多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在消化道肿瘤诊断中的临.doc

多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在消化道肿瘤诊断中的临床意义易苗英 徐晓寅 袁 博 程 斌 王煜非 黄 倩上海交通大学附属第一人民医院 中心实验室（上海200080）摘要目的：探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统（C-12）在消化道肿瘤中检测的临床意义。方法：用该蛋白芯片检测系统测定355例消化系统恶性肿瘤患者、320例消化系统良性疾病患者和300例健康志愿者血清中12项肿瘤标志物(AFP、CEA、CA125、CA15-3、CA242、CA19-9、NSE、PSA、F-PSA、Ferritin、HGH、-HCG)的水平，分析其在不同消化系统疾病的应用价值。结果：消化系统恶性肿瘤组的阳性率为67.04%，显著高于良性疾病组(17.81%)和健康志愿组(2.33%)(P0.05)。亚组分析，对于进展期胃癌及结直肠癌患者与其C-12检测的阳性率呈正相关（R=0.9540和0.9422）。结论：应用多肿瘤标志物联合检测对良恶性肿瘤鉴别诊断、对消化系统肿瘤的早期筛查及分期诊治具有较高的临床应用价值。关键词肿瘤标志物；蛋白芯片；消化系统肿瘤；Diagnostic Value of 12-tumor Markers Protein Chip Detective System in Digestive TumorsAbstractObjective: To evaluate the diagnostic value of 12-tumor markers protein chip detective system for digestive tumors. Methods：The multi-tumor markers protein chip detective system was used to detect the serumal 1evels of 12 tumor markers(CA19-9、NSE、CEA、CA242、Ferritin、- HCG、AFP、Free - PSA、PSA、CA125、HGH and CA15-3) in 355 digestive cancer patients, 320 patients with benign digestive disease and 300 healthy volunteers. Results：The positive rates were 67.04%、17.81%、and 2.33% in digestive cancer patients, benign digestive disease and healthy volunteers, respectively. The digestive cancer group had significantly higher positive rate than that of benign digestive disease group and healthy volunteers(P0.05). Conclusion：C-12 tumor markers protein biochip can significantly increase the diagnostic sensitivity for digestive tumor.Key wordsTumor markers；Protein biochip；Digestive tumor消化系统肿瘤是常见的恶性肿瘤之一，包括食管癌、胃癌、结直肠癌及原发性肝癌等在内的消化系统肿瘤在我国有逐年上升趋势，是严重危害人民生命健康的恶性疾病，是我国肿瘤防治的重点和难点1,2。早期诊断、早期治疗仍然是降低死亡率、提高生存期最有效的方法。本文应用的12项肿瘤标志物蛋白芯片检测系统测定355例消化系统恶性肿瘤患者(包括120例胃癌患者、105例结直肠癌患者、68例原发性肝癌患者和62例食管癌患者)、320例消化系统良性疾病患者、300例健康志愿者血清中12种常见肿瘤标志物的含量，探讨多肿瘤标志物联合检测在肿瘤的早期诊断以及分期中的应用价值。对象和方法1 研究对象 收集2006年7月2008年7月在我院住院患者，消化系统恶性肿瘤患者共355例，均经病理检查确诊，其中胃癌患者120例、结直肠癌患者105例、原发性肝癌患者68例和食管癌患者62例。其中男185例，女170例，平均年龄56.5岁。消化系统良性疾病患者320例，其中消化性溃疡80例，食管炎45例，慢性胃炎150例，食管平滑肌瘤15例，溃疡性结肠炎30例。其中男156例，女164例，平均年龄45.8岁。健康志愿者300例，均为健康体检者。其中男158例，女142例，平均年龄43.5岁。2 实验方法本实验按病变良恶性分为三组（恶性肿瘤组、良性疾病组、健康志愿组）、胃癌病理分期（ 期）、结直肠癌Dukes分期（AD期）三种方法分别分组，本研究入组胃癌患者，均按美国癌症联合会第6 版分期标准进行临床分期；入组结直肠癌患者，均按美国癌症联合会第6 版Dukes分期标准进行临床分期。各组清晨抽取空腹血2ml，分离血清后按试剂盒说明书进行实验。多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统为湖州数康生物科技有限公司生产(简称C-12)，其检测原理为基于夹心法的化学发光检测方法（固化抗体于固相载体上，捕捉检测样品中的对应肿瘤标志物，结合标有示踪标记物的第二抗体，催化化学反应发光，采用该公司提供的HD-2001系列生物芯片检测仪读取光信号并分析结果）。试剂盒提供了正常值范围（见表1）。试剂盒每月更新。以CEA、CA19-9、CA242、AFP、CA125、CA15-3等六个肿瘤指标中有一个超过正常值，即判为阳性。反之，六个肿瘤指标皆为正常值，即判为阴性。