高致病性PRRSV论文：高致病性PRRSV GP5 B表位 中和抗体.doc

高致病性PRRSV论文：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究【中文摘要】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是世界范围内广泛存在的一种危害养猪业的重要传染病。引起该病的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)。目前PRRSV的研究还不够深入,对病毒的抗体依赖性增强作用(antibody dependent enhancement, ADE)、持续性感染及中和抗体等问题的研究结果还存有争议。2006年,我国出现了危害更为严重的高致病性PRRSV变异毒株(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome, HP-PRRSV),给该病的防控带来了更为严峻的挑战。GP5蛋白上的B表位(37)SHL/FQLIYNL(45)一直被认为是PRRSV经典毒株的主要线性中和表位。在HP-PRRSV毒株中,B表位有一个氨基酸突变(L/F(39)I)。为了证实突变对B表位抗原性的影响以及B表位在诱导抗HP-PRRSV中和抗体中发挥的作用,本研究合成了PRRSV经典株CH-1a和HP-PRRSV H.【英文摘要】Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is a serious swine disease which causes economically great losses to the swine industry worldwide. The etiological agent, PRRS virus (PRRSV), possesses some mystery characteristics, such as antibody dependent enhancement (ADE), persistent infection, delay in the production of neutralizing antibodies and so on. In 2006, the highly pathogenic PRRSV (HP-PRRSV) that caused great losses was emerged in China.B epitope (37)SHL/FQLIYNL(45) was considered .【关键词】高致病性PRRSV GP5 B表位 中和抗体【英文关键词】Highly pathogenic PRRSV GP5 B epitope Neutralizing antibody【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究摘要6-7Abstract7第一章 绪论12-211.1 猪繁殖与呼吸综合征的概述12-161.1.1 猪繁殖与呼吸综合征121.1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒12-131.1.3 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒13-141.1.4 PRRSV 的主要结构蛋白与功能141.1.5 PRRSV 的次要结构蛋白与功能14-151.1.6 PRRSV 的非结构蛋白与功能15-161.2 PRRSV 中和抗体的研究进展16-191.2.1 PRRSV 中和抗体的保护作用16-171.2.2 PRRSV 的主要中和表位17-181.2.3 PRRSV 的糖基化位点与中和抗体的延迟产生18-191.3 PRRSV 的疫苗19-201.3.1 常规疫苗191.3.2 基因工程疫苗19-201.4 本研究的背景及目的意义20-21第二章 PRRSV CH-1a 株和 HP-PRRSV HuN4 株 GP5 蛋白 B 表位合 成肽抗血清和猪高免血清的制备21-342.1 材料与方法21-262.1.1 毒株和细胞212.1.2 B 表位序列的氨基酸比对分析21-222.1.3 实验动物222.1.4 主要试剂222.1.5 主要仪器设备222.1.6 PRRSV GP5 蛋白B 表位肽的合成22-232.1.7 PRRSV GP5 蛋白B 表位合成肽抗血清的制备232.1.8 B 表位合成肽抗血清的间接免疫荧光（IFA）检测23-242.1.9 PRRSV CH-1a/CH-1R 和 HuN4/HuN4-F112 病毒液 TCID_(50) 的测定和计算242.1.10 B 表位合成肽抗血清中和效价的测定24-252.1.11 猪高免血清的制备252.1.12 猪高免血清中和效价的测定252.1.13 猪高免血清针对HP-PRRSV HuN4 株B 表位合成肽抗体的测定25-262.1.14 HP-PRRSV HuN4 株B 表位肽合成肽的抑制中和试验262.2 结果26-322.2.1 PRRSV 毒株B 表位序列比对结果26-272.2.2 B 表位合成肽抗血清与PRRSV CH-1a 株和HuN4 株的IFA 检测结果27-282.2.3 B 表位合成肽抗血清的中和效价282.2.4 猪高免血清的中和效价28-312.2.5 猪高免血清中针对B 表位合成肽的抗体水平312.2.6 猪高免血清中针对B 表位合成肽的抗体水平与血清中和抗体水平之间的相关关系31-322.2.7 B 表位肽合成肽的抑制中和试验结果322.3 讨论32-34第三章 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4 株 GP5 蛋白 B 表位的原核表达及其诱导中和抗体能力的研究34-493.1 材料与方法34-393.1.1 毒株、细胞、载体和菌株343.1.2 主要试剂343.1.3 主要仪器设备343.1.4 HP-PRRSV HuN4 株B 表位重组表达载体的构建34-373.1.5 重组质粒的诱导表达及鉴定37-383.1.6 融合蛋白切胶纯化383.1.7 间接ELISA 检测猪高免血清中针对B 表位融合蛋白的抗体水平38-393.1.8 Western blot 检测猪高免血清中针对B 表位融合蛋白的抗体水平393.1.9 B 表位肽融合蛋白的抑制中和试验393.2 结果39-483.2.1 B 表位融合蛋白的鉴定39-403.2.2 猪高免血清中针对 B 表位融合蛋白的 ELISA 抗体水平40-433.2.3 猪高免血清中针对 B 表位融合蛋白的 ELISA 抗