TAE概述.doc

一、电泳缓冲液概述电泳缓冲液是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。作用缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH-4e-2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H+4e-2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。特点二、TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。 三、50TAE Buffer 配制方法： 1。称量Tris 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中； 2。向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀； 3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解； 4。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。 使用时稀释50倍 即1TAE Buffer 10TBE Buffer配制方法： 1。称量Tris 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L烧杯中； 2。加入约800ml去离子水，搅拌均匀； 3。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。 使用时稀释10倍 即1TBE Buffer四、电泳缓冲液50TAE ,5TBE中的50、5是什么意思?在生物学实验中，一般来说：“工作液”（working solution）浓度是1（如果有特殊说明需要X，那就依说明为准）大部分试剂（非现配现用），我们会配制高浓度的“母液”（stock solution），母液浓度是工作液的50倍，即50，5倍，即5五、TAE电泳缓冲液有毒吗？TAE是由试剂：Tris（121.14）、乙酸（60.05）、EDTA（292.25）、EDTA-Na2（336.21） 、Na2EDTA2H2O （372.21）组成的，毒性不大。不喝它就行。操作时记得带手套。六、Tris中文品名:：三羟甲基氨基甲烷； 氨基丁三醇；缓血酸胺；2-氨基-2-（羟甲基）-1,3-丙二醇 英文品名： Tris; Tris(Hydroxymethyl)aminomethane 英文别名： 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol tris 结构式THAM; Tris base; Trometamol 通用CAS ：77-86-1 EINECS号：201-064-4 产品纯度：100%(USP药典级) / 99.9%(实验室技术级) 产品级别：USP药典级,符合USP/EP/cGMP对药物赋形剂的要求 分 子 式： C4H11NO3 相对分子量：121.14 熔点：167-172 沸点：219-220º(10mmHg或1.3kPa)溶水性：550G/L(25ºC) 使用用途: 生物制药,体外诊断,个人护理及化妆品原料等 保存温度: 常温密封避光保存 性质描述：白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯、不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性。缓冲特性Tris为弱碱，在25下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。 衍生缓冲液由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。应用Tris常用作生物缓冲液，常配成pH值为6.8，7.4，8.0，8.8。其pH值随温度变化很大。一般来说，温度每升高一度，PH值下降0.03。 1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是SDS-PAGE最常用的试剂。 而由Tris配成的TAE，TBE等是DNA电泳最常用的试剂，TE（pH8.0）主要用于溶解DNA。（TE为 Tris加EDTA合称。） Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。七、EDTA 是一种重要的络合剂。EDTA用途很广，可用作彩