药品生产企业实验室间比对报告书.doc

附件2：药品生产企业实验室间比对计划高效液相色谱法测定药品含量结果报告二O一0年八月目 录一前言二本次计划的特点1目的和意义2参加实验室3计划测试项目和要求三统计分析的设计及结果评价原则四统计处理结果及结果评价五技术分析和建议六附件附件1. 实验室检测结果和统计处理附件2. 实验室间Z比分数柱状图附件3. 样品制备和均匀性检验附件4. 相关文件（被测物品接收状态确认表和作业指导书）附件5. 统计程序说明附件6. 参考文献北京市药品生产企业实验室间比对计划高效液相色谱法测定药品含量结果报告一. 前言为考查北京市药品生产企业检验工作水平，进一步促进生产企业提高检验工作质量，北京市药品监督管理局于2010年度组织北京市药品生产企业开展此次“高效液相色谱法测定药品含量”实验室间比对活动。本次实验室间比对计划由北京市药品检验所作为主导实验室。主要负责此次比对计划方案的制定并组织实施，发放比对样品和作业指导书，负责对各实验室的检测结果进行汇总、分析。本报告是对“高效液相色谱法测定药品含量”实验室间比对计划结果的总结，由北京市药品检验所起草并组织专家组负责审核，由北京市药品监督管理局批准发布。二. 本次计划的特点1.目的和意义高效液相色谱法是中国药典收载的用于药品质量检测的常用分析方法。此次实验室间比对计划的目的是为了评价参加实验室采用高效液相色谱法进行药品检测的技术水平和能力，更重要的是便于实验室发现、分析并解决检验工作中存在的问题，促进各实验室进一步提高检测技术和加强实验室管理，尤其是检测结果不好的实验室，更要寻找原因，采取措施，保证日常检测结果的准确、可靠。2.参加实验室主导实验室向报名参加本次实验室间比对计划的150家单位（实验室）发放了样品。有9家实验室因各种原因条件不具备无法开展试验，其余的141个实验室均报告了检测结果。3.计划测试项目和要求3.1 本次实验室间比对计划采用高效液相色谱法测定样品中氧氟沙星的含量，推荐的检测方法为中国药典2005年版二部收载的测定方法，要求实验室按照日常检测的规定和流程进行样品的检测。3.2主导实验室在向每个参加实验室发送检测样品的同时，附有被测物品接收状态确认表、作业指导书、检测结果报告单，要求各参加实验室根据作业指导书进行检测，并在规定期限内上报检测结果。4.样品情况描述4.1 本次提供的样品是“氧氟沙星氯化钠注射液”，为淡黄色澄明液体。在规定条件下分装于玻璃瓶中，轧盖密封，每瓶装量100ml，分别标注相应的样品编号。对分装后的样品进行了均匀性检验，结果显示样品的均匀性符合要求。相关数据见附件3。4.2 每个参加实验室收到1瓶检测样品。5. 保密性要求为了保护参加实验室的权益，每个参加实验室被随机分配一个代码，代码号为2010。本报告统计图表中的实验室均以代码表示，不显现各实验室名称。三. 统计分析的设计及结果评价原则本次实验室间比对计划以每个实验室报告的检测结果为基础，采用稳健统计技术进行处理，用中位值估计样本总体均值，以标准四分位数间距（NIQR）代替标准偏差，以Z比分数（Z值）来衡量一个实验室的检测结果在一组结果中的相对离散程度。中位值和标准四分位数间距是数据集中和分散的量度，因为它们是稳健的统计量，即它们不受数据中离群值的影响。对本次能力验证计划实验室的检测结果，按下式计算Z值：Xi中位值（X）Z = NIQR 式中： Xi ：为某实验室的测定结果本次实验室间比对计划涉及的统计量有结果数、中位值、标准化四分位数间距（NIQR ）、稳健的变异系数（CV）、最大值、最小值和极差等。本次比对计划以Z比分数评价实验室的结果，即：若Z2，检测结果为满意结果；若2Z3，检测结果为有问题结果，应引起实验室的注意；若Z3，检测结果为不满意结果或离群值。为了清晰表示各实验室参加本次实验室间比对计划的结果，将Z值按大小顺序排列作柱状图（附件2），每一个柱条标有该实验室的代码。从该柱状图上，每一个实验室很容易将其结果与其他参加实验室进行比较，了解其结果在本次计划中所处的水平。四统计处理结果及结果评价1.检测结果统计量 表1是检测结果统计量汇总。 表1 检测结果统计量汇总表检测项目结果数中位值（mg/ml）标准四分位数间距（mg/ml）稳健变异系数（%）最大值（mg/ml）最小值（mg/ml）极差 （mg/ml）氧氟沙星含量1411.950.02971.522.190.981.212.检测结果情况综述参加本次比对计划的实验室共141家。有115家实验室的检测结果为满意结果，占总数的81.6%；有4家实验室的检测结果为有问题结果，占总数的2.8%；有22家实验室的结果为不满意结果，占总数的15.6%。