心脏型脂肪酸结合蛋白.doc

心肌型脂肪酸结合蛋白：其结构，功能及生物传感对早期心肌梗死诊断的应用摘要：作为早期心肌损伤的标志物之一的心肌型脂肪酸结合蛋白（HFABP）和肌红蛋白相比，为提示优越性指标的研究提供了美好的前景。作为血清标志物，HFABP由于其体积小及其水溶性在心肌受损后很容易出现在血流中，其在发病后的6小时达到高峰。和组织中水平相比，血浆中的HFABP含量水平是低的，心肌梗死后微量HFABP的释放就会导致所占比列的很大升高。这个有力的释放参数使其成为快速评估急性心肌梗死的一个理想指标。对于免疫学测定和免疫学实验的发展的需要以来运用HFABP作为排除早期急性心肌梗死的需求是巨大的。在本综述中，我们描述了目前对于在缓冲器，血浆和全血中HFABP的测定的各种免疫检测和免疫传感器的发展。我们同时也阐述了与ELISAJ技术相比较，其检测技术的原理及其性能参数。内容：1介绍2 HTFABP-早期急性心肌梗死的标志物3 HFAB的结构和功能的关系4 HFABP的功能5 检测技术5.1免疫检测5.2免疫传感器 5.2.1电化学传感器 5.2.2光学传感器5.3一种快速检测血浆中FABP的微粒增强免疫检测。5.4免疫检测的几点。 5.4.1过滤层析-免疫亲和力5.5 FABP免疫测定的一步方法5.6 芯片系统5.7微球蛋白的磁性辅助作用及其氟免疫测定。6 结论及展望 1简介心血管疾病（CVDs）是全球成人死亡率最高的因素。根据世界卫生组织（2008）的报告，2008年估计有17300000人死于心血管疾病，占据全球死亡数的30%。在这些死亡病例中大约有7300000是死于冠状动脉性心脏病，而大约有6200000是死于脑卒中。目前的常规检查方法有心电图，胸部x线，超声心动图，心脏介入术，CT扫描及血液检查。对心肌缺血的早期治疗对于预防心肌更是是有效的，但是为了使这种治疗达到最大效果，早期的诊断是至关重要的。因此，生物标志物在提高疾病诊断的准确性，患者的危险分层及预后起着关键性的作用。在心血管疾病过程中及心肌刚受损后，释放入血液被称为生物分析物的心脏生物标记物能够检测出来。目前心肌肌钙蛋白是作为心肌损害标志物的金标准，因为其对于心肌组织来说非常特殊。当肌钙蛋白和肌酸激酶同工酶（CK-MB）及肌红蛋白（早期产物）结合时，可以提高肌钙蛋白的检测的灵敏度，以用于急诊科室对急性急性心肌梗死的安全排除。但是，CK-MB和肌红蛋白并不完全是心肌的产物，两者并不能区分出是心肌受损还是骨骼受损。由于对心肌缺血早期产物甚至是心肌发生不可逆性损伤后的产物的不断探索，已发现了许多有前景的，新的生物标志物。HFABP是一种在心肌细胞胞浆中的丰富的，低分子量（14-15kDa）的，稳定的小分子蛋白。由于其小分子，水溶性以及快速通过细胞间隙的特性，其可在症状发生后的90就能出现（在血液）中，并在第6小时时达到高峰。这些有力的参数，使其成为对判断和排除急性和反复心肌梗死的理选择。一些报道揭示了其作为敏感的生物指标对急性心肌梗死早期诊断的潜在价值以及对患有急性冠脉综合症病人判断预后分级的作用。以往已发表过关于HFABP的检测的评价，其中还包含有详细的过程的细节的解释。在本文章中，我们对当前各种免疫检测及免疫传感器的现有地位做出了评价，其中包含有其各有的特性，并指出其在急诊科适用的可能性。2 HTFABP-早期急性心肌梗死的标志物根据WHO传统定义，三大特征即胸痛（通常小于20分钟），心电图改变及心肌酶的明确的升高中有两项可以确定心肌梗死。然而，伴随着新新的生物化学标志物的产生尤其是心肌肌钙蛋白，这种定义由于心肌损伤的生物化学标志物使用的重要性又被重新定义。