CEA方法学验证.doc

CEA方法学验证(Method Validation for CEA)参考方法验证程序、定量检测项目参考区间的建立与验证程序等质量管理程序及相应项目SOP文件。制定方法学验证计划，并收集实验设计中所需临床标本或高值标本开始项目实验，按照实验设计的要求，由各项目负责人按临床常规标本处理实验，之后收集数据并进行方法学统计和评价完成方法学验证，并形成纪录。盛楠负责实验设计和后期的实验数据统计。何增超负责临床标本的收集和实验中所需定值高值样本的获取及方法学验证记录的审核。其他各项目负责人负责具体的实验操作及批间实验结果的记录。一检测系统信息(System info)：项目：癌胚抗原（CEA）仪器：GC-2016 放射免疫计数仪试剂及厂商：天津市协和医药科技有限公司检测方法：IRMA二厂商的相关参数(Reference parameter)：厂商参数验证结果批内精密度CV10Mean（ng/ml）CV（）138.5330.062.105.944.637.29批间精密度CV15详见批间质控精密度数据表分析灵敏度0.20 ng/ml0.20 ng/ml分析测量范围（AMR）0-160 ng/ml0-160 ng/ml临床报告范围（CRR）无0.20-16000 ng/ml参考值区间0-10 ng/ml0-10 ng/ml三验证过程(Process)1准确度（Accuracy）：用回收实验评价。收集线性范围内病人混合血清样本为基础样本，分别加入蒸馏水、高（H=160）、中（M=80）、低（L=10）标准品，进行回收试验，加入量与基础样本比率为1：9，每个浓度测定两次，求出平均值，计算回收率（R）。R=回收浓度/加入浓度100%。R在90%110%之间表明合格。分析样品测得浓度均值回收浓度加入浓度回收率样本+蒸馏水21.14样本+H36.8215.6816.0098.00样本+M28.707.568.0094.50样本+L22.110.971.0097.00平均96.50回收率在合格范围内，故本次实验准确度合格。注：CEA本有参加室间质评，因最近更换了试剂方案质评结果尚未回报，故先以回收试验代替，等有回报结果时再行更新。2精密度（Precision）：21批间精密度(Between-run precision)：取最近三个月的室内质控数据，列于下表：高值H：月份例数（n）均值（X）SDCV32723.93.012.542226.11.76.452627.01.76.3累积统计低值L：月份例数（n）均值（X）SDCV3274.90.815.74225.60.610.45265.60.711.6累积统计注：5月份开始换用了新的试剂方案，与3、4月份的质控系统不同，故未做累积统计。每月室间质控由实验室经理审核并签字，批间精密度合格。22批内精密度(Within-run precision)：选择在医学决定水平附近的病人样本混合血清，在同一批次内测定10个数据，测定时带质控，且质控在控，统计所得数据，得：Mean（ng/ml）SDCV（）138.538.235.9430.061.394.632.100.157.29各水平的批内精密度均小于允许限10，合格。3线性范围（Linearity range）：取该试剂另一批号标准品高（H=160）、低（L=0）值样品按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H关系各自配置混合，重复测定两次，求出各自均值与预期值对应： 配置测量均值Y预期值X4L003L+1H43.29402L+2H79.57801L+3H121.871204H162.03160得直线回归Y=bX+a ，若b在0.97-1.03范围内，a接近于0，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度；若b不在0.97-1.03范围内，a较大，舍去高或低值组数据，另作回归统计。直至缩小的分析范围其回归方程中a和b的判断符合要求，则该范围为线性范围。用直线回归对数据进行统计，得：a=-0.77，b= 0.99，r=1.00故线性范围0-160浓度在实验已涉及，该线性范围通过验证。4.分析灵敏度(Analytical Sensitivity)：在RIA或IRMA中一般用测零剂量管方法确定。测定10个零剂量管的cpm，求出其平均数X和标准差SD，再计算X-2SD（RIA）或X+2SD（IRMA），以此数在标准曲线上计算或查出相对应的剂量，就是灵敏度。CPM均值XSDX2SD灵敏度140362120.02本次实验灵敏度为0.02 ng/ml，小于厂商参数0.20 ng/ml，合格。5临床可报告范围（Clinical reportable range，CRR）：按照试验设计，并参考该项目临床意义，对超出线性范围的标本应做稀释，稀释因子为2，依次递比稀释至1：128，对在线性范围内的值与预期值比较，并求其与真实值的比， 80-120%为合格的稀释倍数范围。实验中的高值标本是从试剂商处直接获得定值干粉160ng，为中国药品生物制品检定所第541-0106号，用蒸馏水做递比稀释，试验结果及比值（R）如下表：稀释倍数1248163264128实测值均值210.62157.2282.4140.4620.9011.255.342.49预期值3201608040201052.50R（）98.26103.01101.14104.48112.45106.7099.60可见，该项目的手工稀释倍数在理论上是可以一直稀释下去的，直至其稀释后的值落在测量线性范围内，直至在系列稀释中存在的等比递增的系统误差明显影响到稀释的合格度。在实际实验室操作中，为简化步骤和节约成本而不影响检测质量，选取两个跨度的稀释点，即1：10和1：100，通常即可对临床高值标本做出测量，仍未能稀释出者则报告大于100倍的稀释数即可。6.干扰物质(Interfering Substances)： 参照说明书，脂血应高速离心，严重溶血标本应重取标本。同NCA、NCA-2及BGPI无交叉反应。7参考区间（Reference intervals）：收集20例符合建立参考范围的标本，年龄、性别等均匀分布，对该项目参考范围进行验证。只允许有5%的数据超出所验证的参考范围，否则需建立参考范围。CEA参考范围为0-10 ng/ml，经验证，超出所验证范围比例为0%。故参考区间通过验证。注：本次方法学验证所涉及到的实验数据见附件。CEA准确度验证更新，更新时间2007-7-23。2007年6月6日参加卫生部临床检验中心开展的全国肿瘤标志物室间质评，2007年7月20日回报统计结果，如下：项目：CEA ng/ml样本编号我室结果靶值偏倚(%)允许范围我室得分(%)20071116.216.6-2.41