卤虫培养.doc

卤虫培养卤虫的发育及生活史卤虫的发育过程中有变态，历经以下阶段： 卵 初孵无节幼体（1龄无节幼体）：体长400-500mm，橘红色，不摄食，靠卵黄维持新陈代谢 后无节幼体（2龄无节幼体）：开始外源性营养 拟成虫期幼体 成体卤虫的繁殖习性（一）卤虫的生殖类型由种的特性决定，不受环境因子的影响而改变。 孤雌生殖卤虫：种的组成中没有雄虫或雄虫的比例极低，雌虫不需要与雄虫交配就可繁殖后代。 两性生殖卤虫：种的组成中有雌虫和雄虫之分，只有雌、雄虫交配后才能繁殖后代。（二）卤虫的生殖方式卤虫的生殖方式与其生殖类型无关。生殖方式受内、外界环境因子的影响，环境的变化会引起卤虫生殖方式的改变。生殖方式： 卵胎生：子代自母体内产出时已孵化为小的无节幼体。 卵生：子代以卵的方式自母体内产出。夏卵和冬卵卤虫的生态习性1. 分布世界性分布。我国卤虫资源主要集中在西北内陆盐湖和华北盐田（P184）。2. 盐度 适盐范围为10-242，最适盐度范围为30-50。耐高盐的特性是卤虫逃避敌害的唯一方法。3. 温度卤虫能忍受的温度范围为-3-42，因产地不同而有所差异，最适生长温度25-30。4. 溶解氧和pH值卤虫的耐低氧能力很强，可生活在 DO为1mg/l的水中。孵化用水的pH值8-9为宜。5. 食性滤食性生物，对大小516微米的颗粒有较高的摄食率。在天然环境中主要以细菌、微藻和有机碎屑等为食。6. 敌害水鸟，某些昆虫或其幼虫(如半翅类、甲虫等)也能捕食卤虫。 卤虫卵一、卤虫冬卵的生物学特性 一、卤虫冬卵的外层为一厚的卵壳，卵壳内为处于原肠期的胚胎。卵壳分为三层: 从外到里分别为外壳（硬壳层）、外表皮（外表皮膜）、胚表皮。卤虫休眠卵卵壳： 外壳（硬壳层）：呈土黄至咖啡等不同深度的颜色。作用：保护其内的胚胎免受机械和辐射的损伤。 外表皮（外表皮膜）：有筛分作用，可阻止分子质量比二氧化碳大的物质通过，从而保护胚胎。 胚表皮（内层）：为一透明而有弹性的膜 。 卵壳内的胚胎为一约有4000个细胞的原肠胚。二、卤虫卵的贮存风干后低温或冷库贮存。制成真空或充氮的密封罐，罐装贮存。饱和盐水保存。三、卤虫卵的孵化二、1.卤虫卵孵化过程中形态及生理的变化2. 孵化的环境条件 温度：25-30，保持恒温。以保持孵化的同步进行。 盐度：常用盐度20-30的海水。 pH：最适范围89 ，pH值过低可用NaHCO3调节。 充气和溶解氧：孵化过程中需连续充气。作用：供给孵化所需氧气，防止卤虫卵沉底堆积。 虫卵密度：一般为1-3克/升。 光照：连续光照，光照强度为2000lx左右。 3. 孵化方法（孵化流程）（1）准备孵化容器，具锥形底的玻璃钢桶较好。孵化容器用前需要进行消毒。（2）用海水或淡水浸泡1-2小时， 使虫卵充分吸水，以加快孵化速度。（3） 虫卵的消毒：为了杀灭虫卵表面粘附的细菌，一般用200ppm的福尔马林溶液浸泡30分钟，或用300ppm的高锰酸钾溶液浸泡5分钟。在上述的孵化条件下，孵化2436小时可出现无节幼体。 四、卤虫卵的去壳卤虫卵壳的主要成分是脂蛋白和正铁血红素，去壳的原理就是利用次氯酸钠或次氯酸钙溶液氧化去除这些物质。去壳步骤：1.卤虫卵的吸水 卤虫卵吸水膨胀后呈圆球形，有利于去壳。一般是在25淡水或海水中浸泡12小时。一般待虫卵变成圆球形即可。2.配制去壳溶液 常用的去壳溶液是次氯酸钠溶液、氢氧化钠和海水按一定比例配制而成的。 一般而言，每克干虫卵需使用含有0.5g的有效氯的次氯酸钠或次氯酸钙，而去壳溶液的总体积按每克干卵14ml的比例配制。 由于卤虫卵的去壳过程是氧化反应，氧化效率取决于次氯酸盐解离成次氯酸根的程度，而此解离程度与溶液的pH值有关。当pH大于10时，次氯酸盐解离成次氯酸根的比例最大，因而氧化效果也最好。因此，需要在去壳液中加入适量的pH稳定剂。 通常使用氢氧化钠（用次氯酸钠时使用，用量为每克干卵0.15g)，或碳酸钠（用次氯酸钙时使用，用量为每克干卵0.67g，也可用氧化钙，用量为每克干卵0.4g）来调节PH值在10以上。 