鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究.doc

浙浙江江大大学学远远程程教教育育学学院院 本本科科生生毕毕业业论论文文 题 目 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 专 业 学习中心 姓 名 郑刚 学 号 指导教师 年 月 日 摘要 I 摘要摘要 本试验主要为鄞州区肉蛋鸡的禽流感免疫程序摸索合适的流程 肉鸡免疫 试验分 6 组 首免 5 10 13 15 25 日龄 第 6 组不免 不同日龄进行采血 监测抗体 发现免后 6 8d 开始产生抗体 25d 达到最高峰值 7log2 以上 二免 后 20 天抗体达到最高峰值 9 8log2 以上 蛋鸡免疫试验分 3 组 第 1 组监测蛋 鸡母源抗体 第 2 3 组首免分别为 25 和 15 日龄 二免为 165 和 50 日龄 第 3 组三免时间为 165 日龄 试验表明 第 3 组免疫后 29 天抗体滴度达到峰值 7 3log2 二免后 22 天达到最高峰值 10log2 三免后 32 天抗体达到最高峰值 10log2 直至 330 日龄时抗体滴度仍处于 8 7log2 的水平上 结论 肉鸡首免 10 15 日龄 二次免疫 40 50 日龄 蛋鸡首免为 15 日龄 二免为 50 日龄 三 免为 165 日龄较合适 关键词 关键词 鸡 禽流感 免疫 程序 目录 II 摘要摘要 I 一 前言一 前言 1 一 禽流感的危害 一 禽流感的危害 1 二 禽流感防控及鄞州区现状 二 禽流感防控及鄞州区现状 1 二 研究目的及内容二 研究目的及内容 2 一 研究目的 一 研究目的 2 二 研究内容 二 研究内容 2 三 材料与方法三 材料与方法 2 一 试验动物和疫苗的选择 一 试验动物和疫苗的选择 2 二 试验设计及管理 二 试验设计及管理 2 三 测定指标与方法 三 测定指标与方法 3 四 数据处理 四 数据处理 3 四 结果与分析四 结果与分析 3 一 肉鸡禽流感抗体平均滴度 一 肉鸡禽流感抗体平均滴度 3 二 蛋鸡禽流感抗体平均滴度 二 蛋鸡禽流感抗体平均滴度 5 五 讨论五 讨论 5 一 关于 一 关于 H5 保护性滴度保护性滴度 5 二 关于肉鸡母源抗体衰减情况和免疫时间 二 关于肉鸡母源抗体衰减情况和免疫时间 6 三 关于禽流感的综合防治 三 关于禽流感的综合防治 6 六 结论六 结论 7 参考文献参考文献 8 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 1 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 一 一 前言前言 一 禽流感的危害 一 禽流感的危害 禽流行性感冒 Avian lnfluenza AI 简称禽流感 是由 A 型流感病毒引起 的禽类烈性传染病 被世界动物卫生组织 OIE 列为 A 类动物传染病 禽流感 病毒 Avian Influenza virus AIV 属于正粘病毒科 Orthomy Xoviridae 流感 病毒属 根据核蛋白与基质蛋白的抗原性不同可分为 A B C 三型禽流感病毒 其中 A 型可感染人 禽 猪等 而 B 型和 C 型主要感染人 根据病原的不同 可分为高致病性禽流感病毒 HPAIV 和低致病性禽流感病毒 LPAIV 1 禽流感病毒引起的家禽和野生禽类感染的高度接触性传染病 可呈无症状 感染 不同程度的呼吸道症状 产蛋率下降 以至引起头冠和肉髯紫黑色 呼 吸困难 下痢 腺胃乳头和肌胃角膜下等器官组织广泛性出血 胰脏坏死 纤 维素性腹膜炎和 