局部定向抗结核药物缓释材料在兔桡骨内的释放及分布规律.doc

www.CRTER.org苗瑞瑞，等. 局部定向抗结核药物缓释材料在兔桡骨内的释放及分布规律局部定向抗结核药物缓释材料在兔桡骨内的释放及分布规律苗瑞瑞1，张文龙1，鲍玉成1，李 梅2 (1天津市海河医院，天津市 300350；2天津医科大学第二医院 天津市 300211)引用本文：苗瑞瑞，张文龙，鲍玉成，李梅. 局部定向抗结核药物缓释材料在兔桡骨内的释放及分布规律J.中国组织工程研究，2016，20(38):5691-5696.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.38.010 ORCID: 0000-0003-3948-456X(苗瑞瑞)文章快速阅读：局部定向抗结核药物缓释材料的体内释放与分布苗瑞瑞，男，1982年生，天津中医药大学在读硕士，主治医师，主要从事骨与关节结核诊断与治疗研究。 通讯作者：李梅，副主任医师，天津医科大学第二医院骨科，天津市300211中图分类号:R318文献标识码:A文章编号:2095-4344(2016)38-05691-06稿件接受：2016-06-20结果表明：载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物/ -磷酸三钙局部定向抗结核药物在兔桡骨内释放效果理想，可长时间稳定释放并在局部保持较高杀菌浓度置入后4，8，12周进行缺损部位X射线检查；置入后12周，进行缺损部位组织学观察，同时检测外周血与局部血药浓度建立桡骨远端骨缺损模型后随机分组实验组于骨缺损处置入载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物/-磷酸三钙材料对照组于骨缺损处置入载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物材料文题释义：抗结核药缓释材料：主要是利用不改变材料原有的性能，将抗结核药物植入机体内，达到病灶部位后释放，从而能够保证材料具备抗结核作用，起到抗菌的作用。与全身用药相比，该治疗方法局部缓释载药治疗更加直接，能够在较短时间内使得局部达到预期的药物浓度，减少抗结核药物全身使用时的不良反应，提高抗结核效果。理想的局部缓释材料：材料具备良好的生物相容性，置入机体后不会引起排斥反应；置入材料具备完全降解特性，不需要二次取出，增加患者痛苦；材料具备一定的机械强度、韧性，能够在骨缺损部位发挥支撑作用，并且与细胞具备黏附作用，利用细胞的生长。摘要背景：聚乳酸-羟基乙酸聚合物作为缓释材料，载药量相对较大且释药时间较长，可随着机体细胞的生长而降解，但其亲水性较差，容易引起无菌性炎症反应，不利用机体恢复。目的：分析新型局部定向抗结核药物缓释材料在兔桡骨内的释放及其分布规律。方法：取新西兰大白兔20只，建立桡骨远端骨缺损模型后随机分组，实验组于骨缺损处置入载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物/-磷酸三钙材料，对照组于骨缺损处置入载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物材料。置入后4，8，12周进行缺损部位X射线检查；置入后12周，进行缺损部位组织学观察，同时检测外周血与局部血药浓度。结果与结论：X射线检查：实验组置入后不同时间点的Lane-Sandhu X射线评分显著高于对照组(P 0.05)；组织学观察：实验组缺损部位完全愈合，新生骨小梁之间残留少量缓释材料，材料表面存在明显骨细胞；对照组缺损部位存在新生骨组织且与周围骨组织相互连接，新生骨组织中残留少许缓释材料；血药浓度：实验组置入后不同时间点的外周血与局部血药浓度均高于对照组(P 0.05)；结果表明：载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物/-磷酸三钙局部定向抗结核药物在兔桡骨内释放效果理想，可长时间稳定释放并在局部保持较高杀菌浓度。关键词：生物材料；缓释材料；局部定向；抗结核药物；分布规律；骨缺损；聚乳酸-羟基乙酸聚合物；利福平；异烟肼 主题词：结核；利福平；迟效制剂；组织工程基金资助：天津市卫生局课题(2010KY10)3 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 Release and distribution of anti-tuberculosis drug delivery materials locally oriented in the rabbit radiusMiao Rui-rui1, Zhang Wen-long1, Bao Yu-cheng1, Li Mei2 (1Tianjin Haihe Hospital, Tianjin 300350, China; 2Second Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300211, China)AbstractBACKGROUND: Polylactic acid-glycolic acid polymer is a