乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白.doc

乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白医学信息2011年5,q第24第5期医学影像与检验豢乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白昊明【摘要】目的:应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准化评价方案对乳胶增强免疫比浊法测定血清肌红蛋白(Mb)进行初步评价.方法:分析乳胶增强免疫比浊法测定血清肌红蛋白的精密度,准确性,线性范围和干扰因素.结果:此方法枇内CV<6.0,批阎CV<7.0%.抗干扰性强,Hb4.0g/L,胆红素400mol/L,类风湿子2000IU/L对测定无影响;与进口试剂对比,y0.9985x+0.0131,r=0.9995,两者相关性良好.结论:乳胶增强免疫比浊法测定血清Mb,具有方法简便,快速,灵敏的优点,且结果准确,可用自动分析仪测试,适合临床检验应用.【关键词】乳胶增强免疫比浊法;肌红蛋白(Mb);方法学评价NanopartlclesboosttheimmuneturbidimetricdeterminationofMbMingHAbstract0bjectiveToevaluateanNanoparticlesboosttheimmuneturbidimetryfordeterminingserummyoglobin(Mb)withtheNationalCorn-mitteeforClinicalLaboratoryStandards(NCCLS)projects,.MethodsTheprecision,accuracy,specificity,linearityandinterferenceoftheNanoparticlesboosttheimmuneturbidimetrywereanalyzed.ResultsWithindayCVandbetween-dayCVofthemethodwerelessthan6.0and7.0respectively.Theperformanceofantijammingwasstrong,whichhemoglobin(upto4.0g/L),bilirubin(upto400/mol/L),rheumatoidfacto(upto2000IU/L).AcomparisonbetweenimportedMb(Y)andthiskit(x)gavefollowingresults:Y一0.9985x+0.0131,r=0.9995.Therewasgoodcotrelationbetweenthem,Accordingtothestatisticaldate.Condusions:TheMbassaykitisconvenient,fastandaccurateandsuitableforautomationanalysis.ConclusionThemethodofNanoparticlesboosttheimmuneturbidimetrycanbeappliedonautomaticanalyzerfordetectionofMbinthesetum.KeywordsNanoparticlesboosttheimmuneturbidimetry;myoglobin;methodsevaluation【中国分类号R446.11【文献标识码】A【文章编号110061959(2011)05027402肌红蛋白(Mb)是组成骨骼肌和心肌的主要蛋白质,分子量为167o0KD,由于Mb分子量小,当肌肉损伤时,可以很快从破损的细胞中释放出来,在急性心肌梗死(AMI)发病后13小时血中浓度迅速上升,67小时达峰值,I2小时内几乎所有AMI患者Mb都有升高,升高幅度大于各心肌酶,因此可以作为AMI的早期诊断标志物.同时Mb半寿期短(15rain),胸痛发作后612小时不升高,有助于排除AMI的诊断,是筛查AMI很好的指标.本研究应用NCCLS标准化评价方案对乳胶增强免疫比浊法测定血清肌红蛋白的精密度,准确性,线性范围和干扰因素进行了评价.1材料和方法1.1样品均为我院门诊和住院病人.1.2试剂和仪器:试剂l(R1):甘氨酸缓冲液50mmol/L,氯化钠4.5g/L,聚乙二醇60003.0g/L,稳定剂和防腐剂适量;试剂2(R2):含乳胶共价结合的羊抗人Mb抗体,Mb标准液及低值,高值室内质控液(均来源于浙江伊利康生物技术有限公司).