三系选育958.doc

实验1：三系958和郑单958的对比实验实验目的：三系958（Ya582）与郑单958（Ya581）、郑单958CKH1(fB33)相比，找差异。实验材料：上述三份。选用引物： 一：检测不育细胞质特异引物：引自 玉米雄性不育细胞质特异DNA片段的发现及差异展示 2005P1: 5 ATGCTAATGGTGTTCCGATTCCP2: 5 AGCATCATCCACATTCGCTAG PCR体系： 反应程序：H2O15.610Buffer2.52.5mMdNTP2一对引物0.55U/ul Taq0.4DNA 425194 5min294 1min355 1min472 1min50secto 2, 40 cycle572 5min64 for ever二：细胞质雄性不育系T C S的三套特异性引物序列 引自 玉米细胞质雄性不育分类体系的建立T CMSTF 5 CATGAAATGGGTGAAGTCTCTTTCCMSTR 5 AAGAGAAAGGGAGACTTTGGTCCC 440bpC CMSCF 5 ATGCTAATGGTGTTCCGATTCCCMSCR 5 AGCATCATCCACATTCGCTAG 398bpS CMSSF 5 CAACTTATTACGAGGCTGATGCCMSSR 5 AGTTCGTCCCATATACCCGTAC 799bpPCR体系： 反应程序：H2O15.610Buffer2.52.5mMdNTP2一对引物0.55U/ul Taq0.4DNA 425194 5min294 1min355 1min472 1min30secto 2, 40 cycle572 5min64 for ever三：引自 玉米C型胞质不育恢复主基因SSR标记 2001Rf48.01bnlg2307GGGTGCTCGTAGTAGGGGTT/CTAAGGCACACGGAGAGAGGRf5-15.07bnlg1711TAATCTTGGGGGGTTTAGGG/GACATGTCCCATTCCCATTCRf5-25.07bnlg1346CATCATGAAGCAATGAAGCC/CCGCGCCATTATCTAGTTGTRf5-35.07phi058AGGTGCTGGACACAGACTTCAAC/ACTGAGATCCAGGCTCCTCTTCPCR体系： 反应程序：H2O15.610Buffer2.52.5mMdNTP2一对引物0.55U/ul Taq0.4DNA 425194 5min294 1min355 1min472 1min50secto 2, 35 cycle572 5min64 for ever6%变性聚丙烯酰胺检测一 二都是2%琼脂糖检测，三是6%变性聚丙烯酰胺检测。其它的SSR引物60核心引物中的第三组。DYEDYELociSize range1FAMM94bnlg1025y4141-2012FAMM53umc1538y3131-1943FAMM85umc1261k10231-2494FAMM6bnlg1175k1261-3405FAMM54bnlg1523k3183-2636NEDG36umc1136y2122-1627FAMM57phi021y8167-2088FAMM15umc1051k2226-2869FAMM62umc1496y3146-18410FAMM20mmc0081k1167-21511FAMM69umc1859k1140-19412FAMM70umc1127k1153-26113FAMG44phi328175y4302-34614FAMM29phi116k1240-26215FAMM31umc1741w1144-21516FAMM33bnlg162k2239-28417FAMM121bnlg1191k7240-29918FAMM39umc1366y1226-23819FAMM122bnlg1712k17256-29420PETM123bnlg1450A1232-352电泳板：123456789101112AYa582/M94Ya581CKHYa582/M53Ya581CKHYa582/M85Ya581CKHYa582/M6Ya581CKHBYa582/M54Ya581CKHYa582/G36Ya581CKHYa582/M57Ya581CKHYa582/M15Ya581CKHCYa582/M62Ya581CKHYa582/M20Ya581CKHYa582/M69Ya581CKHYa582/M70Ya581CKHDYa582/G44Ya581CKHYa582/M29Ya581CKHYa582/M31Ya581CKHYa582/M33Ya581CKHEYa582/M121Ya581CKHYa582/M39Ya581CKHYa582/M122Ya581CKHYa582/M123Ya581CKHFWe045/G19We135We137We138We139We140We141We144We147We153We154We157GWe158We159We166We168We177We178We187We188We193We197We199We203HWe211We212We216We217We224We227We231We235We242H2O12.3549.410Buffer282.5mMdNTP1.24.8一对引物0.2515U/ul