sustained-release material with relatively large drug loading and long-term release abilities that can degrade with cell growth in the body. However, its poor hydrophily easily leads to aseptic inflammation that is detrimental to the bodys recovery. OBJECTIVE: To study the release and distribution of anti-tuberculosis drug delivery materials locally oriented within the rabbit radius.METHODS: After modeling, 20 New Zealand white rabbits with distal radius bone defect were randomly divided into a control group and an experimental group, which were respectively given implantation of isoniazid-rifampicin polylactic acid-glycolic acid polymer/-tricalcium phosphate material and isoniazid-rifampicin polylactic acid-glycolic acid polymer into the defect. Then, X-ray examination of the defect region was conducted at weeks 4, 8, 12 post implantation. Histological observation and detection of peripheral blood or local blood concentration were performed at week 12.RESULTS AND CONCLUSION: After implantation, Lane-Sandhu X-ray scores were significantly higher in the experimental group than the control group (P 0.05). The defect in the experimental group was healed completely with less release residual among newborn bone trabeculae and osteocytes were markedly visible on the material surface, while in the control group, new bone tissues were interconnected with the surrounding bone tissues at the defect site, and less release residual was found. Both peripheral blood and local blood concentrations in the experimental group were significantly higher than those in the control group after implantation (P 0.05). To conclude, the anti-tuberculosis drug delivery material, isoniazid-rifampicin polylactic acid-glycolic acid polymer/-tricalcium phosphate, has ideal release effect that can stably deliver anti-tuberculosis drugs for a long term at a high bactericidal concentration. Subject headings: Tuberculosis; Rifampin; Delayed-Action Preparations; Tissue EngineeringFunding: the Projected Funded by Tianjin Health Department, China, No. 2010KY10Cite this article: Miao RR, Zhang WL, Bao YC, Li M. Release and distribution of anti-tuberculosis drug delivery materials locally oriented in the rabbit radius. