蚕豆根尖微核试验.doc

学生设计性实验论文 毒物对蚕豆根尖细胞 的微核诱变效应 姓名 雷旭红 学号2013131203专业 生物科学 班级 132相关实验课程名称 细胞生物学实验指导教师 郝雪峰实验学期 2014-2015 学年第 二 学期太原师范学院教务处编印洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究摘要 掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。结果表明：洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。 Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic关键词 蚕豆根尖细胞 洗衣粉 洗发露 微核 诱导作用 损伤 Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。所谓环境的一致性，即指环境中物理或化学污染物对生物的致畸、致癌、致突变性。目前环境污染中最主要的三致中的致突变、致畸、致癌的根本常常是致突变的结果。 微核是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在1/31/20，染色与主核一样或稍浅，一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体。在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块，当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。微核是常用的遗传毒理指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界因子的剂量呈正比。因此，可用微核出现的频率来评价环境诱发因子。蚕豆根尖细胞微核试验(MCNT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核监测方法。它是一种灵敏度高，操作技术简单的用于监测环境致突变的诱变活性对人体和其他生物体遗传物质产生危害的技术。本实验用蚕豆做实验材料，采用MCNT技术，来检测洗衣粉、洗发露的毒性状况。1、材料与方法1.1材料1.1.1 实验材料：蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）立白洗衣粉 奇强洗衣粉 超能洗衣粉 多芬洗发露 沙宣洗发露1.1.2 实验药品：立白洗衣粉水 奇强洗衣粉水 超能洗衣粉水 多芬洗发露 沙宣洗发露 力士洗发露 卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1） Gmiesa染液 自来水1.2.3实验用具：显微镜、试管、蚕豆培养盆、纱布、毛巾、三角瓶、载玻片、盖玻片、小刀、恒温水浴锅、镊子1.2、实验方法 1.2 方法1.2.1 浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中，在25下浸泡24小时，在此期间至少换水两次，所换水应25预温。种子吸胀后，用毛巾松散包裹置洗脸盆中，保持温度，在25温箱中催芽1224小时，待初生根长出23mm，再取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的洗脸盆中，25继续催芽，经约36-48小时，大部分初生根长至12cm左右，根毛育良好，此时可用来进行实验。1.2.2 检测因子处理根尖：选取初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸没根尖即可。1.2.3 根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水浸洗三次，每次23分钟。洗净后再置入辅有混润滤纸的瓷盘中，25下再恢复培养2224h。1.2.4 固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用甲醇：冰醋酸（3：1）液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入70%的乙醇溶液中置4冰箱中保存备用。1.2.5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸净蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，60下水浴酸解15分钟，幼根软化即可。1.2.6 染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次12分钟。截下12mm左右长的根尖，滴加Gmiesa染液，染色1015分钟,再用蒸馏水冲洗试材。1.2.7 压片：将取好的材料放在载玻片上，盖上盖玻片，并用镊子轻轻的压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。 1.2.8 镜检：细胞核呈紫红色，背景基本为无色，然后在视眼内统计微核数目。 2.结果与分析2.1 结果蚕豆根尖微核率和污染指数的统计检测细胞数微核细胞数微核率污染指数立白洗衣粉20002814.05.6奇强洗衣粉20002211.04.4超能洗衣粉20003015.06.0多芬洗发水200084.01.6沙宣洗发水2000115.52.2力士洗发露200052.51.02.2 分析 通过分析实验结果，整体分析洗发露的伤害要比洗衣粉的伤害小。在洗发露中，力士洗发露的微核率最小，伤害最小，污染程度小，比较好。而海飞丝洗发露的危害比较大。在洗衣粉中，汰渍洗衣粉的微核率最大，伤害最大，其次是立白洗衣粉、奇强洗衣粉。 误差分析：经查资料可得不同长度的蚕豆根尖对于微核率有较大的影响，虽然在选材时选用了颗粒饱满、体积质量相近的蚕豆，但在同样时间的成长中却不可避免的造成根尖长度不可能绝对相同，因此对于微核率有相对的影响。 初生根长度与微核率的关系编号 NO.初生根长度3个根尖的微核率平均值10.450.551.421.731.141.430.1720.951.053.113.773.273.380.2031.451.5576.896.036.640.2941.952.057.197.878.117.720.2852.452.557.997.958.098.010.1462.953.0510.019.9411.3210.420.153.讨论 3.1 实验材料的选择本实验选取的材料是蚕豆，蚕豆主要有以下几点优势：（1）可靠性和灵敏性高，蚕豆根尖细胞DNA含量高，染色体数目少且大，本底微核率不高，细胞周期中大部分时间处于诱变剂敏感的时期；（2）蚕豆根尖微核实验的本底较低，这对于一种致突变性检测是十分重要的；（3）它的检测物谱较广；（4）在方法学上，它也特别适合环境致突变性检测，与其他动物实验或细胞学实验相比，它还具有个体小及不受地理、气候条件限制等优点。总之，利用蚕豆根尖微核技术检测水质污染有材料易得、灵敏度高、可靠性强、技术操作简单、实验周期短、精确度也比较高等优点，因而对于遗传毒性检测有显而易见的实用性。3.2 洗涤剂的选择由不同品牌的洗涤剂的微核率可得，不同的洗涤剂对人们的一向是不同的，我们应该选择对自己影响小的。洗衣粉是人们生活中洗衣服的必须品，它的作用就是帮助人们花更少的精力，洗净衣服上的污渍。所以选购洗衣粉建议选择那些知名的牌子，去圬效果会好些，雕牌，汰渍Tide，奥妙OMO，立白，奇强这些牌子的洗衣粉就都是比较不错的。洗发露也是人们生活中必备的，它的作用是帮助人们洗干净头发，但不同的洗发露对头发的损伤是不同的，而且功能有所差异，人们选择的时候应根据自身的实际情况选择合适的洗发露。参考文献：1陶少武。初生根长度对蚕豆根尖细胞微核率影响的研究广西植物 2005,25（5）：4474482 陈光荣，金波，李明，等.蚕豆叶尖细胞微核测定（MCNT）及其监测大气污染的研究J.中国环境科学，1988，83 肖勇，杨朝晖，曾光明，等.室内空气高浓度苯系物的蚕豆根尖遗传毒性研究J.环境科学研究，2006，19（2）：31-34 4 朱斌，卢慧敏，吴建华.蚕豆根尖细胞微核测定技术监测室内空气污染的探讨J.上海预防医学杂志，2001，1 3