NH4)2SO42、蒸馏 硫酸铵在碱性条件下，释放出氨2NaOH (NH4)2SO4 2NH3 Na2SO4 2H2O3、吸收与滴定 蒸馏过程中多放出的氨，可用一定量的标准硫酸溶液吸收，然后再用标准氢氧化钠溶液反滴定过剩的硫酸溶液，这样便可计算出总氮量，进而推算出蛋白质含量。或用硼酸溶液吸收后，再用标准盐酸溶液直接滴定，反应如下：NH3+H3BO3=NH4+H2BO3-H2BO3-+H+（由盐酸给出）=H3BO3硼酸溶液仅呈极微弱酸性，在酸碱滴定中并不影响所加指示剂的变色反映，但具有吸收氨的作用，所以被采取作为吸收液（二）仪器凯氏烧瓶，定氮球，漏斗，冷凝管，锥形瓶，滴定管，移液管（三）试剂 （1）浓硫酸（2）硫酸铜提高溶液的沸点（3）硫酸钾催化剂 （4）50%氢氧化钠（5）指示剂 甲基橙、铬黑T（6）饱和硼酸溶液（7）EDTA标准溶液 0.01092mol/L（8）CaCO3（9）NH3NH4CL（10）Mg2+EDTA（11）豆浆 取样时间：9月15日早上，地点：二期食堂二楼（四）操作一，氮含量的测定精确称取样品5毫升与750毫升凯式烧瓶中，加入10克无水硫酸钾，0.5克硫酸铜与25毫升浓硫酸。在通风橱中，先以小火加热，待泡沫停止后升高温度，消化至透明无黑粒，透明以后，需加热一段时间（1/21小时）。冷却，装好蒸馏装置将冷凝管下端浸入接受瓶内的液面之下（瓶内预先放60毫升饱和硼酸液及混合指示剂2滴）。在凯式烧瓶内加入50100毫升蒸馏水，玻璃珠粒，从安全的漏斗中加入6080毫升50%氢氧化钠液，至溶液呈蓝黑色为止。将定氮球连接好。用直接加热蒸馏，蒸至凯式烧瓶内残液减少到三分之一时，将冷凝管尖端提出液面，使蒸汽冲洗约一分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。用0.1N盐酸滴定。蛋白质（%）=（V*N*0.014*6.25*100）/WV滴定时所耗盐酸标准溶液的毫升数N标准盐酸溶液的当量浓度0.0141毫克当量氮的克数6.25氮的蛋白质换算系数W样品克数 操作二，钙含量的测定用移液管吸取25ml余液，加入20ml水和5mlMg2+EDTA，加入掩蔽剂三乙醇胺，然后假如10ml NH3NH4CL，再加入少量铬黑T指示剂，立即用EDTA滴定，当溶液由酒红色转变为紫蓝色即为终点。（五）注意事项（1） 消化时间一般约1小时左右即可，消化时间过长会引起氨的损失。如样品中含赖氨酸或组胺酸较多时，消化时间需延长12倍。因为这两种氨基酸中的氮在短时间内不易消化完全，往往导致总氮量偏低。（2） 若样品中含脂肪或糖较多时，消化的时间要长些。还应注意发生的大量泡沫，防止它溢出瓶外。须要的时候摇动一下，并减小火焰，甚至停止加热半小时后，再用小火消化（3） 在蒸馏过程中要注意接头处有无松漏现象。蒸馏完毕后，先将吸收瓶脱离冷凝管，继续蒸馏1分钟，将附着在尖端的标准酸液，完全洗入三角瓶内之后，再取下来，最后灭火（4） 硫酸钾的作用，加入硫酸钾可以提高溶液的沸点而加快有机物的分解，它与硫酸钾作用生成硫酸氢钾可提高反应温度其反应式如下： K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O+SO3一般纯硫酸的沸点在340摄氏度左右，而添加硫酸钾后，可使温度提高到4000C以上，原因主要在于随着消化过程中硫酸不断地被分解，水分不断逸出而使硫酸钾浓度增大 ，故沸点升高。但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起已生成的铵盐发生热分解而造成损失：（5） 催化剂 2CuSO4=CuSO4+SO2+O2 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2+O2 Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2 此反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有硫酸亚铜（褐色生成，溶液呈现清澈的蓝绿色。 可以指示消化终点的到达 下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。（6） 蒸馏完毕，先将蒸馏出口离开液面，继续蒸馏1min，将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内，再将吸收瓶移开，最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液将发生倒吸。（六）实验数据项 目第一次第二次第三次样品消化液（mL）0.000.010.01滴定消耗盐酸标准溶液（mL）4.353.643.68消耗盐酸标准溶液平均值（mL）3.89含氮量=0.065g/ml蛋白质=0.41g/ml项 目第一次第二次第三次样品消化液后稀释10倍（ml）0.040.010.00滴定消耗EDTA（mL）3.973.853.95消耗EDTA溶液平均值（mL）3.92 Ca%=0.1092*V*40*250/5 g/mlCa%=0.86g/ml（七）问题及讨论1、资料查找不全面，导致实验中遇到问题较多。2、实验中不够当心，打破了实验仪器。3、定氮后的余液不能完全转移，使实验有比较大的误差。4、实验缺乏思考，没有对问题进行很好的总结（八）实验小结 通过本次实验，掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。实验前面查找资料的能力比较欠缺，在丘老师和陈老师的指导下才把实验改善。（三) 罗紫哥特里（Rose-Gottlieb）法（碱性提取法）1原理：用氨乙醇破坏乳的胶体性状及脂肪球膜。非脂成分溶于氨乙醇中，而脂肪游离出来，再用乙醚石油醚提取脂肪。2仪器、试剂：抽脂瓶水浴锅烧瓶蒸馏装置3操作方法：（1）仪器