反相色谱测定有机化合物中甲苯的含量.doc

反相色谱测定有机化合物中甲苯的含量 （05级化教4班 乔志凤 40507118 ）一、实验目的 1.了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作；2.了解反相色谱的基本规律；3.掌握利用内标法进行色谱定量分析的实验方法。二、实验原理在液相柱色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相，并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器来完成。这种色谱法称为高效液相色谱法（HPLC）。主要分为四类，即液固吸附色谱、液液分配色谱、离子交换色谱和分子排阻色谱。其中液液分配色谱是根据不同组分在两种互不相溶的液相中的分配系数不同而实现分离的，流动相的极性小于固定相的化学键合相色谱称为正相色谱，流动相的极性大于固定相的化学键合相色谱称为反相色谱。反相色谱的特点是流动相的极性大于固定相的极性。由于甲苯和对氯硝基苯在色谱体系中的分配能力不同，即容量因子k不同，因此保留时间tR不同，在色谱图上呈现不同位置的色谱峰。采用内标法定量时，首先将一定量的甲苯标准品（Wi）与对氯硝基苯（Ws)的标准品分别进行色谱分析，测得的峰面积分别为Ai和As，求出相对校正因子f。 f=(As/Ai)*(Wi/Ws)样本分析时，将一定量的对氯硝基苯标准品（Ws）加入预测样品中，进行色谱分离，测得峰面积分别为As和Ai，样品中甲苯的量为：Wi=f(Ai/As)Ws高效液相色谱仪的基本组成如下图所示：1流动相系统 2高压输液泵 3进样器 4色谱柱5检测器6工作站 7废液瓶 旋转六通阀示意图三、仪器与试剂色谱仪：Agilent 1100,色谱柱：C18柱，150mm4.6mm;流动相：甲醇:水（80:20），流速：0.8mL/min;检测器：紫外检测器 254nm.四、实验步骤1、确定实验条件流动相：甲醇80%、水20%，流速0.8ug/min,检测波长254nm等2、溶液的配制(1)内标物溶液的配制：准确称取一定量的对氯硝基苯纯品，加甲醇溶解后制成50g/mL的标准溶液 ；(2)甲苯标准溶液的制备：准确量取一定量甲苯的标准品，加甲醇溶解后制成19mg/mL的标准溶液 ；(3)样品溶液的制备：准确移取适量样品，加甲醇超声溶解，定容于100mL容量瓶中，过滤备用。3、相对校正因子的测定分别取5L甲苯标准溶液和5L对氯硝基苯标准溶液，待仪器稳定后，注入溶液，记录色谱图。f=As Wi/Ai Ws4、样品分析按照内标物量/样品量=1/2的量配制样品溶液，待仪器稳定后，注入5L混合溶液，记录色谱图。Wi=f Ai Ws /As五、数据处理1、相对校正因子:有图可知：As=505.22;Ai=8556.29;f=As Wi/Ai Ws=505.22*19*5/8556.29/50/5/1000=22.442、样品中甲苯的含量：有图可知：Ai=4909.15;As=140.17Wi=f Ai Ws /As=22.44*4909.15*50*5*1/3/1000/140.17=65.49ug mB=65.47*3*1000/1000/5/2=19.63mg/mL 3：绝对误差为 |19-19.63|=0.63 相对误差为0.63/19*100%=3.32%误差分析： 1注入时速度不是太快，影响了保留时间值，从而出现误差； 2配制溶液时，操作不太规范，影响含量，从而影响测定值。六、注意事项1、检查流动相是否充足，储液罐要密闭。2、流动相有气泡要脱气，否则影响灵敏度。3、待仪器稳定后，再进样。4、进样器要充分洗涤，不可有气泡。5、实验完成后用100%甲醇冲洗色谱柱。七、思考题内标法与外表法比较，它有什么优点？答：内标法可以消除因为