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第一章微生物技术 第一章微生物技术 第1节培养基对微生物的选择作用 学习导航1 学会培养基的研制与灭菌 2 探究培养基对微生物的选择作用 一 培养基的制备和灭菌1 培养基的概念人工配制的适合微生物 或 的营养基质 2 培养基的作用培养 分离 和保存各种微生物 3 培养基的种类 生长繁殖 积累代谢产物 鉴定 液体培养基 碳源 氮源 5 培养基的制作流程称量 溶化 分装 加塞和包扎 摆斜面及倒平板 6 对培养基最常用的灭菌方法 高压蒸汽灭菌 调ph 灭菌 1 选择培养基要人为控制培养基的ph 碳源 氮源 渗透压等条件 2 选择培养基配制的目的是有利于微生物生长 3 灭菌的原因是及时杀灭培养基中的部分微生物 4 高压蒸汽灭菌是利用升高压力杀灭微生物 判一判 二 培养基对微生物的选择作用1 菌落 1 概念 微生物通过某种方法接种到适于生长的 培养基表面上 在适宜的温度下培养一段时间后 单个的 或 就可以生长繁殖成一个个肉眼可见的 2 特征 细菌菌落 湿润 黏稠 易用接种环挑起 菌落各部位颜色一致 固体 菌体 孢子 细胞群体 酵母菌菌落 与细菌的相似 但比细菌菌落 颜色比较 霉菌菌落 较疏松 常呈绒毛状 或蜘蛛网状 一般比细菌菌落大几倍到几十倍 2 不同微生物生长所需条件 1 细菌 氮源 c n 4 1 ph ph 7 2 7 6 常采用 培养基 大而厚 单调 絮状 高 中性或微 碱性 牛肉膏蛋白胨 2 酵母菌和霉菌 含量高 c n 16 1 ph偏酸性 ph 5 6 常采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基 简称pda 3 无菌条件实验用的材料 器皿 培养基 移液管和滴管等都要经过灭菌后才可使用 实验室最常用的灭菌方法是 处理 碳源 高温 对乳酸菌的培养除了满足上述细菌的培养条件外 还特别注意什么条件 提示 控制无氧条件 乳酸菌为厌氧呼吸型 想一想 1 培养基的类型 1 按物理状态分 2 按培养基功能分 选择培养基 允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 如无氮培养基可选择培养固氮微生物 鉴别培养基 利用微生物或其代谢产物与培养基某些物质发生特定的颜色反应 以鉴别不同微生物 2 培养基成分中碳源和氮源的比较 3 培养基配制的原则 1 目的要明确 根据微生物的种类 培养目的等 如培养基可由简单的无机物组成 生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质 而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质 2 营养要协调 注意各种营养物质的浓度和比例 3 ph要适宜 各种微生物适宜生长的ph范围不同 如细菌 放线菌和真菌的最适ph分别为 7 2 7 6 7 5 8 5和5 0 6 0 4 三种常用灭菌方法的比较 5 倒平板的注意事项 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉刚不烫手时 就可以进行倒平板了 2 倒平板前 要将装有培养基的锥形瓶瓶口通过火焰灼烧 以防止瓶口的微生物污染培养基 3 平板冷凝后 要将平板倒置 4 倒平板过程中 如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 最好不要继续用这个平板培养微生物 某小组同学为了调查湖水中细菌的情况而进行了实验 实验包括制备培养基 灭菌 接种及培养 菌落观察 请回答与此实验相关的问题 1 培养基中含有蛋白胨 淀粉 分别为细菌培养提供了 和 除此之外 培养基还必须含有的基本成分是 和 2 对培养基进行灭菌 常采用的方法是 3 为了尽快观察到细菌培养的实验结果 应将接种了湖水样品的平板置于 中培养 培养的温度设定在37 要使该实验所得的结果可靠 还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验 4 培养20小时后 观察到平板上有形态和颜色不同的菌落 这说明湖水样品中有 种细菌 思路点拨 解答本题的关键有以下几点 明确培养基的配制原则 掌握无菌技术的操作 明确菌落的特征与应用 解析 检测湖水中细菌的情况时 应设置对照 才能得出可靠的结果 答案 1 氮源碳源无机盐水 2 高压蒸汽灭菌 3 恒温箱无菌水 4 多 1 上述 2 中对培养基灭菌的目的是什么 2 上述 3 中的对照组实验出现什么结果才能使 4 结果可靠 提示 1 及时杀灭培养基中的微生物 同时防止微生物大量繁殖造成培养基成分的改变 2 培养20小时后 对照组的平板上无菌落生成 互动探究 1 概念 在微生物学中 将允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 称做选择培养基 2 原理 根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学 物理因素的抗性不同而制备培养基 3 方法 1 在培养基中加入某种化学物质 例如 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌 2 改变培养基中的营养成分 例如 缺乏氮源时可以分离固氮微生物 石油作为唯一碳源时 可以分离出能消除石油污染的微生物 3 改变微生物的培养条件 例如 将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物 特别提醒 1 选择培养基能使混合菌株中的劣势菌株成为优势菌株 提高该菌的筛选率 2 原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长 但实际上 微生物的培养是一个非常复杂的问题 有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖 因此能在选择培养基上生长的微生物不一定是所需的微生物 还需做进一步的验证 2012 贵阳一中高二检测 澳大利亚学者曾从胃活检组织中分离出幽门螺杆菌 请据相关资料回答下列问题 图中为半固体培养基 1 上图4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基 琼脂含量3 5g l 中的生长状态 其中 号试管代表幽门螺杆菌的生长状态 由图判断 该菌在 条件下不能生长 产甲烷细菌的生长状态最可能由试管 代表 2 下表是某培养基的配方 将幽门螺杆菌接种到ph适宜的该培养基中 置于37 下培养一段时间后 在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时 主要原因是 3 据 2 中培养基的用途判断 该培养基属于 培养基 解析 1 幽门螺杆菌生活在半固体培养基的中部 说明它不能生活在氧气浓度过高或过低的地方 产甲烷细菌为厌氧型细菌 应生活在半固体培养基的底部 2 培养微生物的培养基一般含有水 无机盐 碳源 氮源和生长因子 此外还应满足微生物生长对ph 氧气等的需求 该培养基中缺乏氮源 幽门螺杆菌不能正常生活 数量会减少 3 该培养基可从众多微生物中分离所需要的微生物 如固氮菌等 因此该培养基属于选择培养基 答案 1 氧气浓度过高或过低 2 少缺少氮源 缺少氮源和生长因子 3 选择 用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是 a 未接种的选择培养基b 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基c 接种了的牛肉膏蛋白胨培养基d 接种了的选择培养基 变式训练 解析 选c 将菌液稀释相同的倍数 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目 因此 牛肉膏蛋白胨培养基作为对照
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