高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段（预）（含解析）新人教版选修1.doc

专题5课题2多聚酶链式反应扩增dna片段（预）【学习目标】理解pcr的原理和反应过程【知识点梳理】一、基础知识(一）pcr原理1.胞内dna复制的基本体系参与组分在dna复制中的作用解旋酶打开dna双链dna母链提供dna复制的模板4种脱氧核苷酸合成子链的原料dna聚合酶催化合成dna子链引物使dna聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸2.dna双链方向与复制关系（1）dna的羟基“oh”末端称为3端，而磷酸基团的末端称为5端。（2）dna聚合酶只能从3 端延伸dna链，故dna复制需要引物。（3）dna合成总是从子链的5 端向3 端延伸。3.pcr原理（1）dna的热变性原理 变性：80100c的温度范围内， dna双螺旋结构解体，双链分开 复性： 温度缓慢降低后，两条彼此分离的dna链重新结合成双链 （2）耐高温的taq dna聚合酶 （3）缓冲液为pcr反应提供的物质 dna模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的dna聚合酶，同时通过控制温度使dna复制在体外反复进行。二、实验操作（一）设备及用具1.pcr仪一台能够自动调控温度的仪器2.微量离心管一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml3.微量移液器用于定量转移pcr配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次（二）实验操作步骤1.准备按照pcr反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实验桌上。2.移液用微量移液器按照pcr反应体系配方往微量离心管里面加入各种试剂。3.混合过程：盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。注意: a.离心管口的盖子一定盖严，防止实验中脱落或液体外溢。b.手指轻轻弹击微量离心管的管壁，目的是使反应液混合均匀。4.离心过程：将微量离心管放在离心机上,离心约10s。目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应效果。5.反应将离心管放入pcr仪上，设置好pcr仪的循环程序。【课前热身】1.有关pcr技术的说法，不正确的是（ ）apcr是一项在生物体外复制特定的dna片段的核酸合成技术bpcr技术的原理是dna双链复制c利用pcr技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列dpcr扩增中必须有解旋酶才能解开双链dna【答案】d【解析】a、pcr全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的dna片段的核酸合成技术，a正确；b、pcr技术以解开的双链作为模版，利用的原理是dna复制，b正确；c、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，c正确；d、双链dna模版在热作用下，氢键断裂，形成单链dna，可见该过程不需要解旋酶解开双链dna，d错误2.有关pcr技术的说法，不正确的是（ ）apcr是一项在生物体外复制特定的dna片段的核酸合成技术bpcr技术的原理是dna双链复制c利用pcr技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列dpcr扩增中必须有解旋酶才能解开双链dna【答案】d【解析】a、pcr全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的dna片段的核酸合成技术，a正确；b、pcr技术以解开的双链作为模版，利用的原理是dna复制，b正确；c、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，c正确；d、双链dna模版在热作用下，氢键断裂，形成单链dna，可见该过程不需要解旋酶解开双链dna，d错误3.引物的作用是（ ）a.打开d.na.双链 b.催化合成d.na.子链c.提供模板 d.使d.na.聚合酶能够从引物的3端开始复制【答案】d【解析】pcr技术的原理是d.na.复制，而d.na.的复制需要引物，其主要原因是d.na.聚合酶只能从3端延伸d.na.链。因此，引物的作用是使d.na.聚合酶能够从引物的3端开始复制。4.复性温度是影响pcr特异性的较重要因素。变性后温度冷却至4060,可使引物和模板发生结合。pcr的结果可不考虑原来解旋开的两个dna模板链的重新结合,原因不包括（ ）a.由于模板dna比引物复杂得多b.引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞c.模板链加热解旋已经