高效液相色谱法测定食醋和酱油中 苯甲酸钠和山梨酸钾含量实验报告.doc

高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量 摘要：【目的】用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。【 方法】以Hyperclone BDS C18柱(1504.60 mm，5m，phenomenex)为色谱柱；检测波长215230nm，进样量10L，流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵(35：65)，流量0.8mL/min，柱温30【结果】：食醋中的苯甲酸钠含量为127.15899ug/mol，酱油中的苯甲酸钠含量为723.60033ug/mol，未见则出山梨酸钾。？【结论】：高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点，所以数据准确，用外标法计算结果操作简单，计算方便，得出样品中苯甲酸钠的含量。关键词：高效液相色谱法 外标法 苯甲酸钠 山梨酸钾1、 前言 苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。本实验采用高效液相色谱法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。苯甲酸结构式： 山梨酸钾结构式： 二、实验目的和实验原理2.1.实验目的：（1）了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，以及初步掌握其操作技能；（2）学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线定量方法；（3）掌握RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的测定方法；2.2实验原理：将样品加热去除其中的二氧化碳和乙醇，用（1+1）氨水调pH值近中性，过滤后进高效液相色谱仪，进行反相色谱C18柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性定量分析。三、仪器与试剂及试剂处理3.1. 仪器： 高效液相色谱仪【高压输液泵LC-6A，检测器SPD-10A，保温箱CPD-10AS，进样阀7725I】；电子天平；纯水仪；离心机；超声波清洗机。3.2试剂：（1）色谱甲醇经滤膜0.45m过滤；（2）（1+1）氨水：氨水与水等体积混合；（3）乙酸铵溶液0.02mol/L：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并定容至1000ml，经过（0.45m）过滤；（4）碳酸氢钠溶液20g/L：称取2g碳酸氢钠（优纯级），加水至100ml，振荡溶解；（5） 苯甲酸钠标准储备液：准确称取0.1000g苯甲酸钠，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5ml，加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至刻度。此溶液中苯甲酸钠含量为1mg/L，作为储备液；（6） 山梨酸钾标准储备液：准确称取0.1000g山梨酸钾，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5ml，加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至刻度。此溶液中山梨酸钾含量为1mg/L，作为储备液；(7) 苯甲酸钠、山梨酸钾标准混合使用溶液：取苯甲酸钠、山梨酸钾标准储备液各1.0ml，放入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液含苯甲酸钠、山梨酸钾各0.01mg/ml。经滤膜（0.45m）过滤；4、 实验方法 采用RP-HOLC法，以Hyperclone BDS C18柱(1504.60 mm，5m，phenomenex)为，色谱柱；检测波长215230nm，进样量10L甲醇：0.02mol/L乙酸铵(35：65)为流动相，流量0.8mL/min，柱温30，PH=7五、实验过程及操作5.1.样品的处理： 称取10mL样品于烧杯中，微温除去二氧化碳，用稀氨水（1+1）调pH至7，加水定容至50ml。备用。使用前取样液1-2ml于小离心管中12000rpm离心，上清液经0.45m滤膜过滤，进样量10l，进行色谱分析，以保留时间定性，以峰面积定量。5.2.操作： 开泵20分钟，开检测器，进样分析（进样顺序：先洗针，用甲醇洗13次以上，再用超纯水洗13次以上，吸样时针内不可有气泡，Load位置注入，Inject进样，保持针不动2-3min），取标准样量分别为：2.5、5、7.5、10、15、20ul，酱油、醋各5ul，分批加入高效液相色谱仪，记录色谱图，分析实验数据。操作过后关检测器，冲洗仪器，关输液泵。六、实验数据及处理：6.1标准样品：6.1.1标准样品苯甲酸钠（浓度：0.01mg/ml）：进样体积（l）进样量（g）保留时间峰面积2.50.0256.36589639.250.056.3651858756.34264485.2100.16.348355046.4150.156.332533477.8200.26.315670133以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，做线性回归方程，得：Y=3E+6X+15365 R2 =0.99756.1.2标准样品山梨酸钾（浓度：0.01g/ml）：进样体积（l）进样量（g）保留时间峰面积2.50.0258.732115913.850.058.7482332758.715346758.3100.18.732466104150.158.707703350.1200.28.682880446.1以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，做线性回归方程，得：Y=4E+06X+14417 R2 =0.99726.2检测样品检测样品食醋（防腐剂0009.org；进样体积：5l）峰号保留时间峰高峰面积186.3484567.398108589.2218.7821829.56943467.4结果:物质稀释后含量（g）稀释后浓度（g/ml）样品中浓度（g/ml）苯甲酸钠0.03076.140030.7000山梨酸钾0.00841.68008.4000检测样品酱油（防腐剂0010.org；进样体积：5l）峰号保留时间峰高峰面积196.33214953.46447687.4238.2986515.7371335.2结果物质稀释后含量（g）稀释后浓度（g/ml）样品中浓度（g/ml）苯甲酸钠0.132926.5800132.9000山梨酸钾0.02905.800029.00006.3色谱图6.3.1标准品色谱图：防腐剂0003.org，混标（0.01mg/ml） 体积：2.5l防腐剂0002.org 混标（0.01mg/ml） 体积：5l防腐剂0004.org 混标（0.01mg/ml） 体积：7.5l防腐剂0005.org 混标（0.01mg/ml） 体积：10l防腐剂0006.org 混标（0.01mg/ml） 体积：15l防腐剂0007.org 混标（0.01mg/ml） 体积：20l6.3.2检测样品色谱图：检测样品食醋（防腐剂0009.org）检测样品酱油（防腐剂0010.org）七、实验结果分析： 1、根据实验结果可以知道酱油和醋中的苯甲酸钠含量，且样品中未检测出山梨酸钾。 2、标准样品和待测样品的保留时间相差无几，保留时间由样品和色谱柱的相互分配所决定。 3、出峰面积与样品量成正比。 八、结论 从实验结果看来，我们的操作比较成功，色谱图中的基线噪声是无法避免的。高效液相色谱仪的高效高速等特点也在实验中表现出来了。参考文献：【1】宋先梅，王春，郝晓宏，任斌知；高效液相色谱法同时测定食醋中苯甲酸钠、山梨酸钾、糖精钠的方法研究；中国公共卫生；2001年第17卷第5期【2】贾海红，吴得海；高效液相色谱法同时测定酱油和饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠及乙酰磺胺酸钾；卫生职业教育；2004年第22卷第17期【3