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实验二琼脂糖凝胶电泳 一 实验原理 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子 可以形成具有刚性的滤孔 凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷 在外加电场作用下向正极泳动 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时 有电荷效应与分子筛效应 不同DNA的分子量大小及构型不同 电泳时的泳动率就不同 从而分出不同的区带 二 实验目的 通过此实验操作 掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和技术 植物基因组DNA电泳仪 电泳槽 电子天平 移液器 枪头 微波炉 紫外透射检测仪等 琼脂糖 1 TAE电泳缓冲液 溴化乙锭 EB 6 载样缓冲液 0 25 溴酚蓝 0 25 二甲苯青 40 蔗糖水溶液 0 25 溴酚蓝 0 25 二甲苯青 30 甘油水溶液 三 实验材料 器具及药品 一 制胶 1 准备好凝胶成型器 插入成型梳 2 将0 8g琼脂糖加至100ml1 TAE缓冲液中 摇匀 在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化 冷却至60 以下 3 加入5ul溴化乙锭 终浓度0 5ug ml 至熔化的琼脂糖液中混匀 注意避免出现气泡 4 将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器 制备凝胶 四 实验步骤 二 电泳 1 待胶变硬 直到它呈乳白状且不透明 约20分钟 小心垂直向上拔出梳子 将凝胶置入电泳槽中 加1 TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1 2mm 2 用移液器吸取2 l的6 载样缓冲液于封口膜上 再加入5 l样品 混匀后 小心加入点样孔 3 接通电源 调节电压至4 5V cm DNA从负极移到正极 电泳时间30 60分钟 4 电泳结束 关掉电源 1 将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统的平台中间 2 开通紫外光 可见到发出荧光的DNA条带 在电脑中观察图像 3 关上紫外光电源 在电脑中编辑和保存图像 4 根据图像判断结果 五 结果分析 图1玉米基因组DNA1 琼脂凝胶电泳图 图2PCR产物琼脂凝胶
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