梅毒螺旋体三种血清学实验方法的比较.doc

梅毒螺旋体三种血清学实验方法的比较摘要 目的：比较三种血清梅毒抗体检测方法的性能及检测价值。因明胶颗粒凝集试验（TPPA）是公认的最佳梅毒确认方法，所以我们以TPPA方法作为参照，进行比较。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）作同步检测，用明胶颗粒凝集试验（TPPA）作参照对比。结果：45例标本，以TPPA作为参照，ELISA法假阳性仅1例，TRUST法假阳性有5例，另有假阴性6例。结论：ELISA法检测血清中梅毒抗体灵敏度和特异性均明显高于TRUST，与TPPA法无显著差异，但两种方法各有其优点，在方法学上呈互补性，将两种方法结合更有利于提高检测的敏感性和特异性。关键词 梅毒抗体；甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）；酶联免疫吸附试验（ELISA）；明胶颗粒凝集试验（TPPA）。1 材料和方法：11 标本来源：我院20092010年门诊疑为梅毒的患者标本45例，年龄在2468岁之间，平均46岁，其中女性12例，男性33例。 12 试剂：TRUST试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供；ELISA试剂盒为北京万泰生物药业股份有限公司产品；TPPA试剂盒为日本富士株式会社产品。13 实验方法：采用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和酶联免疫吸附试验（ELISA）同步进行检测，以明胶颗粒凝集试验（TPPA）作参照。甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）是由心磷脂+胆固醇+卵磷脂组成的复合抗原，吸附于甲苯胺红上，检测血清中非特异性抗体。使用试剂，用旋转仪振摇，室温保持2024，每分钟转摇100次，8分钟观察结果。TRUST试验是一种非特异性血清试验。酶联免疫吸附试验（ELISA）为双抗原夹心法，使用试剂，比色用全自动酶标仪比色。ELISA法检测梅毒螺旋体是将基因重组表达的梅毒膜特异性抗原包被在微孔板上，用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体，主要检测梅毒螺旋体IgG和IgM抗体。梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）是将特异性梅毒螺旋体抗原包被在明胶颗粒上，与血清中特异性抗体结合后出现肉眼可见的凝集反应的检测方法。2结果：采用ELISA试验和TRUST试验同时进行检测，阳性结果均用TPPA试验进行确定，下表是两种方法检验结果的比较。 两种方法检验结果的比较45例标本，经TPPA试验以及临床初诊为44例，TRUST法结果为15例阳性，30例为阴性；ELISA法结果为20例阳性，25例为阴性。30例TRUST阴性标本中有5例为假阴性；15例TRUST阳性标本中有5例为假阳性。以TPPA检测结果为标准，25例ELISA阴性标本其TPPA法结果仍为阴性。20例ELISA阳性标本其TPPA检测结果为19例，1例为假阳性。45例标本，TRUST法假阳性5例，假阴性5例。TRUST法敏感性和特异性分别为75%和85.7%，ELISA法敏感性和特异性分别为100%和96.1%。ELISA法与TPPA法检测结果之间无显著差异。3讨论：梅毒螺旋体（Treponema pallidum .TP）感染俗称梅毒，是一种慢性传染病，主要通过性接触和血液传播主，是我国三大性传播疾病之一。近年来，梅毒的发病率逐年上升，面在术前,输血后,妊娠等的梅毒的检测也已作为常规检测项目。由于梅毒的临床表现复杂，易被漏诊或误诊，因此梅毒实验室检查结果对病情的判断显得极为重要。现在梅毒筛查的方法主要有：RPR，TRUST，ELISA，TPPA法等，但其特异性，灵敏度各异。TPPA是目前公认的最佳梅毒确认实验方法，但由于成本高，操作时间长等原因不适于临床筛查，因此，选择一种特异性强，灵敏度高的方法显得尤为重要。人体感染梅毒螺旋体610周后，血清中会产生两类抗体，一类是直接针对梅毒螺旋体的特异性抗体，另一类则是针对类脂质的非特异性抗体。针对类脂质的抗体因有直接针对梅毒螺旋体，因此无特异性。除感染梅毒外，患其它一些疾病以及生理状况的改变，体内也可能产生低滴度的抗类脂质抗体。诊断梅毒时，所做的梅毒血清学检查即检测这两类抗体。TRUST是一种非特异性实验，在一期梅毒早期和晚期潜伏梅毒可呈阴性，在一期潜伏梅毒及晚期梅毒中检出率为58%85%，其敏感性我科检测为75%，较ELISA法测得梅毒敏感性低。ELISA法是利用基因重组工程合成，其检测的是梅毒IgG和IgM的混合抗体，ELISA法具有试剂价廉，保存时间久且稳定等优点，操作简便，取样量少，不受样品中纤维蛋白和溶血的影响，一次可进行多份样本的检测，结果用酶标仪分析，客观准确，结果便于保留，可用作筛查和确认试验。因此，因ELISA法的准确性及方法学的优势，可作为梅毒血清学诊断实验的首选方法。综上所述，TRUST法操作简便，可重复性好，利用检测滴度来观察疗效，复发再感染效果好，适用于标本的初检，但其特异性和敏感性较ELISA法低。ELISA法检测梅毒灵敏度，特异性均明显高于TRUST法，其结果也与TPPA法无显著差异，可用于大规模的标本筛查和临床梅毒的筛查，诊断，是检测梅毒的首选方法。虽然TPPA法是公认的梅毒确认方法，但是其价格昂贵，所以ELISA法基本可替代TPPA法。由于近年来梅毒发病率较高，上报传染病例数明显增加，而其中出现的梅毒假阳性也呈逐渐上升趋势，所以为了更好，更准确地检测，实验室应采取特异性和非特异性两种梅毒血清检测方法同时进行，二者结合可以更有效地减少漏诊