肺炎病原学诊断.ppt

社区获得性肺炎病原学诊断 张泓 社区获得性肺炎病原学 病毒病原合胞病毒 腺病毒流感病毒A和B副流感病毒1 2 3偏肺病毒 鼻病毒细菌病原肺炎链球菌 流感嗜血杆菌金黄色葡萄球菌军团菌属 结核杆菌等 社区获得性肺炎病原学 非典型性病原肺炎支原体肺炎衣原体沙眼衣原体病毒感染为25 35 细菌感染为21 54 非典型病原如支原体 衣原体感染为7 两种以上病原混合11 不同年龄组儿童的常见微生物病原 不同年龄组儿童的常见微生物病原 不同年龄组儿童的常见微生物病原 儿童CAP病原学诊断方法 病原菌分离培养免疫学方法检测病原的特异性抗原抗体分子生物学诊断方法 病原培养分离 标本种类血液胸水支气管肺泡灌洗痰液 咽 鼻分泌物 血液培养 肺炎伴发菌血症机会5 10 重症和免疫抑制患者则较高 血标本采集方便 安全 且污染机会少 特异性高 它们在病原学诊断上具有特殊意义 重症特别是免疫抑制宿主肺炎 应尽早 多次采血作细菌和真菌培养 血液培养 血培养标本要求采集必须在使用抗菌药物之前采用全自动血培养仪配备的儿童专用血培养瓶每次2瓶 在不同部位采血采血量 儿童3 5ml 婴幼儿1 2ml 采集后的血培养瓶应立即送往实验室 采血份数与阳性率之间的关系 采血量与阳性率的关系 胸水 对大多数伴有胸腔积液的肺炎 无论确诊与否 应该行胸腔穿刺术采集标本 胸腔积液或脓胸均应做厌氧培养 胸水是无污染标本 不论被检测出的微生物数量多少 都被认为是病原体 细胞计数和pH测定 腺苷脱氨酶 ADA 测定对鉴别结核胸膜炎具有较好价值 胸水的抗原检测用于疾病诊断 如流感嗜血杆菌b型 肺炎链球菌 军团菌或新型隐球菌 痰标本 痰培养结果应结合临床表现 直接镜检 细胞学筛选 定量或半定量培养以及所发现的微生物的致病力等加以解释 可用于普通细菌 分枝杆菌 真菌的检测 但不适于检测厌氧菌 在无菌条件下 用负压吸引法吸取患儿会咽部以下的下呼吸道的分泌物 置灭菌三通管内 痰标本 痰涂片镜检每低倍镜视野25个中性粒细胞 痰标本也可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染 支气管肺泡灌洗液 对于不能咳出或诱导出足够的痰液患者 支气管肺泡灌洗液可作为获取标本进行病原菌培养的一种方法 支气管肺泡灌洗液在检测需氧菌 真菌 军团菌和分枝杆菌等感染时可提高阳性检出率 有研究表明特异性高达89 100 支气管肺泡灌洗液经低速在玻片上制成细胞标本涂片 可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染的8种病毒 鳞状上皮细胞 1 中性粒细胞 80 为合格标本 标本采集和送检 痰和支气管肺泡灌洗液必须在使用抗菌药物之前或停药1天后留取标本 标本采集后1h内必须立即进行实验室处理 室温下延搁2h会降低肺炎链球菌 流感嗜血杆菌等苛养菌的分离率 铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌则过度生长 我院呼吸道分离的主要细菌 2008 2009 肺炎链球菌869株 14 金黄色葡萄球菌692株 11 流感嗜血杆菌662株 10 肺炎支原体878株 16 3 细菌培养菌落形态 肺炎链球菌 金黄色葡萄球菌 细菌培养菌落形态 MP培养 MP培养 MFA检测呼吸道病毒 MFA法检测呼吸道病毒 病原微生物的抗体检测 血清学检查通常用于检测非典型病原体如肺炎支原体 MP 肺炎衣原体 CP 军团菌 常用方法有间接免疫荧光试验 IFA 酶联免疫吸附试验 ELISA 放射免疫法 RIA 颗粒凝集试验 PA 等 MP血清学检查 ELISA法检测MP IgM MP IgG定性或定量PA法检测MP IgM确诊MP急性感染则应强调双份血清 间隔2周 恢复期抗体滴度上升4倍或下降至原来的1 4或抗体滴度持续 1 160 CP血清学检查 微量免疫荧光法 MIF 酶联免疫吸附实验 ELISA 抗体检测3种 IgM IgG和IgA初次感染 原发感染 时 IgM于发病后3周出现 IgG于发病后6一8周出现 而IgA反应较弱或不出现 再次感染 重复感染 时 IgG常在1一2周内出现 且效价可以很高 但往往没有IgM出现或其效价很低 军团菌血清抗体检测 尿军团菌抗原检测 酶联免疫吸附试验检测病人痰或尿液的嗜肺军团菌抗原 血清学检查 间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验检测特异性IgM抗体 如效价 1 128或双份血清效价呈4倍以上升高可做出确定诊断 军团菌检测 IFA检测呼吸道病原抗体 分子生物学技术 优点直接从临床标本中快速 准确地检测出包括苛养菌在内的细菌 检测耐药基因对耐药菌进行流行病学研究PCR方法方法随机扩增DNA多态性分析限制性片段长度多态性分析PCR多重PCRPFGE MP分子生物学检测 PCR检测MPP1粘附蛋白 根据肺炎支原体P1粘附蛋白设计PCR引物 P1 5 GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG 3 P2 5 GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG 3 扩增产物209bp 双重PCR简便 快速检测军团菌 根据军团菌16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物 可以扩增386bp16SrRNA基因和206bp