100 死亡率的急性败血症 2 由于野禽作为流感病毒天然贮毒 库的作用 以及已证实流感病毒可以由家禽直接感染人 引起人类的发病和死 亡 所以该病具有重要的公共卫生意义 3 我国的禽流感发生比较晚 发病情 况远较欧美等地区为轻 但危害和影响也十分巨大 自 2005 年以来 共有 11 个省区 23 个地市 30 个县 市区 55 个乡镇 112 个村发生 30 起高致病性 禽流感疫情 共有 15 82 万只禽发病 死亡 15 12 万只 扑杀家禽 2222 58 万 只 二 禽流感防控及鄞州区现状 二 禽流感防控及鄞州区现状 1 禽流感免疫程序 禽流感免疫程序 禽流感流行比较迅速 预防和控制的根本思路是要坚持以预防为主的防治 策略 1995 年 墨西哥禽流感的有效扑灭 正是借助长达 3 年的 8 亿 5 千羽的 禽流感灭活苗预防注射得以实现的 6 唐秀英等报道目前我国 H9 H5 H7 亚型禽 流感灭活疫苗已经研制成功 并取得了良好的免疫保护效果 7 禽流感疫苗的生产由国家严格的控制 目前只指定 3 5 个厂家生产 作为 防疫物资储备 禽流感疫苗在生产实践中使用效果的报道很少 国内学者大部 分报道多是实验室结果 罗开健等使用 H5N4 中等毒力毒株制成油苗免疫后 24 天抗体达到高峰 抗体滴度达到 9 01og2 以上 8 唐秀英等通过实验得出 4 8 周龄 SPF 鸡和 20 28 周龄蛋鸡免疫后 7 天产生免疫力 21 天达抗体高峰 抗体 值达 7 0 10 51og2 免疫后 180 天 抗体不低于 6 51og2 保护率仍可达 90 7 胡北侠等使用 H5N2 强毒株制成油苗免疫蛋雏鸡结果表明 疫苗免疫鸡群后第 8 周抗体达到高峰 81og2 第 16 周抗体降至 51og2 9 陈瑞爱 10 用新分离的一 株 H9 禽流感病毒制成油苗比以前毒株制成的疫苗抗体有显著提高 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 2 2 鄞州区禽流感免疫现状 鄞州区禽流感免疫现状 近年来 鄞州区家禽养殖业迅猛发展 2007 年家禽饲养量达到 500 多万只 虽然从 2006 年起 鄞州区实行畜牧环境整治 在禁养区 限养区大量养禽场被关 闭 养禽量每年呈递减趋势 但到 2011 年年饲养量仍能达到约 300 万只 随着 集约化养殖的发展 对外交流的频繁 养殖方式的转变等 新的家禽传染病不 断出现 而禽流感是近年来新发现的最为烈性的一种传染病 并且呈逐年扩散 上升趋势 来势凶 发病快 范围广 死亡率高 危害十分严重 不仅直接威 胁家禽业的健康发展 给养禽户带来巨大的经济损失 而且影响到宁波市进一 步对外开放 经济贸易和国民经济可持续发展 因此 研究禽流感免疫程序 控制和扑灭禽流感的发生和流行 意义深远重大 二 研究目的及内容二 研究目的及内容 一 研究目的 一 研究目的 我国现阶段饲养条件较差 国家疫病扑杀 补偿措施不太完善 出现禽流 感问题后容易造成流行扩散 养禽企业损失非常大 在规范养殖条件 加强检 疫监督的基础上 用灭活苗进行预防接种防治禽流感也是行之有效的办法 本 研究的目的是确立肉蛋鸡的禽流感免疫程序 并进行抗体跟踪监测 通过程序 化免疫 使种鸡群产生一定滴度的抗体 以抵御禽流感野毒的侵害 产蛋种鸡 能将一定滴度的母源抗体移行给肉仔鸡 使肉仔鸡的前期免受禽流感的感染 通 过抗体监测也可以了解禽流感疫苗的一些特点 为养禽企业合理使用疫苗提供 参考 二 研究内容 二 研究内容 1 监测不同免疫程序下肉鸡禽流感抗体滴度的变化 2 监测不同免疫程序下蛋鸡禽流感抗体滴度的变化 3 根据试验结果 得出合适的肉蛋鸡免疫程序 三 材料与方法三 