表1 C-12各检测指标参考值肿瘤标志物参考值肿瘤标志物参考值甲胎蛋白(AFP)020 ng/ml总前列腺抗原（PSA）05 ng/ml癌胚抗原(CEA)05 ng/ml游离前列腺抗原（F-PSA）01 ng/ml糖类抗原（CA125）035 KU/L生长激素（HGH）07.5 ug/L糖类抗原（CA242）020 KU/L神经元特异性烯醇化酶（NSE）013 ng/ml糖类抗原（CA19-9）035 KU/L人绒毛膜促性腺激素（-HCG）03 MIU/ML糖类抗原（CA15-3）035 KU/L铁蛋白（Ferritin）0322 ug/L（男）0219 ug/L（女）3 统计学处理使用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，各统计学指标用均值和标准差(xs)表示。显著性检验采用卡方检验，P0.05认为有统计学意义。结 果1 C-12蛋白芯片检测三组结果分析 恶性肿瘤组、良性疾病组、健康志愿组三组阳性率比较，恶性肿瘤组的阳性率显著高于良性疾病组及健康志愿组(2=151.96，P0.01；2=274.67，P0.01) 。C-12蛋白芯片对恶性肿瘤组(消化系统)检测的阳性率为67.04%。具体数值见表2，3。表2 C-12检测三组结果病理分组例数阳性例数阴性例数阳性率()恶性肿瘤组35523012567.04良性疾病组3205726317.81健康志愿组30072932.33表3 恶性肿瘤各种肿瘤标志物血清水平(xs)（总数355例）组别肝癌胃癌结直肠癌食管癌（68例）（120例）（105例）（62例）CA19-978.5643.0938.9819.1726.839.8222.7319.72CEA42.9339.7637.7523.7917.4212.539.674.32CA24218.9220.079.249.5715.7312.4610.2210.51AFP409.28212.5721.1223.6111.4912.1112.5917.82CA12521.4522.6620.1416.0710.9614.6314.1716.33CA15-39.436.1611.237.914.355.134.524.842 C-12蛋白芯片检测胃癌患者亚组分析研究结果表明，对进展期患者C-12芯片检测的阳性率越高。进一步卡方检验，期与期、 期的阳性率之间都有统计学差异(2=4.43，P0.05；2=4.89，P0.05)，而期、 期的阳性率之间没有统计学差异(2=0.03，P0.05)，且随着病情的进展，C-12检测值与其呈正相关（R=0.9540）。具体数值见表4。表4 C-12检测胃癌患者结果病理分期例数阳性例数阴性例数阳性率() 期82625.00 期29141548.28 期42301271.43 期41301173.173 C-12蛋白芯片检测结直肠癌患者亚组分析阳性判断同上。研究结果表明，对于进展期结直肠癌患者阳性率显著高于早期患者，C-12检测的阳性率也随病情的进展呈上升趋势（R=0.9422）。进一步卡方检验，Dukes A期与Dukes C期、Dukes D期的阳性率之间都有统计学差异(2=4.47，P0.05；2=4.94，P0.05)，而Dukes C期、Dukes D期的阳性率之间没有统计学差异(2=0.02，P0.05)。具体数值见表5。表5 C-12检测结直肠癌患者结果Dukes分期例数阳性例数阴性例数阳性率()A 期61516.67B 期27131448.15C 期35251071.43D 期37271072.97讨 论肿瘤标志物应用于消化系统恶性肿瘤的诊断已有数十年的历史。通常认为，血清肿瘤标志物的检测在恶性肿瘤的早期诊断、术后随访监测、化疗方案的选择及疗效评估等方面都具有一定的临床意义4。临床上常用的肿瘤标志物大多是肿瘤相关抗原，即肿瘤细胞分泌或脱落到体液或组织中的物质。这些标志物往往并非肿瘤细胞所特有，而是肿瘤细胞的表达量明显增加。不同肿瘤可以产生相同的肿瘤标志物，同一种肿瘤也可产生多种不同的肿瘤标志物3。某些肿瘤如胃癌尚未发现较好的特异性抗原，目前所有用于胃癌检测的肿瘤标志物均为非特异性抗原5，临床上单独检测某一项肿瘤标志物其敏感性往往较低，因而目前国内外多采用联合检测多项标志物的方法以提高肿瘤的检出率。本研究应用C-12多种肿瘤标志物蛋白芯片检测系统定量分析被检者血清中的12种肿瘤标志物的含量，对消化系统肿瘤进行联合检测分析，结果显示C-12蛋白芯片对消化系统肿瘤的诊断具有较高的阳性检出率(62.9%94.12%)。本文使用的多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统是通过分析血清中12 种常见肿瘤标志物的含量，以辅助肿瘤的临床诊断，同时也有助于病程分期、疗效跟踪、预后分析及随访等。实验选用CEA、CA19-9、CA242、AFP、CA125、CA15-3等六项作为检测指标，系消化系统阳性率较高的指标，可做粗略的肿瘤定位、协助判断良恶性程度。进一步亚组研究发现，随着胃、肠道肿瘤患者病理分期的进展，C-12的检测结果与其呈正相关（R=0.9540和0.9422）。这表明多肿瘤蛋白芯片检测系统在消化系统肿瘤的鉴别诊断尤其是早期诊断方面具有重要的临床意义，同时对肿瘤的分期有一定的辅助诊断价值。鉴于其多属糖类抗原，影响因素多，如环境、吸烟、药物、炎症及自身免疫性疾病等，因此在良性病变组和健康对照组中出现了少数的假阳性，但总体来说假阳性的比例远远低于恶性病变组的阳性检出率。C-12系统在国内首次实现了在同一体系下同时检测12种肿瘤标志物，提高了辅助诊断的准确率，弥补了单一肿瘤标志物敏感性较低和特异性不强的不足。且该系统使用方便，创伤性小，覆盖瘤谱范围广，系目前较为常用的肿瘤筛查和诊断系统之一。随着临床应用的进一步展开，C-12多种肿瘤标志物蛋白芯片检测系统必将在为辅助肿瘤临床诊治中发挥更大的作用。【参考文献】1 孙秀娣，牧人，周有尚，等.中国胃癌死亡率20 年变化情况分析及其发展趋势预测J.中华肿瘤杂志，2004，26 (1) ：4292 Parkin DM, Bray F, Ferlay J, et al. Global cancer statistics, 2002. CA Cancer J Clin J. 2005, 55(2):74-1083 Tiuriaeva II. Tumor antigens. Tsit