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(38):5691-5696.Miao Rui-rui, Studying for masters degree, Attending physician, Tianjin Haihe Hospital, Tianjin 300350, ChinaCorresponding author:Li Mei, Associate chief physician, Second Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300211, China5693ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction随着抗结核药物的不合理使用，导致多药耐药结核菌株率出现上升趋势，再加上继发性免疫缺陷患者的增多，引起结核病发生率显得更为严峻1。2010年数据显示，2008年全球新发的多耐药结核患者超过44万人，而中国2009年新发多耐药结核超过10万，严重影响患者健康和生活2-3。骨关节结核属于结核的一种，该疾病具有病程长、畸形率较高，患者发病后如果不采取积极有效的方法治疗，将会引起周围组织破坏、脓肿等，导致机体丧失活动能力4-5。相关研究显示，骨关节结核需要长期服用抗结核药物，如异烟肼和利福平6-7。但患者长期服用抗结核药物容易引起肝、肾损害、周围神经病变等，同时还会引起患者难以长期规律用药8-9。目前，临床上对于骨关节结核病灶清除后形成的骨缺损修复材料相对较多，如自体骨、同种异体骨及人工骨等。但自体骨、同种异体骨由于承载药物量相对较少，并且药物释放后维持时间相对较短，使得人们对于人工骨的研究相对较多10-11。聚乳酸-羟基乙酸聚合物是临床上使用较多的药物，该药物具有载药量大、释药时间长、降解时间可根据需要调整等特点。-磷酸三钙也是临床上使用较多的治疗药物，该药物生物相容性较高，降解性较好，能促进骨缺损早期恢复12-13。但临床上对于聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙载药用于骨缺损的尚未见报道14。实验研究局部定向抗结核药物缓释材料在大兔桡骨内的释放及其分布规律，为骨缺损治疗提供依据。1 材料和方法 Materials and methods 1.1 设计 随机分组，对照观察动物实验。1.2 时间及地点 实验于2010年10月至2015年1月天津市海河医院基础实验室完成。1.3 材料 实验动物：周6-8周龄清洁级新西兰大白兔20只，体质量为2.0-2.5 kg，平均(2.30.5) kg，雌雄随机，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，饲养严格遵守相关标准进行饲养，合格证号为许可证号：合格证号：SCXK京2009-0007。对新西兰大白兔进行等条件喂养，对新西兰大白兔的处理符合关于善待实验动物的指导性意见中相关规则15-16。将新西兰大白兔随机分为实验组与对照组，每组10只。局部定向抗结核药物缓释材料体内释放实验的主要仪器和材料、试剂：仪器和材料、试剂厂家异烟肼原药、利福平原药美国Sigma公司聚乳酸-羟基乙酸共聚物、-磷酸三钙山东岱罡生物技术公司甲醛溶液山东鲁抗辰欣药业有限公司常规手术器械上海医疗器械厂高效液相色谱仪D-2000日本日立公司1.4 实验方法 载药聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙材料的制备：使用电子天平城区一定质量的聚乳酸-羟基乙酸聚合物粉末，溶解在10倍质量的1，4二氧六环溶液中，混匀5 min，静置12 h过夜。采用天平称取与聚乳酸-羟基乙酸聚合物粉末等质量的-磷酸三钙粉末，以及一定质量的异烟肼原药、利福平原药，混合到溶液中，再取为聚乳酸-羟基乙酸聚合物质量2-2.5倍的60-80目的氯化钠，加入到制备的混合溶液中。将上述配置好的溶液采用自动搅拌机搅拌至糊状，再使用超过混匀，封闭瓶口，静置4 h。待其充分混匀后，将上述配置好的混合溶液中放入准备的模具中，依次放入-4，-20，-80 超低温水箱中冷冻2 h，然后从冷冻成型的材料从模具中放入到冷冻干燥机中进行72 h干燥，将获取的支架取出，洗盐，待洗盐完全后再次放入干燥机中干燥48 h，取出备用，见图117-18。同法制备载药聚乳酸-羟基乙酸聚合物材料。兔桡骨远端骨缺损模型建立及分组处理：入选新西兰大白兔均禁食12 h，术前肌肉注射0.5 g阿托品，采用浓度为3.6%水合氯醛进行全身麻醉，待麻醉生效后进行消毒、铺巾，在兔左侧桡骨最凸处做一个纵行切口，并依此切开新西兰大白兔皮肤、皮下组织、深筋膜，钝性分离肌肉组织，达到桡骨骨膜，充分暴露桡骨，采用骨锯切除10 mm的桡骨，建立新西兰大白兔桡骨远端骨缺损模型，见图219-20。建模成功后，采用生理盐水对伤口进行冲洗，清除血凝块，对照组置入载药聚乳酸-羟基乙酸聚合物材料，实验组置入载药聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙材料，保证缓释材料完全嵌入在骨缺损部位。两组家兔创面缝合后采用油纱、无菌纱布双层敷料覆盖创面、包扎，根据家兔情况给予抗生素预防感染，待家兔清醒后，送回笼中饲养21-22。