最近，急性心肌梗死的诊断标准已经按ESC/ACF/AHA/WHF所更改：探测心肌标志物（最好是肌钙蛋白）的升高及降低，其其参考价值至少在99%以上，并且至少有以下几点中至少一项的心肌梗死的证据：心电图的改变，病理性Q波的演变；心肌活性缺失或者是局部运动异常的影响证据。急性冠脉综合征的发病机理根源于动脉粥样硬化斑块的破裂或者脱落，这可能是自身的自限行或者渐进性，其发生可以是很快也可是很长时间发生的。斑块核心的暴露会激活凝血级联反应，进而引起血小板聚集导致的血栓形成。这可从三个方面对心肌造成损害：一是血管内血小板聚集将导致血管的堵塞,从而导致缺血（血管部分闭塞）甚至梗死（血管完全闭塞），二是血小板微团聚体的释放可能导致小血管的闭塞，从而引起心肌缺血及局部心肌梗死；三是血栓形成及其引发的血小板级联反应可导致血管的部分甚至是完全闭塞，从而引起心肌缺血甚至是梗死。从斑块破裂到血管闭塞的整个过程可以分为三个阶段：心肌缺血的初始阶段，心肌梗死阶段及血管的重塑阶段。在这三个阶段的每一个阶段都有大量的生物化学血清标志物可以被利用，尤其是心肌肌钙蛋白和肌红蛋白。然而，对于早期急性心肌梗的诊断，作为金标准的肌钙蛋白并没有作用，因为其只能在6小时候才释放入血流，这导致其对早期诊断的不可能性。一种有前景的生物化学标志物心肌型脂肪酸结合蛋白应运而生。首次发现HFABP从受损的心肌释放，是5-6小时时达到高峰，36小时候又恢复到正常水平，和肌红蛋白的释放特性相似。但是，由于其在心肌细胞中的高含量及其血浆中的低水平，对于早期急性心肌梗死及其梗死面积的诊断比肌红蛋白更敏感。Pelser评价了HFABP作为心肌损伤早期标志物潜能的极限研究，表1列出了这几年关于HFABP和肌红蛋白在对患有胸痛的入院病人的诊断性能方面的比较的研究。在每个研究中，HFABP和肌红蛋白的比较中，ROS下的面积和AUC曲线有这明显的差距，这提示了HFABP对症状发生后的6小时内的优越特性。只有少数的研究证明了HFABP对疑似冠脉综合征的病人的不利临床结果的早期诊断的潜在价值。但是结果揭示了心脏病发生率和心脏死亡的高度相关性。HFABP的释放可以用来测定心肌梗死的面积及其在血浆清除率。一些研究还证明了HFABP对接受了冠脉搭桥手术后病人心肌组织损失的早期诊断的价值。尽管现已证明HFABP作为早期标志物的优越性，但其仍然存在一些缺点,例如同时存在于骨骼和心肌中，短暂的诊疗窗及由肾功能不全导致的高价值的伪像。但是这些缺点可以通过一些方法减弱甚至消除，例如通过使用肌球蛋白和HFABP的比率来区分心肌损伤和骨骼损伤，使用HFABP与cTnT的结合弥补患有急性冠脉综合征的病人的诊疗窗问题，个人肾脏清除率的计算和应用来避免HFABP的假象。3 HFABP的结构和功能的关系.HFABP是属于胞浆脂肪酸结合蛋白（HFABP）中的一个成员，FABP包含有9个小分子的成分，其分子量在14-15ka。人们绘制出了HFABP的编码基因，其在1号染色体上，其DNA长达8kb。其包含有4个外显子和3个内显子，全部的基因组和FABP中的其它成员是相似的，唯一的区别是他们内显子的长度的变化。该基因是由长度为1.2kb的启动子严密调控的，启动子决定了FABP3的组织的特异性表达。FABP的家族成员显示的氨基酸序列的相似性为22-73%，但是它们的三维结构是高度保守的。它们由10条反平行的股构成，其每两条错构成一个近似椭圆的结构。桶状结构显示了结构的稳定性，其不受化学修饰的影响，它有庞大的荧光基团或是特定的突变部位脂肪酸结合蛋白的结合点处于带有-螺旋的桶里面，这样防止了配体结合腔的暴露为了解决人类HFABP的三维结构，人们用了x-射线衍射的方法。