表2 有问题结果及不满意结果实验室代码汇总表检测项目结果情况实验室代码氧氟沙星含量测定有问题结果2010-048，2010-079，2010-129，2010-135不满意结果2010-004，2010-006，2010-012，2010-013，2010-024，2010-0432010-052，2010-053，2010-054，2010-068，2010-074，2010-0762010-077，2010-080，2010-096，2010-109，2010-115，2010-1252010-138，2010-139，2010-142，2010-148141家实验室检测结果统计参数见附件1。五技术分析和建议本次实验室间比对计划绝大多数实验室均采用了作业指导书推荐的中国药典2005年版二部“氧氟沙星氯化钠注射液”含量测定项下的方法，采用高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录D）来测定氧氟沙星的含量。多数实验室按照作业指导书的要求提供了检测过程的原始记录，也有一些实验室反馈的信息不足，例如有的实验室没有提供系统适用性试验、对照品溶液的配制及有关实验条件等信息，因此对于离群数据，我们仅能从总体上做有限的技术分析，本次比对计划的技术要点和影响检测结果的主要原因有以下几个方面： 1.对照品的影响 各实验室均使用了同一来源（中国药品生物制品检定所）、相同批号的氧氟沙星对照品，对照品为棕色玻璃管熔封包装，已标注含量，使用前无需干燥。在实验过程中取用对照品时，应开封后尽快称量，若对照品在空气中暴露时间过长或反复取用，可能使对照品产生吸潮等现象，给检测结果造成影响。另外，对照品的称量偏少，易引入较大的不确定度。如果称量所用天平的精度不够或天平未经校准或检验人员操作的原因，都可能造成实验结果的误差。另外，本次比对试验中使用的氧氟沙星对照品含量（纯度）为98.8%，因此，应将98.8%代入计算，折算出对照品溶液的实际浓度，否则会导致样品的含量测定结果偏高。2.色谱条件的影响 按照中国药典规定的方法，实验中所用的流动相组成为醋酸铵高氯酸钠溶液（用磷酸调节pH值至2.2）-乙腈（85:15），若流动相的pH值调节不准，可影响到样品的分离和检测。本次比对试验中实验室使用的色谱柱长度有15cm和25cm两种规格，有的实验室也通过提高柱温、调节流动相中有机溶剂的比例等方式来提高分离度和理论板数。个别实验室没有采用药典规定的色谱条件，改变了流动相的组成和pH值，氧氟沙星峰的保留时间只有1.9分钟，理论板数也没有达到要求，导致检测结果的偏离。本次比对试验中方法规定的系统适用性试验，采用将一定浓度的氧氟沙星溶液置紫外光灯（254nm）下照射4小时以上，在相同的色谱条件下考查紧邻氧氟沙星峰前的杂质峰与氧氟沙星峰的分离度。此试验必须有足够的照射光强度和照射时间，否则杂质峰的响应值太小不易检出。此外，柱效和色谱峰的对称性也会对检测结果产生影响，如果理论板数低于5000，或者峰形不对称(例如色谱峰前倾)也会影响氧氟沙星峰前的杂质峰与主峰的分离；拖尾因子（T）偏离过大可能导致峰面积积分不准确，影响定量结果的准确度。3.仪器的影响 本次比对试验中所使用的仪器包括分析电子天平、酸度计、高效液相色谱仪和容量器具，这些仪器的测量范围是否适用，仪器的精度和准确度是否符合本次试验的要求，这些因素都将影响实验结果的准确性。4.人员操作的影响 检测实验中涉及精密称量、溶液的精密量取和定容等操作过程，不仅受到所用天平和容量仪器准确性的影响，也与实验人员操作的熟练程度有关，如果实验人员在溶液制备过程中未注意操作细节，有可能造成结果的偏差。由于离群值产生的原因多种多样，在此无法一一罗列，希望数据离群的实验室结合检验过程，找出离群的可能原因。六附件附件1. 实验室检测结果和统计处理附件2. 实验室间Z比分数柱状图附件3. 样品制备和均匀性检验附件4. 相关文件（被测物品接收状态确认表和作业指导书）附件5. 统计程序说明附件6. 参考文献 北京市药品监督管理局 北京市药品检验所 二O一0年八月附件1： 实验室检测结果和统计处理实验室代码氧氟沙星含量（mg/ml）Z比分数2010-0022.012.002010-0031.950.002010-0042.063.712010-0051.93-0.672010-0061.86-3.042010-0071.981.012010-0092.001.692010-0101.981.012010-0111.991.352010-0121.77-6.072010-0131.86-3.042010-0141.960.342010-0151.991.352010-0162.001.692010-0171.960.342010-0181.94-0.342010-0191.94-0.342010-0201.94-0.342010-0211.991.352010-0221.991.352010-0231.950.002010-0242.043.042010-0251.960.342010-0261.960.342010-0271.970.672010-0281.960.342010-0291.960.342010-0301.