1.5 主要观察指标 观察两组兔大体观察，如进食、步态、活动及缺损部位情况；X射线片观察：置入后4，8，12周进行Lane-Sandhu X射线评分，包括骨形成(0-4分)、骨连接(0-4分)、骨塑形(0-4分)情况，得分越高缺损修复越理想23-24；组织学观察：置入后12周，对桡骨缺损新生骨组织进行苏木精-伊红染色病理检查，对取出的材料采用石蜡进行包埋，并采用切片机切成厚度为7 m左右的切片，进行苏木精-伊红染色，在倒置显微镜下观察结果；检测外周和局部血药浓度25：置入后4，8，12周，采用无菌采血管经兔耳缘静脉抽取4 mL血液，10 000 r/min离心5 min，取0.1 mL上层清夜，加入1 mL甲醇中，采用高效液相色谱对其局部药物浓度进行检测，采用C18色谱仪对药物浓度进行检测；局部血药浓度：置入后4，8，12周，按手术原切口进入，取局部缓释材料置入部位周围10 mm以内的肌肉1 g左右，剪碎后加入2 mL生理盐水，采用匀浆仪打匀，取0.5 mL匀浆，加入1.5 mL甲醛，离心10 min，采用C18色谱柱，流动相采用甲醇乙腈=54，检验波长268 nm，检测局部组织药物浓度。1.6 统计学分析 采集数据采用SPSS 18.0进行统计学处理，计数资料行2检验，采用n/%表示；计量资料行t 检验，采用s表示，P 0.05提示差异有显著性意义。2 结果 Results 2.1 实验动物数量分析 20只新西兰大白兔全部进入结果分析。2.2 两组兔大体观察结果 两组兔术后3 d均可正常进食。置入8周后，实验组兔活动相对较多，步态基本正常，未出现任何异常活动；对照组骨缺损部位出现不同程度的水肿、坏死，活动相对较少，步态异常。2.3 两组兔X射线片检查结果 实验组置入后不同时间点的Lane-Sandhu X 射线评分显著高于对照组(P 0.05)，见表1。2.4 两组兔桡骨缺损部位苏木精-伊红染色结果 实验组兔缺损部位完全愈合，新生骨小梁之间残留少量缓释材料，且材料表面存在明显的骨细胞；对照组兔缺损部位存在新生骨组织且与周围骨组织相互连接，新生骨组织中残留少许缓释材料，见图3。表1 两组置入后不同时间点的Lane-Sandhu X射线评分比较 (s，n=10，分)Table 1 Lane-Sandhu X-ray scores in two groups after material implantation图1 聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙材料Figure 1 Polylactic acid-glycolic acid polymer/ -tricalcium phosphate material组别置入后4周置入后8周置入后12周实验组2.05.00.0对照组t19.5520.4421.51P 0.05 0.05 0.05BA表2 两组置入后不同时间点外周血药浓度的比较 (s，1012 L-1)Table 2 Drug concentration in the peripheral blood after implantation图2 新西兰大白兔桡骨远端骨缺损模型Figure 2 A New Zealand white rabbit model of distal radius bone defect图注：图中A为新西兰大白兔桡骨远端骨缺损模型；B为置入聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙材料。表注：与对照组比较，aP 0.05。组别药物置入后4周置入后8周置入后12周实验组异烟肼5.490.52a4.980.47a4.020.31a利福平6.480.58a6.210.52a5.930.43a对照组异烟肼4.210.290.14利福平5.320.464.550.343.940.29BA表3 两组置入后不同时间点局部血药浓度的比较 (s，1012 L-1)Table 3 Local blood concentration after implantation组别药物置入4周置入后8周置入后12周实验组异烟肼6.490.38a6.210.32a5.990.30a利福平6.650.42a6.610.40a6.340.32a对照组异烟肼5.340.290.19利福平5.430.344.620.303.550.18表注：与对照组比较，aP 0.05。图3 两组置入后12周骨缺损部位苏木精-伊红染色结果(200)Figure 3 Hematoxylin-eosin staining of the defect region in the two groups at 12 weeks after implantation (200)图注：图中A为实验组，缺损部位完全愈合，新生骨小梁之间残留少量缓释材料，且材料表面存在明显的骨细胞；B为对照组，存在新生骨组织且与周围骨组织相互连接，新生骨组织中残留少许缓释材料。2.5 两组外周血药浓度比较 实验组置入后4，8，12周的异烟肼及利福平外周血药浓度显著高于对照组(P 0.05)，但随着药物释放时间的不断延长，药物浓度呈现下降趋势，见表2。