脂肪酸似乎被束缚在一个的结构中，羧酸酯基可以与酪氨酸的128处的侧链和精氨酸的126处的侧链及内部的分子相互作用。螺旋-转角-螺旋就像一个假定的脂肪酸那样发挥作用，而-螺旋被认为是关键的结构部位。一些对于研究方案的研究表明不同的脂肪酸会在此处诱导处该蛋白的不同构想，这表明这种蛋白通过“适合”的机制来容纳配体分子，而这种机制在HFABP中更加明显，其是由于HFABP比其它的脂肪酸族类有一个更加刚性的结构。所有的脂肪酸结合蛋白都拥有一个保守的三种特征：模体1（包含有G-x-W的三联体）形成了第一段股的一部分,模体2包含有4股的整段及其5股，模体3包含有9股和10股。现已用定点诱变的方法来详细研究HFABP的结构功能。这些研究显示出了存在于稳定的，配体亲和力的，特异的保守区域的氨基酸的重要性。例如：精氨酸的106位，126位和脯氨酸128处的突变会影响到配体的结合及其HFABP的稳定性，苯丙氨酸处的16位在配体结合中起到关键的作用。和其它的脂肪酸相比较而言，HFABP显示出了其与硬脂肪酸的最大亲和力，这种硬脂酸的解离常数为671 nM4 HFABP的功能脂肪酸是心脏和骨骼肌的主要供能的来源。细胞内的脂肪酸受FABPs的影响，FABPs能够增加其水溶性及帮助其转运到不同部位的细胞中用于储存，氧化，细胞膜的合成，转录的调节，甚至转运到细胞外用于自分泌或者旁分泌的信号。HFABP在心肌和骨骼肌中能够高度表达，而在像脑组织，肺及乳腺中表达较低。肌肉中的HFABP的主要功能是用于脂肪酸的转运和代谢。然而，一些报道指出其也能够促进细胞的增值和分化。在敲除HFABP基因的小鼠研究中显示出小鼠的心脏和骨骼肌对脂肪酸摄取能力急剧下降。这种对脂肪酸氧化的减少被葡萄糖利用的增加所抵消，结果导致年老动物对锻炼的不耐受性及引起心脏的肥大。HFABP能够与过氧化物酶体活化受体（PPAR）相互作用，PPAR是一种核受体，其能够减少线粒体和过氧化物酶体-氧化途径的表达。一些研究也证实了其可以与细胞色素p450单加氧化酶及脂氧合酶途径产物的相互作用。尽管脂肪酸并不是产生ATP的主要物质，但是它却是脑用于合成磷脂的物质。敲除HFABP基因的小鼠和野生型的小鼠相比，在整个脑部的脂类中，其利用的的花生四烯酸较少。尤其是在脑中参与运输和代谢的n-6脂肪酸和心脏中的20:4n脂肪酸。人们认为乳腺中的生长调节剂和乳腺抑制剂（一种由心肌型脂肪酸结合蛋白和脂肪型脂肪酸的混合物）能够调节细胞的增值和分化。人们已证明乳腺抑制剂/HFABP能够抑制乳腺癌细胞的分化。其对细胞增值和分化的间接证据来自于蛋白质组学的分析，这表明了HFABP/MDGI的表达和细胞核增值抗原（细胞分化的标志物）的相反关系。人们已在乳腺上皮细胞，小鼠多功能干细胞及心肌细胞中发现MDGI/HFABP的促进分化作用。另一项的研究证实了HFABP和假定乳腺的细胞膜表面的CD36转运体的相互作用，其是通过免疫共沉实验证实，并且在几类动物和小鼠模型中也发现了这两种蛋白，其间接的证明了它们在细胞中可能起到协同的相互作用。一些报道证实FABPs在细胞中能发挥保护的作用，其是通过限制病理下的脂肪酸的累积。在对培养的小鼠新生心肌细胞的观察中，其可通过清除自由基和阻止反应来保护心脏。5检测技术5.1免疫检测实验室中常规用的主要免疫测定方法主要是酶联免疫吸附试验。在这些实验中，人们已使用了针对人类HFABP的单克隆抗体和多克隆抗体。然而由于单克抗体产物的稳定性，表位的特异性及其少量甚至无交叉反应，其成为了首选。Ohkaru.et.al.发明了一测定人类血浆和尿液中的的人类HFABP的夹心的ELISA的方法，其是通过采用两种不同的对人类HFABP具有特异性的单克隆抗体的方法。