Taq0.20.8DNA 4单加20X480三-2：引自 玉米C型胞质不育恢复主基因SSR标记 2001引物：Rf48.01bnlg2307Rf5-15.07bnlg1711Rf5-25.07bnlg1346Rf5-35.07phi058材料：三系958（Ya582）与郑单958（Ya581）PCR体系： Genaceae试剂 反应程序：A194 5min294 1min350 1min472 1minto 2, 35 572 5min64 for everTransgeneGenaceaeH2O12.35H2O12.9510Buffer210Buffer22.5mMdNTP1.210mMdNTP0.6一对引物0.25一对引物0.255U/ul Taq0.25U/ul Taq0.2DNA 4DNA 42020反应程序：B：用SSR 60Hu et al. 2006. TAG, Identification and mapping of Rf-I an inhibitor of the Rf5 restorer gene for Cms-C in maize.umc2326 - (AGATG)4 (SSR) 100bpThis SSR is also known by the following names: p-umc2326, umc2326.Repeat: (AGATG)4Primers:Right End:CGATGATGGGTGTTGTGGTTAGAT(umc2326 reverse)Left End:GGTGAGATACAGAGGTGGATGAGG(umc2326 forward)umc2327 - (TCTC)5 (SSR)This SSR is also known by the following names: umc2327, p-umc2327.Repeat: (TCTC)5Primers:Left End:GATCGATGCTAATGTGAAGAGCCT(umc2327 forward)Right End:CCAGCAGCATATGTACACAAATCA(umc2327 reverse)郑用琏 2006 鉴别玉米细胞质雄性不育材料胞质类型的方法。T组：T-1: GTCGTGTCCTGGTAGCCT T-2: CCTCCTTCATTCCGTTGT 435BPC组：C-1: TGAAAGGGTGGTGGAATA C-2: GAGCCAAAGTAATGAGAAA 698BPS组：S-1: GATGCTATGCTAAGCGAGAT S-2: CCGCTAACCCACTCTTCT 885BP玉米为主要研究对象的植物 CMS分子生物学研究。在国家自然科学基金，国家攀登计划，“863”等研究课题中，分析了玉米CMS线粒体DNA的遗传多型性、建立了利用 RFLP，PCR技术进行胞质分类的生物技术体系；成功地构建了高质量的mtDNA的BAC文库，克隆到由atp9三个区段嵌合重组形成的S胞质育性候选基因orf77；采用SSCP-PCR技术，证实了与orf77紧密连锁的基因在不同胞质来源的材料中的差异， 为胞质亚组的划分提供了重要的理论依据；证实了orf77在不同核背景下mRNA的表达差异，提出了 orf77 所在的DNA区段双向转录对雄性不育表达调控的分子模式，为最终阐明玉米S组CMS的育性机理提供了证据。在绘制高密度玉米分子标记连锁图谱的基础上，定位了CMS恢复基因Rf3、品质基因 Du和与杂种优势相关的QTLs，并采用分子标记辅助选择技术完成了Rf3/rf3的近等基因系选育，并正利用这一近等基因系，采用SSH和cDNA chips技术克隆 Rf3基因。同时利用分子标记技术完成了我国西南地区玉米地方种质资源的遗传多型性评价；建立了云南糯玉米，爆裂玉米地方品种的指纹图谱。发表学术论文62篇，申请专利1个，在NCBI Database中登记注册胞质基因片段2个。实验1：三系958和郑单958的对比实验实验背景：三系958为河南省高光玉米新品种研究所利用三系选育法培育品