由于有效氯的含量会随贮存时间的推移而下降，因此，在配制去壳液之前需要测定次氯酸钠的有效氯的确切含量。有效氯含量的测定可用蓝黑墨水法，更精确的可采用硫代硫酸钠法。 此外，去壳液要现配现用。3.去壳 将浸泡好的卤虫卵沥干后放入已配好的去壳液中并不断搅拌。 在去壳过程中，卤虫卵的颜色渐渐由咖啡色变为白色，最后变为橘红色。此过程最好在5-15分钟内完成，时间过长会影响孵化率。 去壳过程是一个氧化作用，并产生气泡，要不停地测定其温度，可用冰块防止升温到40以上。4.清洗脱氯 当在解剖镜下看不见咖啡色的卵壳时，即表示去壳完毕，此时去壳溶液的温度不再上升。 用孔径为120-130微米的筛绢收集上述已去壳的卤虫卵，用足量的自来水或海水充分冲洗，直到闻不出有氯气味为止。 为了进一步除去残留的次氯酸钠，可将去壳卵浸入1-2%的硫代硫酸钠溶液中约1min中和残氯，然后进一步用自来水或海水冲洗。 去壳卵经冲洗后，可以直接投喂，也可以孵化后投喂或放入-4冰箱中保存。五、卤虫卵的质量评价卤虫卵的质量：外观质量 孵化性能 营养价值1. 外观质量的判别色泽与气味 泥沙含量 破壳与碎壳 空壳 含水率 卵的大小 细菌含量 2. 孵化特性的判别（1）孵化率（Hatching percentage, H%，孵化百分率或孵化百分比）每百粒卤虫卵（不包括空壳）能够孵化出的无节幼体的只数，以百分比表示。孵化率是衡量卤虫卵孵化性能最常用的指标。（2）孵化效率（Hatching Efficiency, HE）每克卤虫卵能够孵化出的无节幼体的只数。（3）孵化产量（Hatching Output, HO）每克卤虫卵能够孵化出的无节幼体的总干重（mg）。孵化产量最能反映卤虫卵的孵化质量。（4）孵化速度（Hatching Rate, HR）孵化速度：孵化出90%无节幼体所需的时间T90与孵化出第一个无节幼体所需的时间T0的差值。孵化同步性：孵化出90%无节幼体所需的时间与孵化出10%无节幼体所需时间的差值。卤虫卵孵化率的测定：国际上通用的方法：A法和B法。国内：溶壳法、数粒法、密度法等。 A法（1）称取250mg的待测卤虫卵，放入250ml的锥形瓶中，往锥形瓶中加入100ml的盐度为35的海水，连续光照，光照强度为1000-2000lx，水温25，从底部充气使所有的虫卵悬浮在海水中，但充气不可太强，以免出现泡沫。（2）1h后，用移液管（移液器）取5-10个样品，每个样品0.5ml，每个样品约有100粒卤虫卵。（3）将取得的样品分别放在滤纸上，然后计数，记录每个样品的虫卵数C。（4）把滤纸上的虫卵分别冲洗下，放入培养皿中或5ml的小试管中，加入盐度为35的海水，水深0.3-0.5cm，在上述条件下进行孵化。（5）48h后，将孵出的无节幼体用碘液固定，在体视显微镜下计数每个样品中的无节幼体数N。也可用肉眼观察，用滴管吸取活体进行计数。（6）计算孵化率：H% = N/C100%B法（1）称取250mg的待测卤虫卵，放入250ml的锥形瓶中，往锥形瓶中加入100ml的盐度为35的海水，连续光照，光照强度为1000-2000lx，水温25，从底部充气使所有的虫卵悬浮在海水中，但充气不可太强，以免出现泡沫。（2）48h后，用移液管（移液器）取5-10个样品，每个样品0.5ml，每个样品约含100只无节幼体及未孵化的卵粒。（3）将每个样品分别加入培养皿中，用碘液固定，在体视显微镜下计数每个样品中的无节幼体数N。也可用肉眼观察，用滴管吸取活体进行计数。（4）预先配好NaOH溶液（40gNaOH加入100ml蒸馏水），向每个样品中滴1滴NaOH溶液，再滴5滴含有效氯5.25%的次氯酸钠溶液（漂白粉水）。数分钟后，空壳溶解，未孵化的卵成为去壳卵。计数每个样品中的去壳卵个数C。（5）计算孵化率：H% = N/（N+C）100%A法和B法的比较A法：与中华人民共和国水产行业标准规定的卤虫卵孵化率测定方法一