大鼠实验研究中三种采血方法的应用.doc

大鼠实验研究中三种采血方法的应用亘直至匡!生!月第13卷第5期JournalofMilitarySurgeoninSouthwestChlna.V0I.13.N0.5.seDt.2011?787?大鼠实验研究中三种采血方法的应用邹洪,闰洪涛,李军,伍松,唐均成,汤礼军摘要目的探讨大鼠眼眶后静脉丛真空采血管连续采血法的可行性.方法将6O只GK大鼠随机分为三组(每组20只),分别使用三种不同采血法,比较它们的成功率.眼眶后静脉丛的采血法:垂直插入内眦并向眼底方向转动以便切开静脉丛.腹主动脉采血法:在腹主动脉分叉处向心端13am处为最佳穿刺点.尾尖采血方法:手术剪剪去尾尖510mm,三种方法各采血80次.结果成功率分别为:眼眶后静脉丛采血100%;腹主动脉采血95%;尾部采血100%.结论眼眶后静脉丛真空采血管采血法具有取血量大,不易溶血,不损伤器官且可反复多次采集等特点,有利于提高实验的准确性.关键词眼眶后静脉丛;真空采血管;采血法【中图分类号R一332文献标识码A文章编号16727193(2011)05-0787-02Doi:10.3969/j.issn.16727193.2011.05.003ApplicationofThreeRatBloodCollectionMethodsinExperimentsZouHong,YahHongtao-LiJan,WuSong,TangJuncheng,TangLijun,GeneralSurgicalCenterofPLA,ChengduMilitaryGeneralHospital,Chengdu,SiehuanProvince,P.R.China610083AbstractObjecaveTodiscussthefeasibilityofincessantbloodcollectionwithVaCULUTItubeinpostorbitalvenousplexusofrats.Methods60GKratswererandomlydividedinto3groups,20ineach,and3differentbloodcollectionmethodswere印-pliedrespectivelyinthe3groups:bloodeolleetionfrompostorbitalvenousplexus,bloodc0uectionfromabdominalaortaandbloodcollectionfromthetailtip;eachmethodwperformedfor80timeandtheirsuccessfulrateswerecompared.ResultsThesuccessfulrateofbloodcoilectionfrompost一0rbitalvenousplexuswas100%aswellasbloodcollectionfromtailtip.theSuccesslllrateofbloodcollectionfromabdominalaortawas95%.ConclusionsBloodcollectionwithvacuumtubeinpostorbitalvenousplexusisofsuchadvantagesas:biggerbloodeoUectingvolume,loweroccurrenceofhemolysis.nowoundtoor-gansandrepeatabilityofeoHecfion.itcanraisetheaccuracyofexperiments.KEYWORDSpostorbitalvenousplexusvacuumbloodcollectingtubebloodcollection在动物实验研究中,常常需要采集血样进行指标检测.在许多实验中检测指标多,用血量大,并且需要多次重复采血,如药物药效,中药毒理实验等,这就要求在采血过程中既要保证动物的安全,又要求血液样本的质量.大鼠的体重较小,血容量仅约1O一16ml,因此选择适当的采血方法尤为重要.本研究通过观察大鼠眼眶后静脉丛真空采血管连续采血后大鼠的一般情况,从而探讨该方法的可行性及操作要领.1材料与方法1.1实验动物及饲养方法雄性GK大鼠6O只,1012周龄,体重300320g,由上海斯莱克公司提供.将大鼠随机分成3组,每组20只,每周定期采血1次,共4次.饲养条件:高脂高糖饲料,12小时光照周期,室温2224.C,湿度50%.1.2采血材料英国BectonDickinsonandCompany生产的一次性使用静脉血样采集容器真空采血管(射线灭菌),山东威高集团医用高分子制品股份有限公司生产的一次性使用静脉血样采集针(无菌7号),饮用矿泉水瓶(500n)1个,75%医用酒精,外科用无菌敷料.1.3采血及方法i.3.1眼眶后静脉丛真空采血管采血法将大鼠从已制作好的矿泉水瓶尾部放人,待鼠头露出后纱布塞紧;用异氟烷吸人麻醉,大鼠固定在实验台边缘,鼠头向下.75%酒精消毒大鼠眼眶后边缘11.5cm区域,左手抓紧大鼠颈部皮肤固定头部,并轻轻向下压迫颈部两侧使双眼球充血,右手用事先准备好的7号一次性使用静脉血样采集针针头顶端(针尖斜面朝内),垂直插入内眦并向眼底方向来回划动数次以便切开静脉丛,由于针尾部分被密闭乳胶管包裹,血液不会自动流出-3.