干扰物质:600/zmol/L胆红素标准液,5g/L血红蛋白溶液.仪器为日立7600生化分析仪.1.3方法原理:将含有Mb样本与共价结合在乳胶上的Mb抗体在缓冲液中结合,形成稳定的抗原一抗体复合物,并产生一定的浊度,通过测定一定时间后吸光度变化,与同样条件下校准液相比较,即可计算出样本中Mb的浓度.】.4主要分析参数:样本9vl,R1150l,R25O1,主波长505nm,两点速率法.反应温度:37,测光点2228点.1.5操作方法:根据分析参数在仪器上编制检测程序,在日立7600生化分析仪上完成检测.1.6统计学方法:采用Statal0.0软件进行统计学处理.2结果2.1精密度:根据NCCLSEP5一A2文件对于精密度评价的要求i1,分别测定低值,中值和高值三种水平的Mb浓度.2h内各水平连续测定2O次,计算均值(x),标准差(s),(cv批内)每天测定1次,连续测定2Od,计算(x),(s),(CV日间).批内精密度和日间精密度结果见表l.表1批内和日问精密度结果(ng/m1)标本次鼓次敷ij低值20422135.0720462816il中值20862.883352089355399高值20207342165202105642692.2回收试验:取低值和高值新鲜血清样品各1份,以不同比例混合,成为分析样品,然后分别测定Mb的浓度,计算回收率,结果见表2.表2回收实验结果标本号理论浓度(nm1涮定浓度(ng:m1)回收率(%)4776136189293405508014I192288395274一*血清Mb的平均回收率为102.1.2.3对比实验:将血清样品(N=40)同时用该法与日本进口原装Mb试剂分别测定测定范围为5500ng/ml的样品,计算出回归方程为Y=0.9985x+0.0l31(x为日本进口原装Mb试剂试剂),相关系数r一0.9995,经t检验得P>0.05,表明两组结果无统计学差异,高度相关.2.4干扰因素:用稀释好的不同浓度的血红蛋白,胆红索和类风湿因子分别与含Mb浓度较高的血清和生理盐水做回收试验,以回收率的好坏判断是否存在干扰.结果见表4.表4回收试验结果2.5线性范围测定:按NCCLS(EP6P)文件作线性评价标准,取一高浓度Mb标品(500ng/m1)和一低浓度Mb标品(50ng/m1),然后把2份样本等量混匀产生中间值,再分别将中间值和低值,中间值和高值等量混匀,共产生5个不同浓度的样品.在分析仪上用本试剂从低值到高值,然后从高值到低值对5个不同浓度的标本分别平行测定5次,求得均值为Y,以理论值为x,经线性回归分析,得回归方程为:Y0.9905x+0.0398,R20.9999,说明本试剂Mb浓度在500ng/ml范围内线性良好.3讨论AMI是指冠状动脉急性闭塞,血流中断,所引起的局部心肌的缺血性坏死,是临床常见的急性重症疾患,其预后有赖于早期诊断和适宜的治疗.诊断心梗指标的研究近年来已成为国内外医学界最热门的话题之一.而肌红蛋白作为诊断AMI的敏感指标,其临床应用价值也得到相应的研究,Mb与cTnI联合应用可提高其特异性,被认为是当前早期诊断AMI的最佳搭配之一.目前最常用的方法是免疫比浊法和化学发光免疫分析法,这两种方法的性能国内学者进行过很多报道和评价s-7.本文将日立7600全自动生化仪,Mb试剂,配套标准品,组成一个新的检测Mb的检测系统,采用NCCLS标准化评价方案对乳胶增强免疫比浊法测定Mb试剂进行评价,结果显示,该方法Mb在500ng/ml内线性范围良好,批内CV%<6.0,批间CV<7.0.Hb4.0g/L,胆红素400mol/L,类风湿子2000IU/L对测定无影响;与日本原装试剂比对具有良好的相关性.该方法是利用包被在乳胶上的抗人Mb抗体与Mb抗原反应产生浊度,其浊度与Mb浓度成正比.该法在HITACHI7600全自动生化分析仪上有较高的精密度,良好准确度,较宽线性范围,在抗干扰方面也有良好操作性能,可见本法完全可符合临床检验使用要求.%蝽%m呲医学彩像与检硷2011年5月第24卷第5期医学信息i前S抗原与HBVDNA在乙型肝炎病毒检测中的相关性讨论赵莉平权志博【摘要】目的:通过对乙肝病毒前s1抗原与HBVDNA的检测进行对比分析,从而对其相关性进行讨论.方法:采用ELISA法检测126份患者血清标本前s1抗原,乙肝表面抗原(HBsAg);采用荧光定量PCR法检测HBVDNA.结果:对126份HBsAg阳性的血清标本进行检测及分析发现,前s1抗原阳性的血清标本HBVDNA的检出率为65.9,前s1抗原阴性的血清标本HBVDNA的检出率为24.4;HBVDNA阳性的血清标本前s1抗原的检出率为75.8,HBVDNA阴性的血清标本前s1抗原的检出率为58.3.