由Tanakaet报道该方法有一个实验测定范围，其为0-250ng/ml,最低的测定为1.25ng/ml，并且整个的测定时间是2小时，其比用竞争性酶免疫方法（416小时）要省时的多。后来人们又成功地发明了一种一步ELISA的方法来测定人类HFABP，其总过程花费了45分钟。单克隆抗体的捕获和测定能够识别不同表位的基团，使得含有HFABP样品与捕获的抗体的固定及共轭探测器的联立成为可能，这也就使得能够一步完成。本实验有个实验测定范围为：0.2mg/L-6mg/L，最低浓度为0.2mg/L。尽管ELISA是检测HFABP的标准检测方法，但是由于实验长达45分钟，对样品使用前的稀释，及需要熟练的专业人员，精心的实验设计，以及对精密仪器的需求，使得受到限制。5.2免疫传感器 5.2.1电化学传感器5.2.1.1首个FABP免疫传感器。Siegmann-Thossetal.首次报道了电流计的酶免疫传感器，它的依据是建立在被固定在硝酸纤维素或者是活化的尼龙膜表面的抗HFABP抗体的基础上的，而硝酸纤维素或者是活化的尼龙膜是覆盖在改进的卡拉克式的氧化电极上的。采用了牛的HFABP作为模型，用了两种方案。第一种：竞争性免疫机制，采用由定量的葡萄糖氧化酶标记的HFABP与自由的HFABP竞争结合固定的捕获的抗体；第二，夹心免疫检测法，采用自由的FABP与固定的捕获的抗体结合，以形成二次葡萄糖氧化酶标记的抗体形成的夹心形式。在使用了-600mV的Ag和Agcl作为电极的氧化电极后，这两种方法导致了氧浓度的降低。然而由于夹心原理的优越的结果，只有夹心原理被用于测定人类的HFABP用于更深的研究。当今的免疫传感器的测定范围为5-100ng/Ml,并且相对于酶联免疫标记法用的时间更短（27分钟）。然而这种生物传感器也有几处缺点：一是污染的风险，由于其是开放系统；二是样品测定前的稀释，三是在实际样品中其它蛋白的干扰；四是传感器只能使用10次，其是由于葡萄糖/盐酸的再生导致的捕获的抗体数量的减少。5.2.1.2第一种在血浆中运用的FABP免疫传感器。Schreiber等人发明了第一种测定血浆中FABP样品的免疫传感器。基于丝网印刷石墨工作，由Ag/AgCl构成的电极及一个免疫夹心程序，传感器表面涂由捕获的抗体，这种抗体可与样品中的FABP结合，另外还有与碱性磷酸酶共轭的单克隆抗体。这种酶能够将对氨基苯酚磷酸酯转化为对氨基苯酚，其在直流电为+350mV时可以检测到。免疫传感器的测定时间只有20分钟，其测定范围为10-350ng/L。传感器是通过了8次对正常人体血浆的测定才确定的，其为8种不同浓度的标准的FABP,治愈率在80%-100%之间，实验内和实验中的变异系数分别为10%-15%和9%-16%。丝网刷电极制备技术可以成规模地发展，并且由于自动化的成本较低，能够用于大规模生产。并且由于电极在4摄氏度时能保持3个月的稳定性，故其能用于大批量的生产。其他的有点还包括测定时间短，能够在10-350ng/L的浓度范围内的未被稀释的血浆中进行测定。但是，在这里只能用电极。这种多功能的电流计首次是由Key等人实施的，他们的设计是在4个欧洲医院提供的20个病人的前提下进行的。这些结果和由Wodzig等人用ELISA做的实验进行比较，用同样的传感器进行对照。传感器对ELSIA测定FABP的最适合浓度是在400mg/L,但是当在低浓度时（5-15mg/L）时就不能测出，但是，对于心肌损伤的检测时，经性心肌梗死发生时它的浓度为6mg/L,因此传感器对于区别于不稳定性心绞痛的急性心肌梗死，或是小的梗死病灶是不适用的。3.2.1.3 首次用于测定全血中FABP的免疫传感器。ORegan等人报道了应用丝网刷电极的免疫传感器测定全血中的免疫传感器。