肺炎衣原体ompA基因VD2-VD3区重组蛋白在血清学诊断中的.pdf

卷 期 年 9 4 8 作者简介 周洲 62 A 女 湖南常德人 讲师 硕士 研究方向为肺炎衣原体的诊断与防治 7 8491 9 BC 66 C D8491 8 收稿日期 J K D J H 8LJ4 EJ D 9 HKHE 编码基因 8M 上扩增出抗原优势表位 NO NO 区基因 构建原核表达系统并诱导表达重组蛋白 经 P9 P0 亲和层析法纯化表达产物 间接酶联免疫吸附试验 7 B 8 19 Q 988 JL D 4 4 7RST 检测人血清 中特异性 SUV 抗体 试验表明 转化入 WR 大肠杆菌的重组质粒 能表达并纯化出相对分子质量 为 XO 的 重组蛋白 Y D J L1 D 证实重组蛋白只与 FM HKHE 8 L 发生特异性反应 重组蛋白用作 7RST 包被抗原检测 FM 阴阳性参比血清 特异性和灵敏度均为 Z 对 JW MJ K D J H 8LJ4 EJ D 9 HKHE 其中 相对 分子量 HJ 为 QO 的 HKHE 免疫原性强 能刺激 机体产生强烈的保护性免疫 是机体体液免疫反应 的主要目标 成为 FM 诊断试剂的主要候选抗原 之一 尽管 HKHE 早已作为抗原被应用于 FM 诊 断试剂盒的研制中 但是 衣原体间 沙眼衣原体 鹦 鹉热衣原体及肺炎衣原体 交叉抗原的存在导致了 检测结果的非特异性 因此 目前还没有一种仅针对 FM 的诊断试剂盒能在全球范围内被推广应用 本 文根据 FM 全基因测序结果 8M 通过软件分析 筛选 HKHENO NO 区优势抗原表 位基因进行克隆与表达 对重组蛋白的免疫活性进 行检测 并以重组蛋白为包被抗原建立间接 7RST 法 对 公司 64 标记山羊抗人 抗体 64 标记山羊抗兔 标准血清参考品为德国欧蒙公司产品 3 52 全自 动酶标检测仪购自芬兰雷勃公司 IJK 核酸蛋白 定量分析仪购自 34 5 3 AB B C 3 B9 9D9A 5 2 C 2 A9 9D9A E 重组蛋白的表达和可溶性分析 经 引物对重组质粒进行 F 扩增 获得 产物的大小约为 6G7 与预期值相符 将重组表 达载体用 3 AB B3 A D EQ R SL 9 CTD C EQ R SL 9 CTD C MS G2PEQ R SL T 9 CTD C MS G2PEQ R SL T 9 CTD C EQ P MS G2 DT 2 42 N A 34 AB A 3 9D2A 1 KT 2A2 A 34 AB A 3 9D2A 0重组蛋白的纯化与 1234256 78 4 分析 通过 I9 IS5 H9 亲和层析法纯化重组蛋白 随 着洗脱缓冲液 H 值的下降 可获得 N 2 左右的单 一蛋白条带 测定蛋白浓度为 GO64 P4Q 蛋白印 迹分析显示 此蛋白条带只能为抗 3A 2 2 D3479 2 A 3A 9 R SL 9 CTD C EQ P MS G2 0 抗体滴度及阳性反应率 S27 5 A973C A9A 2 C T4 3 9A9Y 2A 2 2 9 79 C D3479 2 A 3A 9 7 AB T4 24 P 6G3 AB 2A9Y D3 A 3 AB 2A93 O 2 D3 9C C 3 9A9Y 6 H 68 A88 A B CC8 8 01 8 9 B C 8 D E 498 8 5 5 8 F 01 8 GH4 57 G HI 2 4 57 B5 8J G K G J 2 3 L 0讨论 随着分子生物学技术的飞速发展 分析 重组蛋白能被 1 基因 UV FUV 区重组蛋白在血清学诊断中的初步应用LK微生物学报 O TO 也是一个参考 并为 疫苗的研制及其防治工作 提供了另一种有效的思考线索 同时本研究也证明 了重组蛋白作为 诊断抗原的可行性 为今后进一 步研究诊断 感染的临床诊断试剂盒打下基础 参考文献 6 615 1 141 A B C0 D2219 E1 5 212 6 1 8 3 661 9 1 8 2 7561 21 X YF X 8 ZF 17 8 JKF V1 615