材料与方法 一 试验动物和疫苗的选择 一 试验动物和疫苗的选择 选择鄞州区横街桃源鸡场提供海星三黄鸡苗鸡 600 羽作为肉鸡试验对象 选择鄞州区洞桥镇舒朝达蛋鸡场选择 1100 只作为蛋鸡试验对象 疫苗为哈尔滨 兽医研究所生产的 H5N2 灭活油佐剂苗 二 试验设计及管理 二 试验设计及管理 肉鸡试验分组饲养 600 羽 随即分为 6 组进行不同的免疫程序 首免 0 3ml 二免 0 5ml 饲养 120 天 免疫后每次每组随机抽取 10 羽进行采血抗 体测定 饲养管理方式均一致 分组及免疫方法见表 1 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 3 表 1 肉鸡试验组分组及免疫程序 第一组第二组第三组第四组第五组第六组 试验鸡 只 100100100100100100 首免日龄510131525 二免日龄25505040 蛋鸡试验在相同的饲养条件下 试验随机分三组进行 第一组 100 只种 鸡 30 日龄前不免疫 测 1 30 日龄苗鸡的母源抗体滴度 第二组 500 只种鸡 25 日龄首免 每羽鸡颈背部皮下注射禽流感疫苗 0 3ml 165 日龄二免 每羽 鸡胸肌注射禽流感疫苗 0 5ml 第三组 500 只种鸡 15 日龄首免 每羽鸡颈 背部皮下注射禽流感疫苗 0 3ml 50 日龄二免 每羽鸡胸肌注射禽流感疫苗 0 5ml 165 日龄三免 每羽鸡胸肌注射 0 5ml 第一组 分别于 1 5 10 15 20 25 30 日龄采血一次 第二组 第三组 分别于免疫后每 隔 7 30 天采血一次 每次采血均按照随机采样的原则采取 10 份血样 三 测定指标与方法 三 测定指标与方法 检测抗体 采用血凝和血凝抑制试验法 检测血清中抗体滴度 四 数据处理 四 数据处理 使用Excel进行试验数据处理 SPSS16 0软件进行单因子方差分析 差异显 著用LSD法进行比较 四 结果与分析四 结果与分析 一 肉鸡禽流感抗体平均滴度 一 肉鸡禽流感抗体平均滴度 表 2 不同免疫程序肉鸡群禽流感平均抗体滴度 单位 Log2 日龄第一组第二组第三组第四组第五组第六组 16 46 46 46 46 46 4 55 45 45 4 94 34 64 64 64 64 6 122 42 82 82 72 82 8 161 22 41 92 41 11 1 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 4 213 02 01 12 00 30 3 253 43 82 22 80 30 3 294 26 05 55 31 8 355 57 07 16 53 5 387 67 78 07 64 7 507 97 07 67 07 3 608 98 48 18 57 2 708 79 89 99 95 8 807 69 18 59 05 0 1005 26 36 06 23 8 1203 05 04 95 12 0 1 从上表中可以看出 第 1 组 5 日龄首免 由于母源抗体滴度较高 免后 11 天 16 日龄 HI 抗体滴度下降至 1 2Log2 免后 15 天抗体滴度仅为 3Log2 处 于临界值 免后 20 天才得到有效保护 与第 2 3 4 组 二次免疫组 免后 14 16 天抗体滴度达到 5 3Log2 相比 免疫保护率低 2 从母源抗体衰减规律来看 第 5 6 组在 25 日龄时 母源抗体在 0 3Log2 首免后 13 天抗体滴度已达到 4 7Log2 与第 1 组免后 20 天达到相同抗体水平 相比提早 7 天 与第 3 4 5 组相比提早 2 天 表明第 1 组 5 日龄 首免与较 