基于包含有碱性磷酸酶标记的二次抗体的一次性测定的夹心实验，目前可以测量到对由在+300mV的由Ag/Agcl构成的电极中对氨基苯酚的氧化反应的产物。浓度在4-250ng/mL的FABP可以在50分钟内直接检测到。并且在肌红蛋白和FABP及胆红素之间并没有交叉反应，而人血清蛋白和抗凝剂柠檬酸磷酸葡萄糖对其没有任何干扰。在37摄氏度时，涂有电极的丝网刷扔能保留有原有40%的活性。但是其较长的测定时间成为了其对急性心肌梗死早期诊断的障碍。3.2.1.4交流阻抗对FABP含量的测定。Gallardo等人发明了一种对急性心肌梗死诊断的定量的免疫检测方法，其是基于对催化的聚合物的降解电容的测定的基础上的。这种传感器是通过测定电极中电容的变化来发挥作用的，电容的变化是由于酶反应的发生导致绝缘膜表面的部分或全部的脱失。这种装置由横向的条格构成，条格上带有表面涂有在PH值为7.4时就很快降解的多聚丙烯酸树脂S100的电极。单克隆抗体被固定在一个测验带区，还有一个检测能与尿激酶共轭的抗体的检测器作为流动相。样品中的FABP首先与探测器中的抗体结合，其次是与残留的免疫复合物结合，免疫复合物是由固定在测定带区表面的抗体产生的。添加的尿素水溶液会导致尿素的水解，结果导致二氧化碳的释放以及整个PH的升高，其能达到8。当PH值为碱性时，聚合物膜的开始降解导致覆盖的绝缘膜的改变，这样形成了可以测定的电容的改变。电容的改变与样品中分析物的浓度直接相关，因此在10分钟内就可以定量读出数值。然而，传感器的制备是一个既费力又昂贵的检测设备。5.2.1.5.对FABP未标记的免疫检测的薄层阻抗滴定的生物传感器。其是采用导电的玻璃来构成阻抗滴定的生物传感器的薄层设置。当添加样品时，其表面的抗原-抗体复合物的形成会导致电阻信号的改变，这种变化可用于对样品中FABP含量的测定。这种方法能够测定浓度为10ng/L-1mg/L的FABP,但是，测定的时间更长，并且传感器需要更进一步的优化以达到最佳化。5.2.2.光学传感器5.2.2.1直接光学免疫传感器。Kunz等人发明了一种测定未标记的HFABP的直接的光化学免疫传感器，其是建立在质子表面分光镜（SPRS）的基础上的。有两种不同的SPRS设备：一种广泛采用平面形状的，还有一种新的光纤维传感器。其不是采用的直接的免疫检测方法，而是采用竞争的免疫检测方法，用抗原和固定的抗体结合方法。由于其优越性超过了直接检测而受到支持，它的优越性包含有较低的检测限制，检测时间的较短及对抗体需求较少。在竞争性免疫检测中，传感器的银层表面覆盖有人类重组的HFABP，其与的表面被BSA所阻断。先用定量的多克隆抗-FABP抗体对含有FABP的样品进行预培养。在测量中细胞，样品中的FABP及固定在表面的FABP竞争结合抗体。FABP-抗体结合体导致的任何折射率的改变都会导致SPR角度的改变，这就是光生物学传感器检测的基础。这两种传感器在浓度为0.2-2mg/L范围内都是敏感的，并且平面的稳定期为3天，而纤维光传感器的稳定期为4天。然而在临床中，光学免疫传感器有几处限制。其容易被样品中的油脂和蛋白质所干涉，由于传感器对温度的依赖性，样品量的需求量（1ml）也是大量的。并且，由于后续的20次中测定（其是由于银层及层面的重建受到影响导致的步骤的重复性），其应用受到限制。另外，由于对FABP浓度(200ng/L)的限制,其不适合于对微小坏死的检测。另一种检测FABP的报道是集中在对胶态金SPR系统的应用。当抗体与FABP结合时，由于配体结合导致的微粒折射率的改变，将会导致表面覆盖有单克隆抗-FABP的胶态金的SPR波长的红移。5.2.2.2检测FABP的光栅耦合传感器。