2.6 两组局部血药浓度比较 实验组置入后4，8，12周的异烟肼及利福平局部血药浓度显著高于对照组(P 0.05)，见表3。3 讨论 Discussion结核病发病率较高且患者需要长期服用抗结核药物，而骨关节结核也不例外。相关研究显示，由于骨关节结合特殊性，患者治疗后容易造成结核菌发生破坏，导致死骨、硬化骨，使得病灶血供不足，传统口服用药或者静脉给药难以到达结核灶内部，达到预期的药物浓度，导致患者病情反复发作26-29。早在20世纪80年代，人们提出了载药缓释材料，该治疗方法能提高机体局部药物浓度，降低患者长期用药后药物不良反应发生率。抗结核药缓释材料主要是利用不改变材料原有的性能，将抗结核药物植入机体内，达到病灶部位后释放，从而能够保证材料具备抗结核作用，起到抗菌的作用30-31。与全身用药相比，该治疗方法局部缓释载药治疗更加直接，能够在较短时间内使得局部达到预期的药物浓度，减少抗结核药物全身使用时的不良反应，提高抗结核效果。理想的局部缓释材料应该具备以下特征：材料具备良好的生物相容性，置入机体后不会引起排斥反应32-33；置入材料具备完全降解特性，不需要二次取出，增加患者痛苦34；材料具备一定的机械强度、韧性，能够在骨缺损部位发挥支撑作用，并且与细胞具备黏附作用，利用细胞的生长。聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙材料是一类比较特殊的材料，主要由聚乳酸-羟基乙酸聚合物以及-磷酸三钙复合而成。聚乳酸-羟基乙酸聚合物是临床上常用的缓释材料，该材料载药量相对较大，并且释药的时间较长，能随着机体细胞的生长而降解35-36。但单一的采用该材料清水性较差，容易引起无菌性炎症反应，不利用机体恢复。-磷酸三钙也是临床上使用较多的陶瓷材料，该材料生物相容性良好，并且置入后能够在机体内完全降解，避免了无菌性炎症等并发症发生率37-38。同时，-磷酸三钙在降解过程中能产生钙离子等，能促进新生组织的形成。将聚乳酸-羟基乙酸聚合物与-磷酸三钙材料联合起来使用效果理想，能发挥两种不同材料的优点，达到优势互补，能更好地促进骨缺损部位修复39。利用异烟肼-利福平均是结核病常用的药物，患者使用异烟肼后药物能够与结合分枝杆菌相互结合，能阻止结合分支杆菌内活性物质的形成，抑制病原菌的复制和增生。利福平也是临床上使用较多的治疗药物，用药后药物能抑制结核菌RNA依赖性DNA的合成酶活性，杀死结核分枝杆菌。将异烟肼-利福平联合起来使用能发挥不同治疗药物优势，提高药物局部浓度，提高临床治疗效果40。综上所述，载异烟肼-利福平聚乳酸-羟基乙酸聚合物-磷酸三钙材料局部定向抗结核药物在大兔桡骨内释放效果理想，材料可长时间稳定释放并在局部保持较高杀菌浓度，能修复大兔桡骨缺损，具有较高的临床应用价值。致谢：感谢天津市第三中心医院于美丽教授对动物饲养及实验的指导。作者贡献：苗瑞瑞、张文龙、鲍玉成、李梅、张文龙进行实验设计，实验实施为鲍玉成、苗瑞瑞，实验评估为李梅，资料收集为苗瑞瑞，苗瑞瑞成文，李梅审校。利益冲突：所有作者共同认可文章无相关利益冲突。伦理问题：实验方案经天津市海河医院动物实验伦理委员会批准，批准号为HHYY20140514。实验动物在水合氯醛全身麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。文章查重：文章出版前已经过CNKI反剽窃文献检测系统进行3次查重。文章外审：文章经国内小同行外审专家审核，符合本刊发稿宗旨。作者声明：第一作者苗瑞瑞对于研究和撰写的论文中出现的不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据(包括计算机数据库)记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁，可接受核查。文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。4 参考文献 References1 张宏其,高琪乐,郭虎兵,等. 人同种异体骨载异烟肼壳聚糖缓释微球的制备和体内外释药特性J.中国组织工程研究,2012,16(3):479-483.2 Ouellet H,Ouellet Y,Richard C,et al.Truncated hemoglobin HbN protects Mycobacterium bovis from nitric oxide.Proc Natl Acad Sci USA. 2002;99:5902-5907.3 全国结核病流行病学抽样调查技术指导组. 第四次全国结核病流行病学抽样调查报告J.中华结核和呼吸杂志, 2002,25(1):3-84 Ma YZ,Xue HD,Surgical strategy for spinal tuberculosis. Chin J Spine Spinal Cord, 2009;19(11): 805-807.5 孙洁.脊柱结核患者围术期的护理需求及护理干预J.实用临床医药志,2012,16(6):63-70.6 陆宇,王彬,郑梅琴,等.应用AlamarBlue和MTT测定抗结核药物最低抑菌浓度的研究J.中国防痨杂志, 2007, 29(6): 499-501.7 德向研,施建党,王自力,等.