见针头与软管连接处有血液后,保持此位置连接真空管,血液便会连续不断地滴人采血管,当血液量达到所需的标准时将真空管退出.此时针尾部又回到了胶管中,血液被止住,再换另一采作者单位:610083成都军区总医院普外中心(邹洪,闰洪涛,伍松,唐均成,汤礼军),麻醉科(李军);tJtl,泸州医学院(邹洪)通讯作者:汤礼军,Email:whjtljyahoCOll1.an.?788?2011年9月第13卷第5期JournalofMilitarySurgeon遮!:,:!:111血管进行采集多管血样进行不同指标的检测.采足血样后,拔出针头立即用无菌敷料压迫数秒止血,此法一次大约可取35ml血液.1.3.2腹主动脉采血法3%的戊巴比妥钠按30mg/kg体重的剂量大鼠腹腔内注射,待麻醉起效后.仰卧固定在大鼠手术台上,后背部放置一粗试管以充分暴露腹主动脉,常规消毒后用眼科剪沿腹正中线剪开腹腔.无菌敷料将肠管及组织向大鼠左侧腹部推移,在脊柱前方靠右边颜色稍白的即腹主动脉.施术者右手持5ml空针,针尖斜面朝下,进针角度约2530.,朝向心端方向刺人,深度以5mm左右为宜,抽吸血液即可,此法大鼠一次可采血液810ml.1.3.3尾尖采血方法将大鼠固定好,用75%的酒精反复擦洗鼠尾约2min,待血管充血后,擦干鼠尾,甩消毒跟科剪剪断尾失约58mm,然后从尾根部向尾尖按摩,血自尾尖流出.此法一次可采12rnl血液.2结果6O只GK大鼠三种方法各采血8O次,共采血240次.眼眶后静脉丛采血法:采血8O次,成功8O次,成功率100%;腹主动脉采血法:采血80次,成功76次,成功率95%;尾尖采血法:采血8O次,成功8O次,成功率100%.眼眶后静脉丛真空采血管采血法具有取血量大,不易溶血,不损伤器官且可反复多次采集;适用于实验进程中需要重复多次,取血量大的研究,例如血清胰岛素,糖化血红蛋白,血肝肾功等多项目的检测.三种方法各有其优缺点,注意事项和应用范畴.3讨论GK(GotoKakizaki)大鼠是一种自发性2型糖尿病模型,具有血糖轻度升高,葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力受损,胰腺B细胞团块量减少等特点.GK大鼠在国外应用普遍,但国内使用较少.在动物实验研究中,血样的采集是一个关键环节,如果因为采血技术难以掌握而不能采集足量血液时,直接影响实验研究结果.本文在采血后1O分钟内,真空采血管配样分离血清,离心速度3000r/rain,采血管中的凝胶会自动将血清与血细胞层分开,这样保证了血样的高质量,避免了传统方法中血液成份的混合而影响测试的结果一.本文三种采血方法具有以下特点:(1)眼眶后静脉丛真空采血管采血法:方法简单易学,便于掌握;血流较快,采血量多;伤口较小,愈合较快;成功率高,死亡率低;不易溶血,不损伤器官且可反复多次采集;但本方法采血不能避免组织液的混入,对于血样要求较高的研究应谨慎使用.(2)腹主动脉采血法取血量大,不易溶血;但操作比较复杂,技术性较强,重复性差.(3)尾尖采血方法简单易行,操作方便,对大鼠损伤小;但每次采血量少,不适宜需要抽取较多血液的实验研究,而且尾尖采血伤口暴露在外,尤其在对免疫系统有影响的大鼠模型中,应注意防止感染.作者在实验中体会:(1)眼眶后静脉丛真空采血管采血法可适用于实验进程需要反复多次,用血量大的研究,例如药物药效的分析,某些术前术后对比研究的指标,如血清胰岛素,糖化血红蛋自等项目的检测;(2)腹主动脉采血法适用于某些用血量大,单次采集样本的检测,如血液生化,电解质动脉等的测定;(3)大鼠间隔7d采血2ml,对其血液成份,营养状况及生命活动无明显影响,以1只200g体重的大鼠为例,血量约占其体重的6%一8%,大约相当于l216ml全血.一次采血2ml,低于全身血量的30%,不会导致失血性休克J.但应注意掌握:(1)适宜的麻醉深度,防止心跳骤停,减少出血及大鼠躁动;(2)针头进入体内的深度,过浅不能充分破坏眼眶后静脉丛会导致血流很小并容易凝血,过深易致眼球后组织的损伤,且会造成鼻骨的破坏血液进入鼻腔及呼吸道,导致大鼠窒息死亡;(3)如果采血量和采血次数增加,会使大鼠引起一定的应激性反应或采血部位的伤害.作者认为血液标本的采集部位与方式应根据课题的实验设计与指标检测要求来选择,减少操作误差,尽可能提高实验的精确性.【参考文献】1李研,于峰.大鼠腹主动脉真空采血管采血法J.卫生毒理学杂志,2001,15(4):258