93-0.672010-0311.92-1.012010-0331.92-1.012010-0341.94-0.342010-0351.960.342010-0361.94-0.342010-0371.950.002010-0381.94-0.342010-0392.012.002010-0401.950.002010-0411.981.012010-0421.960.342010-0430.98-32.712010-0441.94-0.342010-0451.92-1.012010-0461.950.002010-0471.981.012010-0481.87-2.70*2010-0491.981.012010-0501.970.672010-0511.950.002010-0521.81-4.722010-0531.77-6.072010-0542.043.042010-0551.970.672010-0561.970.672010-0571.960.342010-0581.94-0.342010-0591.950.002010-0601.94-0.342010-061 2.00 #1.692010-0621.94-0.342010-0631.950.002010-0641.960.342010-0651.960.342010-0661.94-0.342010-0671.960.342010-0682.043.042010-0691.970.672010-0701.960.342010-0712.001.692010-0721.91-1.352010-0731.960.342010-0742.167.082010-0751.950.002010-0762.063.712010-0772.084.382010-0781.960.342010-0792.022.36*2010-0802.198.092010-0811.89-2.002010-0821.90-1.692010-0831.94-0.342010-0841.970.672010-0851.970.672010-0861.950.002010-0871.970.672010-0881.981.012010-0891.950.002010-0901.970.672010-0921.950.002010-0931.94-0.342010-0941.960.342010-0951.970.672010-0961.86-3.042010-0971.991.352010-1001.94-0.342010-1011.960.342010-1021.950.002010-103 2.00 #1.692010-1041.950.002010-1051.92-1.012010-1071.960.342010-1081.981.012010-1092.156.742010-1101.93-0.672010-1111.960.342010-1121.92-1.012010-1131.94-0.342010-1142.001.692010-1151.86-3.042010-1161.94-0.342010-1171.960.342010-1191.981.012010-1201.970.672010-1211.92-1.012010-1221.94-0.342010-1231.950.002010-1241.92-1.012010-1252.074.052010-1261.950.002010-1271.94-0.342010-1281.90-1.692010-1292.022.36*2010-1302.001.692010-1311.93-0.672010-1321.94-0.342010-1331.90-1.692010-1341.93-0.672010-1352.022.36*2010-1361.92-1.012010-1371.960.342010-1382.105.062010-1392.074.052010-1401.92-1.012010-1421.86-3.042010-1431.94-0.342010-1441.981.012010-1451.94-0.342010-1461.950.002010-1471.94-0.342010-1481.85-3.372010-1491.90-1.692010-1501.950.00结果数141中位值(mg/ml)1.95NIQR(mg/ml)0.0297稳健CV(%)1.52极大值(mg/ml)2.19极小值(mg/ml)0.98极差(mg/ml)1.21注：1. 标“”的为不满意结果； 标“*”的为有问题结果。2. 标注“#” 的两个实验室报告的检测结果没有将样品溶液稀释倍数代入计算。为了不影响整体数据的统计结果，根据实验室提供的原始记录，按样品稀释倍数对检测结果进行换算。附件2： 实验室间Z比分数柱状图 附件3： 样品制备和均匀性检验 1.