Kroger等人和Oroger等人报道了由于对FABP的直接光免疫传感器的发展，使用了光栅耦合传感器。这两组人都使用了建立在光栅耦合器输出原理上的BIOS-1系统。由于波导表面蛋白质的吸附或者去吸附导致的薄层波导表面的有效折射率的变化，其是可以检测的。一般来说，抗原/抗体系统中是有一个成分要固定在传感器表面的，这样样品能够与传感器的表面相接触。由于免疫复合物的形成，蛋白质层面的厚度会增加，这导致波导折射率的增加，这种改变能够被耦合角度不同的光栅耦合器所检测到。Kroger等人研究了三种类型的免疫检测方法：直接的，夹心，及竞争性的。基于不同测定实验的预处理时间，敏感性的特性，竞争性的实验拥有最好的效果。它的最终反应时间是7分钟（其反应速率为180ml/min）和快速的试验时间相比，最低浓度（330ng/mL）是相对较高的，并且其对于检测实际样品中的FABP是不敏感的。另一个缺点是血浆中的非特异性蛋白会结合到传感器的表面结果会导致假阳性的结果。总结其缺点和优点后，我们可以得出这样的结论：这个生物传感器为使其能用于实际测量中需要进一步的改进和优化。Orban等人在他们的工作中，对光栅耦合传感器的应用对固定的FABP的免疫反应进行了动力学分析。改组对抗原-抗体系统的表面覆盖面积，表观速率及亲和常数进行了阐述，但是并未对检测的限制级测定时间进行研究。5.2.2.3在线连续免疫位移法。Kaptei等人通过超慢的免疫分析法和超滤的方法对血液中的FABP的检测进行了深入的研究。这两种技术使得对流速在100-300Nl/min的体内测量及收集到的样品都能感测到。Kapteinetal等人通过逆交换的体系(以样品中的分析物置换与固定的抗原结合的酶标记的抗体形成的复合物)发明了一种对FABP的在线流速免疫置换方法。这种系统对生理性的（2-12mg/l）和病理性的（12-2000mg/L）下的FABP都能检测到。van derVoortetal.(2003)发明了一种解决了测量人类血浆中FABP含量的连续置换的实验方法。这种连续的测量方法通过重复的添加FABP及紧接着的几个清洗步骤。这项研究使得即使是小的心肌-FABP含量为40mg/L(当使用缓冲液作为冲洗剂时)以上，甚至20mg/L（当使用血浆作为冲洗剂时），尽管实验结果证明所用时间少于30分钟，但是这个系统若要用于实际中仍然需要优化。5.3一种对血浆中FABP的快速微粒增强的浊度滴定法的免疫的测定。Robers等人设计了一种微粒增强的浊度滴定的免疫测定方法，这种方法的优势在于其精确性，简单易行，快速及自动化。其证明了通过对三种单克隆抗-人FABP抗体的物理吸附形成的乳胶粒子的使用。这三种中的任何一种抗体可以识别不同的抗体。乳胶剂与缓冲剂混合在37摄氏度下的反应时间为75秒，由此产生的吸收的吸光度的变化的波长为550nm（在添加样品后1-8分钟）。可以从校准曲线中看出样品中FABP的部分。面前的检测方法，由于其时间为10分钟，测定浓度为1.1mg/L以及不需要对样品的稀释，相对于ELISA来说具有优越性。并且FABP浓度在到达2400mg/L时，并没有发现前带现象，这表明了一个宽的分析范围。但是，其不能应用于全血样品的分析并且需要一个非常昂贵的读数设备。5.4免疫检测需要关注的几点5.4.1免疫亲和力过滤色谱分析法。免疫亲和力色谱分析法使用交替金作为标记，这比使用依赖时间的用酶坐标记的方法能给出快速的信号。该实验的功用主要是加速抗体的结合动力学。该实验的是建立在夹心原则上的，羊的多克隆抗体和小鼠的单克隆抗体被固定在硝化纤维物的表面，而胶肽金标记的单克隆抗体作为检测。在添加样品后，紧接着是冲洗步骤，以清除掉未结合的或者是未被胶肽金特异性结合的抗体，再添加胶肽金标记的抗体。