DC-CIK细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用.ppt

DC CIK细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用 恶性肿瘤的治疗现状 恶性肿瘤的多学科综合治疗 恶性肿瘤各种治疗手段各具优势与不足 肿瘤外科学肿瘤放射治疗学肿瘤化学治疗学肿瘤生物学治疗 侧重点不同局部与全身早 中 晚期 肿瘤免疫学治疗的优点 可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞 达到治疗肿瘤 预防复发与转移和最终根治肿瘤的目的 具有特异性强 适用性广 副作用轻等优点 肿瘤免疫学治疗 非特异免疫刺激剂及细胞因子治疗 IL2 IL6 IL12 GM CSF TNFa IFNa IFNr等体内应用 装载有细胞因子基因的细胞治疗 治疗性疫苗 肿瘤抗原或多肽抗原疫苗 装载肿瘤抗原基因的病毒疫苗 基因修饰的肿瘤细胞疫苗 APC细胞疫苗 抗独特性疫苗 Mab导向治疗 Mab Mab 毒素 Mab 同位素 鼠 人单抗 人源单抗 双特异性抗体 过继性免疫细胞治疗 供者淋巴细胞输注 LAK TIL CIK 多种方法诱导的CTL DC CIK等 过继免疫疗法 通过把在体外扩增的大量特异性效应细胞回输给患者后 产生直接杀伤肿瘤细胞的作用 DC CIK培养及其应用 CIK细胞 CytokineInducedKillerCellDC DendriticCell CIK细胞特性 分布 肝脏和外周血来源 CD3 CD56 T细胞和CD4 CD8 T细胞一群以CD3 CD56 T为主的异质细胞包括 T细胞 T细胞与LAK CD3AK细胞相比高效 广谱杀伤 非MHC限制 DC与T细胞 DC高表达MHC 类 类分子 MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合 形成肽 MHC分子复合物 递呈给T细胞 从而启动MHC I类限制性CTL反应和MHC 类限制性的CD4 Thl反应 DC还通过其高表达的共刺激分子 B7 1 B7 2等 提供T细胞活化所必须的第二信号 启动了免疫应答 DC负载肿瘤抗原 肿瘤杀伤作用 DC在DC CIK杀伤肿瘤细胞中的作用 诱导抗原特异性CTL反应增加CIK细胞的扩增倍数增强CIK肿瘤杀伤效力 MHC 抗原提呈自分泌细胞因子 INF IL 12等抑制CD4 CD25 调节T细胞生长 CIK细胞的制备 PBMNC CS3000Plus Ina3000mlBaxterbag SerumfreeculturemediumIFN 第一天Il 2第二天CD3mAb第二天IL1 第二天 14days CS 3000采集PBMNCFicoll分离PBMC 洗2次1 2 106 ml接种至含无血清培养基的培养袋中 1000ml 袋 加入IFN 1000U ml 放置37 5 的CO2孵箱中培养24h加入IL 1 100U L CD3单抗50ng ml 重组人IL 2300U L 继续培养 每3天半量换液 并补加IL 2300U ml 分别于第5 7 9天取细胞做细胞表型分析 FCM检测 细胞杀伤实验 MTT法 收集细胞 含0 5 白蛋白的生理盐水洗涤回输 CD3主要促CIK细胞增殖 促IL 2自分泌 也提高CIK杀伤活性IFN r IL 1 上调细胞表面IL 2R表达 IFN r先于IL 2加入 有效激活效应细胞 增强抗肿瘤活性 DC的培养 BMDC SerumfreeculturemediumIL 4 GM CSFTNF 成熟DC 7 9days IL 4 GM CSFTNF PBDC Tumorantigen DC CIK共培养 成熟DC CIK细胞 CIK细胞的增殖 62 84 7 89 5 28 2 43 1 52 3 CIK细胞对自体原代白血病细胞的杀伤作用 CIK细胞对自体原代白血病细胞有明显杀伤作用 且其细胞毒作用随着效靶比的增加而进一步增强 在效靶比为20 1时 其中位杀伤率分别为51 33 52 95 肿瘤细胞冻融物肿瘤细胞坏死物正常生长的肿瘤细胞无肿瘤细胞无DC DC CIK对肿瘤杀伤作用 DC CIK对肝癌细胞的杀伤活性 DC与CIK共培养后 CIK增殖能力和杀伤活性明显增强 DC CIK治疗结肠癌血源性肺转移的实验研究 DC CIK治疗乳腺癌 CIK DC CIK治疗恶性血液病合并丙肝 HCV RNA转阴例数14 18治疗2疗程以上HCV RNA持续阴性6 9ALT AST TBIL明显下降或正常例数10 10 CIK治疗1例白血病合并丙肝后肝功的变化 新技术 RetroNectinactivatedkillercell RAK DC相关的技术 RetroNectinactivatedkillercell RAK 重组人纤维蛋白片段 RetfoNectin 可参与细胞的附着 伸展 分化和增殖 该产品已注册美国药典和国际专利 当包被在培养皿和培养瓶中时 RetroNectin能显著提高逆转录病毒转染入哺乳动物细胞内的效率 RetroNectin还可参与细胞的附着 伸展 分化和增殖 可增加体外CIK细胞扩增倍数 及肿瘤杀伤活性 RetroNectinactivatedkillercell RAK zoledronateacid 唑来膦酸 转染AFP质粒的腺病毒感染DCDC CIK共培养杀伤活性检测 健康供着DC和CIK 肝癌患者DC和CIK CIK DC CIK治疗后的不良反应 寒战发热疲乏无力关节肌肉酸