结论:前s1抗原与HBVDNA密切相关,其阳性可作为HBV复制的一个重要依据,结合HBVDNA的检测能较为准确地检测病毒在机体内的复制状况,一定程度上反映了机体感染HBV的传染性的强弱,其对乙肝的早期诊断具有重要意义,有利于临床分型,治疗.【关键词】前S1抗原;HBVDNA;乙肝表面抗原;相关性【中图分类号R446.11【文献标识码】B【文章编号10061959(20l1)05027501我国HBV感染的发病率已高达10,且HBV感染是引起肝硬化及肝细胞癌的重要因素,因此HBV感染的早期诊断及其传染性强弱的检测尤为重要.目前认为病毒在机体内的拷贝数越高其传染性越强.在HBV感染中,HBVDNA检测阳性通常作为HBV复制的金标准11.本实验以HBVDNA的PCR结果为基准,来讨论PreS1抗原与HBVDNA复制的相关性.1材料与方法1.1材料1.1.1血清标本:来源于126例2010年8月至20l1年2月陕西中医学院第一附属医院门诊及住院的乙型肝炎患者.l_1.2试剂和仪器:血清乙肝表面抗原(HBsAg)测定:试剂购自上海科华生物技术有限公司提供的EIIsA试剂盒.前SlAg测定:试剂购自上海阿尔法生物技术有限公司,采用双抗体夹心ELISA法.HBVDNA测定:试剂购自广州达安公司提供,检测采用荧光定量PCR法.酶标仪型号为DG一3022A,PCR扩增仪型号为PE一9000.1.2方法1.2.1将待检血液标本37温浴10分钟,然后3000r/min离心5分钟,取上层血清,严格按照仪器及试剂说明书操作,分别进行HBsAg,Pre-s1抗原及HBVDNA定量检测.1.2.2HBVDNA定量结果判断标准:HBVDNA10scopy/ml为阳性,HBVDNA<10copy/ml为阴性;HBsAg,Pres1Ag结果判断标准:样品OD值S/CO1者为阳性,样品OD值S/CO<I者为阴性.其中CO为临界值,其计算为:临界值一阴性对照LOD值N2.1.2结果2.1对126例HBsAg阳性血清标本的前sl抗原和HBVDNA的检测结果见表l,表2.表1是对l26例HBsAg阳性血清标本前sl抗原阳性与前s1抗原阴性时HBVDNA检出率的反映.表2是对126例HBsAg阳性血清标本HBVDNA阳性与HBVDNA阴性时前s1抗原检出率的反映.由表1可知:前s1抗原阳性时HBVDNA的检出率为65.9,前s1抗原阴性时HBVDNA的检出率为24.4,对两组测定结果进行比较,其P<o.05,有显着性差异.由表2可知HBVDNA阳性时前s1抗原的检出率为75.8,HBVDNA阴性时前s1抗原的检出率为58.3,对两组测定结果进行比较,其P<0.05,有显着性差异.表1PreS1抗原与HBVDNA检测结果比较参考文献r1NCCLS.EvaluationofPrecisionPerormanceofQuantitativeMeasurementMethods:ApprovedGuidelineSecondEdition.NCCLSdocumentEP5一A2.NCCLS,940WestValleyRoad,Suitel400,WaynePennsylvaniaUSA,2002:190871898.2魏桂芬.急性心肌梗死患者肌红蛋白检测的价值及检测方法EJ3.中外医疗,2009,28:153154.3黄旭映,等.心肌梗死患者血清中肌钙蛋白,肌红蛋白,肌酸激酶同工酶联合检测及临床意义J.检验医学与临床,2009,6(10):82】一822.表2HBVDNA和PreS1抗原检测结果比较3讨论HBV的外衣壳蛋白包括s蛋白,前s1蛋白和前s2蛋白,研究显示,前sl蛋白含有肝细胞膜受体,与病毒侵入肝细胞以及HBV复制关系密切.前S1抗原已成为HBV感染,复制和乙肝患者诊断,治疗和预后的一个重要标志.前s1抗原氨基酸序列中2127片段是HBV与肝细胞的结合位点,与HBV入侵肝细胞有关【33.前s1抗原与HBV复制时表达最多,与HBV复制有关_.本文对HBsAg阳性的标本进行前s1抗原和HBVDNA的检测.由此可见,前s1抗原的检测与HBVDNA密切相关,其阳性可作为HBV复制的一个重要依据.两者均可反映HBV的复制活性.但是前s1抗原阴性时并不意味着病毒复制的终止或者病毒血症的消失由表1可知,在前s1抗原阴性的标本中,仍有24.4%的标本病毒有复制,有传染性.这是因为在HBV急性感染时前s1抗原出现最早,其阴转是病毒清除的最早迹象,这时病毒的复制减缓或已停止,而HBvDNA仍未完全清除.同样由表2亦可看出HBvDNA阴性的血清标本中,仍有58.30A的标本前s1抗原可检出,这是因为HBV急性感染时前s1抗原出现最早,此时病毒复制尚未达到检出所需的拷贝数.从以上分析可以看出,前s1抗原的检测并不能完全替代HBvD