含有低于10mg/L的FABP的样品并没有产生任何红斑。然而，当样品中的FABP超过生理水平时，其可见到红斑。这种结果通过应用数字图像分析对红斑亮度的分析可以以“是”或“否”的形式作出回答。通过对来自患有胸痛的住院的83位病人的242系列血液样品的研究，这种检测和夹心的ELESA 相比得到了证实。当使用上层的参考水平（12mg/L）时，它的特异性和敏感度分别为96%和86%。这种免疫检测容易使用并且在15分钟内就可以得出结果，但是它需要对样品的提前处理并且包含几个工作步骤。5.5 FABP免疫测定的一步方法 Chan等人发明了一种快速定量测定全血中FABP的免疫方法。其可以作为商业上可用于心脏专家和自我的检测。这种免疫检测包括4种主要的成分：样品垫，释放垫，分析膜及吸水垫。HFABP的一种特异捕获的抗体被固定在硝化纤维物表面的一条线上，同一段小鼠的抗体IgG也在同一表面作为对照线。另外一种用胶肽金标记的特异的单克隆抗体的检测器被安置在共同垫上。当把样品添加上时，样品中的HFABP就会与探测器上的抗体相结合，而反应复合物就会出现在反应带上。过多的检测试剂受到控制带的限制，如果HFABP的水平含量超过检测的限制，检测区就会出现两条，但是如果HFABP浓度含量低于检测限制，就会出现一条反应带。如果反应无效的话,就不会出现反应带。检测的强度与样品中FABP的含量成正比。可以通过眼睛或是用PRAT（LRE发明的一种简便的选择的波长的反应测量仪）。其反应时间为15分钟，储存的稳定年限为1年（4摄氏度下），没有样品稀释的步骤及参考检测底线为7mg/L，这种检测对治疗有精确的评价，但需要大量的成本费用。快速检测人类HFABP的全血板试验（Rapichecks, DainipponPharmaceuticalCo Ltd.,Osaka,Japan)。和心肌检测的原理一样，这种检测能够在15分钟内检测出全血样品中浓度在6.2mg/L以上的FABP的含量。而一些在心肌梗死过程中，并未观察到通常释放的一些物质（血红蛋白，胆红素，抗坏血栓，人血清白蛋白和人类免疫球蛋白）的干扰，也未发现和肌钙蛋白发生的交叉反应。这种检测为附近的病人和床边的病人提供了实用性和方便性。5.6 微阵列系统通过使用少量的样品，微阵系统就能检测复杂混合物中的多种蛋白。其是通过把抗体固定在成数组格式的经化学改进的固体支撑面上，用于检测生物样品中的戴白的数量。通常会用到2种抗体微组技术：直接标记组和夹心免疫法。在直接标记组，混合物中的所有蛋白都被标记，这提供了一种检测反应后的结合蛋白方法，在夹心免疫检测中，未被标记的被限制在抗体芯片中，而被标记的特异性检测蛋白用于检测结核抗体。这两种技术都使用荧光团共轭的链霉素亲和分子（其能够与标记的检测抗体或者生物素化的蛋白结合）。Gul等人的一项研究中，使用一种夹心型的抗体阵列对多种心血管标记物（c-反应蛋白，TNF-A,淀粉样血清-a，及FABP）进行检测并进行数量分析。其结果和可进行商业化的ELISA方法进行比较，其显示了在一次性检测及对多种标志物数量的检测的优越性，并且比商业化的ELISA 具有动态变化图谱。但是，抗FABP抗体利用和其它抗体的交叉反应将对标志物的检测和数量化分析导致嘈杂的，干涉性。然而这种问题可以通过使用在同一反应基上的和其他抗体使用的抗体对得到根除。RANDOXLaboratories Ltd.,UnitedKing，利用同样的原理，发明了一种同时检测6种标记物（CK-MB,肌红蛋白，肌红蛋白磷化物BB，HFABP,碳酸酶及肌钙蛋白1）的全自动的生物芯片微阵列系统。Mion等人对其分析性和临床应用进行了评估，其结论为：HFABP对患有急