高的母源抗体发生中和导致滴度下降 第 3 4 5 组 首免时虽也有母源抗体 但已下降至临界值 31og2 以下 相对抗体中和较少 滴度比第 1 组高 经二次 免疫后 最高峰值达到 9 8Log2 以上 比第 1 组最高峰值高出 0 9Log2 滴度 说明第 3 4 5 三组免疫程序好于第 1 组 3 监测结果显示 第 2 组经禽流感免疫后第 2 天 即 12 日龄时 抗体滴度与 其他未免疫组水平一致 第 3 4 5 组免疫后 6 8 天 抗体滴度比未免疫时反 而下降 但比未免疫第 5 6 组滴度要高 表明免疫后第 6 8 天已开始产生抗体 只不过与母源抗体中和所致 在免后 25 天抗体峰值达到 7 0Log2 以上 二免后 20 天抗体达到最高峰值 9 8Log2 以上 第 5 组 经过一次免疫的鸡群 免后 25 天达到最高峰值 7 3Log2 免后 55 天逐步开始衰退 至 120 日龄即免后 95 天 抗体水平下降到 2Log2 处于临界值以下 其最高峰值也达不到二次免疫后 9 8Log2 水平 说明鸡群二次免疫效果优于一次免疫 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 5 二 蛋鸡禽流感抗体平均滴度 二 蛋鸡禽流感抗体平均滴度 表 2 不同免疫程序蛋鸡群禽流感平均抗体滴度 单位 log2 日龄15101520253037445158 6572798693 第1组 8 5 7 3 6 54 23 21 90 第2组1 90 83 04 96 87 26 35 85 34 94 3 第3组4 23 83 85 36 27 36 17 5910101010 日龄 100 130 150 165 175 197 238 270 300 330 第1组 第2组 3 5 1 2004 89 69 38 78 27 3 第3组 9 8 8 6 7 97 5910109 99 58 7 1 鸡的母源抗体在 15 日龄时已处于临界值 为 4 2 log2 其后逐步减少 在 25 日龄时已降至临界值以下 达不到保护作用 直至为 0 故首免时间应在 15 日龄较为适宜 2 第二组 25 日龄首免 20 天后抗体缓慢上升 26 天后达到 6 8log2 33 天 58 日龄 后达到最高值 7 2log2 以后抗体下降 100 日龄时已降至临界值以 下 165 日龄二免时抗体为 0 长达两个月的时间内 鸡群无保护力 处于禽流 感的威胁之中 故二免时间应当提前 3 第三组 15 日龄首免 抗体先下降 到 30 日龄 首免后 15 天 抗体开始 上升 44 日龄抗体达到 7 3log2 后开始下降 50 日龄二免 二免后抗体迅速上 升 72 日龄时达到最高值 10log2 以后平稳且缓慢下降 165 日龄三免时 抗 体滴度仍维持在 7 5log2 三免后抗体水平又迅速上升 直至 330 日龄时抗体 滴度还处于较高的水平 8 7log2 五 讨论五 讨论 一 关于 一 关于 H5 保护性滴度保护性滴度 据报道 产蛋种鸡抗体滴度达到 41og2 以上时 强毒攻击就不会致死 育 成鸡抗体滴度 41og2 以上时也会有同样效果 本试验第五组发现 1 16 日龄肉雏 鸡母源抗体滴度衰减到 1 41og2 时 一只鸡致死 剖检试验发现 各脏器无肉 眼可见病变 仅肾脏轻度病变 两只 48 小时再次攻毒鸡仍能存活到第 9 天 说 明在抗体滴度小于 41og2 时 雏鸡攻毒仍可能存活 各组攻毒后还有两个共同 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 6 的变化 一是攻毒后各组抗体滴度都有不同程度的升高 