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细胞工程 植物组织培养 植物体细胞杂交 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体的制备 核移植 植物细胞工程 动物细胞工程 理论基础 细胞的全能性 其他动物细胞技术的基础 一 植物细胞工程的基本技术 一 细胞的全能性1 概念 生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能 2 原因 受精卵 有丝分裂 体细胞 含全套遗传基因 3 全能性的程度 1 受精卵的全能性最高 4 形成不同组织 器官原因 基因选择性表达 5 条件 1 离体状态 2 提供营养物质 激素 4 体细胞 分化程度低的 分化程度高的分裂能力强的 分裂能力弱的 二 植物组织培养技术 重点理解 1 原理 植物细胞的全能性2 过程 外植体愈伤组织根 芽植物体 再分化 脱分化 避光 需光 植物激素 细胞分裂素 生长素 分化培养基 人工种子 胚状体 不定芽 顶芽和腋芽经人工薄膜包装而得 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 正在融合的原生质体 去细胞壁 再生细胞壁 植物组织培养 植物细胞融合 植物体细胞杂交过程 4 优势 与有性杂交方法比较 克服植物远缘杂交不亲和性 2 原理 细胞膜的流动性和细胞全能性 三 植物体细胞杂交 3 原理 物理方法 离心 振动 电激 化学方法 聚乙二醇 PEG 动物胚胎或幼龄动物的组织 器官 胰蛋白酶 10代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 二 动物细胞培养 1 过程 不易传下去 增殖逐渐缓慢以致停止 细胞的核型发生变化 使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内 以保持细胞正常的二倍体核型 常见现象 细胞贴壁 接触抑制 1 无菌 无毒的环境 2 营养 3 温度和PH 4 气体环境 添加一定量的抗生素 定期更换培养液 补充合成培养基中缺乏的物质 36 5 0 5度 PH为7 2 7 4 O2作用 进行呼吸 提供能量CO2作用 维持培养液的PH值 葡萄糖 氨基酸 无机盐 微量元素 动物血清 血浆等 有氧 95 空气和5 CO2 二 动物细胞培养 2 条件 比较 培养基特有成分 培养基性质 原理 比较项目 细胞的全能性 蔗糖 植物激素 固体培养基 植物组织培养 葡萄糖 动物血清 液体培养基 细胞增殖 动物细胞培养 1 原理 三 动物细胞核移植 2 分类 动物细胞核的全能性 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 供体细胞 供核 细胞培养 体细胞 卵母细胞 减 中期 供质 去核 无核卵母细胞 核移植 重组细胞 重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 新个体 分娩 激活 3 过程 完成细胞分裂和发育进程 含有促使体细胞细胞核表现全能性的物质和营养 四 动物细胞融合 1 原理 细胞膜的流动性 灭活的病毒 与植物细胞杂交不同点 离心 振动 电刺激 聚乙二醇 2 诱导融合的方法 细胞A 细胞B 杂交细胞 灭活的病毒 物理法化学法 仙台病毒等 3 过程 四 动物细胞融合 五 单克隆抗体制备过程 细胞融合 筛选 足够数量的 能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体 用特定的选择培养基筛选 克隆化培养 专一抗体检测 1 过程 1 过程 B淋巴细胞骨髓瘤细胞 诱导融合 B B细胞 B 瘤细胞 瘤 瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞 B 瘤细胞 克隆化培养 抗体检测 杂交瘤细胞 体外培养 单克隆抗体 八单克隆抗体 五 单克隆抗体制备 2 原理 3 单克隆抗体的优点 特异性强 灵敏度高 可大量制备 骨髓瘤细胞能无限增殖 一种B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 4 应用 作为诊断