高中生物 专题五 课题2 多聚酶链式反应扩增dna片段课件 新人教版.ppt

课题2 多聚酶链式反应扩增dna片段 生物体内的dna复制 细胞核 1 dna复制的场所是 2 参与dna复制的组成成分与反应条件 打开dna双链 提供dna复制的模板 续表 4种脱氧核苷酸 催化合成dna子链 使dna聚合酶能够从引物的3 端开始连接脱氧核苷酸 pcr扩增技术 1 概念 dna pcr技术是 的简称 是一种在 进行的迅速扩增dna的技术 它能够以极少量的 为模板在短时间内复制出上百万份 2 pcr反应过程 1 变性 2 复性 3 延伸 3 结果 两个引物 dna聚合酶只能特异性地复制在 之间的dna序列 使这段固定长度的序列呈指数扩增 多聚酶链式反应 体外 dna含量测定1 原理 利用dna在 的紫外线波段的吸 收峰曲线来测定相应含量 260nm 2 计算公式 dna含量 g ml 50 260nm读 数 稀释倍数 dna的体内复制与pcr扩增的区别与联系 pcr技术的原理及过程 1 pcr原理 pcr技术利用了dna的热变性原理 在80 100 的范围内 dna的双螺旋结构解体 双链分开 当温度缓慢降低时 两条彼此分离的dna链又会重新结合成双链 2 pcr的反应过程 1 变性 当温度上升到90 以上时 双链dna解旋为单 链 2 复性 温度下降为50 左右时 两种引物通过碱基互 补配对与两条单链dna结合 3 延伸 当温度上升至72 左右时 四种脱氧核苷酸在 dna聚合酶的作用下 合成新的dna链 3 pcr反应的条件 1 稳定的缓冲液环境 2 dna模板 3 分别与模板dna两条模板链相结合的引物 4 a t c g四种脱氧核苷酸 5 耐热的dna聚合酶 一般用taqdna聚合酶 6 能严格控制温度变化的温控设施 pcr扩增技术与dna体内复制的区别 例1 下列属于pcr扩增区别于dna体内复制的是 需要解旋酶 需要引物 常温常压下进行 以四 种脱氧核苷酸为原料 需要耐高温的taqdna聚合酶 边 解旋边复制 可以短时间得到大量拷贝 需要模板 a c b d 名师点拨 体内复制与pcr扩增既有区别又有联系 pcr体外扩增概念很明确 在体外 加热解旋 因此需要耐高温的taqdna聚合酶 它能以极少量的dna为模板 在几小时内复制出上百万份的dna 答案 c 配对练习1 真核生物细胞质中也有dna 例如叶绿体 线粒体等 关于细胞质dna复制不正确的是 a 需要解旋酶b 需要dna聚合酶c 两条链同时复制只有一个起点d 不是半保留复制解析 真核生物细胞质中dna复制需要解旋酶 dna聚合酶 两条链同时复制只有一个起点 是半保留复制 答案 d pcr扩增的条件 例2 pcr扩增包括三个环节 变性 复性 退火 延伸 这三步的温度依次是 a 94 55 72 b 72 55 94 c 55 94 72 d 80 60 72 名师点拨 pcr扩增的原理就是利用dna耐高温的特性 使dna在94 左右双链解螺旋 然后在低温 37 55 的情况下 两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链dna模板结合 形成部分双链 在taqdna聚合酶的最适温度 72 下 以引物3 端为合成的起点 以单核苷酸为原料 沿模板从子链的5 3 方向延伸 合成dna新链 答案 a 配对练习2 在下面哪个温度范围内 dna双螺旋结构 解