二是攻毒后剖检鸡只 有不同程度的病理变化 表明毒株 AI H5N2 HI 抗体滴度达 51og2 以上时 可对 机体产生保护力 黄建文等研究表明毒株 AI H5N2 H1 抗体滴度达 51og2 以上时 可对机体产生保护力 11 与以上报道中结果一致 胡北侠 9 等在攻毒试验表明 鸡群 HI 抗体水平在 51og2 时即可以 100 保护 免受致死剂量 AIV 的攻击 但 HI 抗体水平在 6log2 时保护率却只有 95 这说明 HI 抗体水平只是影响免疫保 护率的一个重要因素 个体的健康状况也是不可忽视的因素 因此 疫苗免疫 接种是预防和控制禽流感的措施之一 它必须与完善的生物安全设施有机结合 才能避免禽流感的发生 罗开健 8 等也证明 H5 抗体滴度达到 51og2 以上时 用 强毒攻击可以产生 100 的保护力 保护力抗体滴度在 4 61og2 以上是比较准确 的 这一结果为现场制订禽流感免疫程序和选择疫苗提供了帮助 二 关于肉鸡母源抗体衰减情况和免疫时间 二 关于肉鸡母源抗体衰减情况和免疫时间 从第五 六组肉鸡禽流感抗体的衰减过程来看 1 9 日龄抗体滴度衰减很 慢 第 9 日龄后大幅度衰减 第 3 周己降至很低水平 4 周以后几乎检测不到 抗体 事实上肉鸡出生时 已吸收卵黄中的抗体进入血液 使血液中的抗体滴 度保持在较高的 6 4log2 水平上 第 2 周以后肉鸡的绝对增重很快 抗体的衰 减加快 吴庭才 12 等经试验证明雏鸡出壳后 其母源抗体效价的峰值在 7 日龄 时出现 比 1 日龄时高出 1 个倍比滴度 母源抗体即随雏鸡日龄的增加而迅速 下降 至 28 日龄时 已基本上检测不出 与本试验中第 1 日龄抗体水平最高 7 日龄略减少 之后逐渐递减有所差异 经免疫试验证明 首免 10 15 日龄 二免 40 50 日龄 平均抗体滴度普遍 优于其他组 整个饲养期内 80 的时间免疫抗体均超过讨论 1 中所述的保护性 滴度 国内肉鸡免疫时机的研究报道不多 主要因为 1 肉鸡的饲养期短 免疫 产生抗体的刚达到高峰就到了出栏期了 2 肉鸡接种疫苗可能会影响肉品质 量 国家规定出口肉鸡不能接种疫苗 3 肉鸡多是集约化饲养 鸡群数量大 逐个的个体免疫人工成本太高 4 肉鸡接种疫苗后可能难以区分疫苗抗体和野 毒感染抗体 在监控不力时带毒鸡只可能进入屠宰线造成食品安全问题 三 关于禽流感的综合防治 三 关于禽流感的综合防治 经现场观察在抗体滴度较高 71og2 以上 的情况下 存在应激因素时 禽 流感病毒仍然可以感鸡群染并且造成一定生产损失 只是损失程度比非免疫鸡 群小很多 故此认为采取综合防治措施 避免鸡群感染非常重要 做好禽流感 免疫只是综合防制措施中的重要组成部分 并不是防治工作作的全部 鄞州区除了做好免疫工作和全面开展免疫抗体监测与评估外 还采取行政 技术 经济 法律等综合防制措施 严格控制禽流感疫病的发生与传播 一是 建立 规范免疫档案 利用自主研发动物防疫指挥系统 掌握免疫动态 督促养 户及时注射禽流感疫苗 确保免疫密度和免疫质量 二是突出家禽产地检疫的 做法 加强家禽产地检疫和流通监管 从源头上控制疫病的发生与传播 三是健 鄞州区肉蛋鸡禽流感免疫程序探索研究 7 全疫情测报网络 重点加强乡 镇 村两级的疫情报告体系 每个村庄都落实 了乡 村动物疫情报告员 依托区级兽医实验室 面向全区养殖场户 常年进 行疫情监测 四是加快推进饲养方式转变 改变饲养分散 管理粗放 防疫条 件差 各种畜禽混养等落后的饲养管理方式 提高科学饲养管理水平 提倡标 准化 规模化养殖 五是开展技术培训 为尽快让养殖户掌握新的免疫程序 提高科学饲养和防病水平 举行形式多样的技术培训班 邀请有关专家办班 有的直接