样品制备情况说明本次实验室间比对计划采用单一样品设计，样品为北京双鹤药业股份有限公司生产的“氧氟沙星氯化钠注射液”，在规定条件下采用稳定的工艺制备，自动化流水线灌装于输液用玻璃瓶中，轧铝盖密封，每瓶装量100ml。取300瓶作为本次比对计划的样品。2.样品均匀性检验报告随机抽取本次实验室间比对计划样品12瓶，按作业指导书推荐的中国药典2005年版二部方法测定样品中氧氟沙星的含量，每瓶在重复条件下检测2次。氧氟沙星含量测定结果及数据分析见表1、表2。表1 氧氟沙星含量测定结果 测试次数样品号测定结果（mg/ml）12平均值11.921.911.91521.921.911.91531.911.901.90541.921.921.92051.921.911.91561.911.921.91571.921.921.92081.911.911.91091.911.901.905101.901.911.905111.911.911.910121.911.921.915总平均值（mg/ml）1.913表2 方差分析结果方差来源自由度平方和均方FF0.05(11,12)样品间110.0006500.00005911.772.72样品内120.0004000.0000333F临界值F0.05(11,12)2.72，计算的F值为1.77。根据样品均匀性分析评价中的单因子方差分析公式，F值小于F临界值，表明在0.05显著性水平时，样品是均匀的。3.样品稳定性情况说明“氧氟沙星氯化钠注射液”为中国药典收载的品种，查阅相关资料，氧氟沙星稳定性良好，其原料及制剂经过加速试验6个月和长期试验24个月，各项指标无明显变化，该产品的有效期为24个月。本次比对计划从发送样品到回收结果报告仅有一个多月的时间，在这段时间内样品的稳定性能满足要求。附件4： 相关文件附件4-1 被测物品接收状态确认表能力验证计划名称高效液相色谱法测定药品含量组织机构北京市药品监督管理局发送机构北京市药品检验所电话/传真01083228397/01083228397联系人苏芳 周荔 发送日期2010.6.3发送人签名发送状态完好 不完好接收实验室名称：联系地址：邮政编码：联系电话/传真联系人： 接收人签名：接收时，被测物品状态是否良好： 是 否如需要，对接收状态详细说明：备注：附件4-2 高效液相色谱法测定药品含量实验室间比对作业指导书欢迎参加“高效液相色谱法测定药品含量”实验室间比对计划。贵实验室的代码为 2010 。请各参加实验室认真阅读该作业指导书。1. 提供给各参加实验室测试样品1瓶，同时提供作业指导书、被测物品接收状态确认表、结果报告单各1份。2. 收到样品后，请根据样品状态填写“被测物品接收状态确认表”，立即传真给项目联系人。3. 本次能力验证计划提供的样品是氧氟沙星氯化钠注射液，为淡黄绿色澄明液体，采用玻璃瓶轧盖包装，每瓶装量约100ml。贵实验室的样品编号为： 。 实验室收到样品后，请遮光，密闭保存。4. 样品打开后应尽快开展检测工作。5. 检测方法按中国药典2005年版二部“氧氟沙星氯化钠注射液”含量测定项下“氧氟沙星”的检测方法操作。6. 检测结果以每1ml中含氧氟沙星的mg数表示，保留小数点后两位，并将两份测定的结果、平均值等相关信息填入“结果报告单”。7. 参加本次比对计划的实验室请按日常检测的规定和流程来处理实验室间比对样品。8. 每个实验室均有代码，在整个实验室间比对计划实施过程中均使用该代码，报告结果时必须使用代码。9. 请于2010年6月30日前将结果报告单原件、原始记录及相关图谱复印件交至项目联系人。相关记录、图谱及电子文件请保存备查。10. 项目联系人：苏芳 周荔 单位：北京市药品检验所地址：北京市西城区新街口水车胡同13号邮政编码：100035电话：01083228397 传真：01083228397附件4-3 高效液相色谱法测定药品含量结果报告单实验室名称： 代码： 2010 样品编号药品含量（1）（2）平均值相关信息检测方法仪器品牌及型号对照品来源及批号其他需要说明的情况(如有)备注：1. 检测结果以每1ml中含氧氟沙星的mg数表示，保留小数点后2位。并将各次测定的结果、平均值填入结果报告单。2.请于2010年6月30日前，将结果报告单原件及相关原始记录复印件邮寄到项目联系人（时间以当地邮戳为准），逾期将不予受理。检测人员： 检测日期： 实验室负责人： （单位盖章）附件5： 统计程序说明1. 概 述在本次实验室间比对计划中，我们采用了稳健统计方法来处理检测结果和进行统计分析。稳健统计方法是一种不易受到异常值影响的统计方法。在通常采用的统计方法中，计算一组数据的平均值（mean）容易受到异常值影响，而在稳健统计方法中，是以中位值(median)代替平均值，以归一化IQR代替标准偏差。因此能准确反映出数据的统计特征。该统计方法采用Z比分数值(Z-Score)来评定参加实验室的检测能力，非常直观明了。当