载三联抗结核药硫酸钙/氨基酸聚合物人工骨体内缓释实验研究J.中国脊柱脊髓杂志,2013,23(6):531-536.8 中华结核和呼吸疾病杂志编委会，抗结核药物引起的毒副作用综合报道J.中华结核和呼吸杂志, 2000,21(1): 40-43.9 燕荣帅,李力韬,张泽华.耐利福平脊柱结核的分子药敏检测及药物缓释系统的研究进展J.中国矫形外科杂志, 2011,19(21):1807-1809.10 Ma Y,Cui X,Li H,et al.The outcome of anterior or posterior instrumentation under different surgical procedure in the treatment of thoracic and lumbar spinal tuberculosis in adults.Int Orthop. 2012;36(2):299-305.11 崔旭,马远征,陈兴,等.不同手术方法治疗脊柱结核及其疗效分析J.中国脊柱脊髓杂志,2011,21(10):807-812.12 折胜利.PLA/PLGA共聚物在组织工程中的应用J.组织工程与重建外科杂志,2011,7(4):235-237.13 赵锡江,齐新生,董寅生. rhBMP-2/PLGA缓释支架的制备及对MSCs细胞成骨活性的体外研究J.国际生物医学工程杂志,2010,33(3):147-151.14 Chono S,Tanino T,Seki T,et al.Efficient drug delivery to alveolar macrophages and lung epithelial lining fluid following pulmonary administration of liposomal ciprofloxacin in rats with pneumonia and estimation of its antibacterial effects.Drug Dev Ind Pharm. 2009; 34(10):1090-1096.15 张海晴,刘成勇,孙庆,等.Mtb耐异烟肼基因变异株的在体外最小抑菌浓度J.中华防痨杂志,2012,34(7):452-45416 安汝玉,易洪城,唐良华.载抗结核药缓释剂的临床效应J.贵阳中医学院学报,2012,34(5):215-217.17 崔旭,马远征,李大伟,等.复合骨形态发生蛋白缓释材料修复兔桡骨缺损J.中国组织工程研究, 2012,16(51): 9558-9562.18 Jutte PC,Rutgers SR,Van Altena R,et al.Penetration of isoniazid,rifampicin and pyrazinamide in tuberculous pleural effusion and psoas abscess.Int J Tuberc Lung Dis.2004;8(11):1368-1372.19 Li JQ,Wang SL,Xu F,et al.Therapeutic effectiveness of slow-release PLGA-oxaliplatin microsphere on human colorectal tumor-bearing mice,Anticancer Drugs. 2010; 21:600-608.20 袁凯,陈建庭.脊柱结核外科治疗植骨材料的临床应用与研究进展J.中国矫形外科杂志, 2012,20(21): 1957-1959.21 伍卫刚,郑启新,郭晓东.利福平-异烟肼-控释型载药人工骨的实验研究J.中国生物医学工程学报, 2010,29(1): 137-142.22 赵莉,何晨光,高永娟,等.PLGA的不同组成对支架材料性能的影响研究J.中国生物工程杂志,2008,28(5):22-28.23 Yang F,Cui W, Xiong Z,et al.Poly/tricalcium phosphate composite scaffold and its various changes during degradation in vitro.Polym Degrad Stabil. 2006;91(12): 3065-3073.24 Zhu M,Wang H,Liu J,et al.A mesoporous silica nanoparticulate/-TCP/BG composite drug delivery system for osteoarticular tuberculosis therapy. Biomaterials.2011;32(7):1986-1965.25 胡杨,马莹,何惠宇.-磷酸三钙支架材料即刻植入对保存剩余牙槽嵴的影响J.中国组织工程研究与临床康复, 2011,15(16):2905-2910.26 万蕾蕾,刘宏伟.-磷酸三钙复合骨髓基质细胞构建组织工程骨的实验研究J.口腔医学研究, 2010,26(4): 497-500.27 陈永锋,王林,张扬,等.以-磷酸三钙为支架组织工程骨在兔脊柱后外侧融合中的作用研究J.生物骨科材料与临床研究,2012,9(1):8-12.28 S